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免疫组化所用的抗体有多克隆抗体和单克隆抗体两大类。前者制备方便、敏感,可用于石蜡切片,但非特异性交叉反应多;而后者抗原特异性强,但使用时以新鲜标本和冰冻切片为好。
目前比较常用的免疫组化方法是PAP法(辣根过氧化物酶-抗辣根过氧化物酶法)和ABC法(卵白素-生物素法),而ABC法更为常用。ABC法是利用蛋青中提取的一种糖蛋白-亲和素(A)能与4个生物素(B)结合的能力,用2种抗体逐级放大。第一抗体(Ab1)与组织中的待测抗原结合,第二抗体是生物素标记的兔抗鼠Ig(Ab2),能与Ab1结合,然后加入酶标记的亲和素,再加底物显色,形成Ag-Ab1-Ab2-B-A-酶-底物的反应模式,可对待测抗原进行定性和定位。
免疫组化检测显示以下标记物在乳腺癌中可以有不同程度的阳性表达:bcl-2、c-erbB-2、Cathepsin D、Collagen Ⅳ、CyclinD1、Cytokeratin8、Cytokerat in18、Cytokeratin19、CD31、EGFR、EMA、ER、Ki-67、nm23、pS2、p16、p21、p53、PR、 Rb、SMA、topoisomerase Ⅱ-α等。以上标记物有些可作为乳腺癌诊断指标,有些可作为乳腺癌治疗及预后判断的指标。用免疫组化方法进一步研究这些乳腺癌标记物,对于研究乳腺癌的癌变过程及其生物学行为具有重要意义。