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(1)暗视野显微镜检查组织及体液中螺旋体 对不洁性交后的生殖器溃疡、硬结性溃疡，用暗视野显微镜检查。这是一个十分可靠的梅毒实验室诊断方法，尤其对早期梅毒的诊断具有十分重要的价值，但也有其他因素影响检查结果。
(2)梅毒血清试验 一般可用康-华氏试验，或先用性病研究实验室(VDRL) 试验或不加热的血清反应素试验做筛选，然后以康-华氏试验证实。若有条件，可用特异试验——荧光梅毒螺旋体吸收试验、梅毒螺旋体血凝试验。梅毒血清试验反应也有假阳性可能，其原因可能与其他疾病或生理状况发生变化有关。
(3)脑脊液检查 梅毒螺旋体侵犯中枢神经系统后，早期即可用脑脊液来发现梅毒螺旋体。脑脊液中细胞计数，若白细胞＞10／mm3，提示中枢神经系统有炎症现象；蛋白测定中总蛋白量增加或两种蛋白的比例发生改变，即为不正常，正常脑脊液中总蛋白量为10～40毫克／100毫升。