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摘 要 近年来使用得组蛋白及合成肽的研究表明，在HCV膜区存在多个B细胞表位，抗外膜蛋白抗体的检出率高度依赖于抗原获得的方法、不同的感染阶段以及检测模式，随着噬菌体呈现技术、转细胞技术、核酸免疫技术等用于HCV感染的致病机理及疫苗研究，对进一步完善和发展有较HCV疫苗提供了新的途径。
丙型肝炎病毒（HCV）是输血后非甲非乙型肝炎以及社区获得性肝炎的主要病原因子，虽然通过对献血者进行抗-HCV的筛选使输血后HCV的感染率得到了显著的降低，但在高危人群中仍存在社区获得性的HCV感染，目前全世界约有1.7亿HCV感染者,其中约有50%急性感染者转变为慢性,进而发展为肝硬化和肝细胞性肝癌.HCV感染后缺乏有效的保护性免疫。可能的原因是：（1）HCV高度变异，逃避机体的免疫清除；（2）HCV在肝组织及血液中含量低及诱导机体产生保护性的抗原性弱；（3）病毒颗粒与低密度脂蛋白或免疫球蛋白紧密联接，导致抗原决定簇被掩盖；（4）外周血淋巴细胞可能有HCV储存库的作用[1]，对HCV感染目前还有一种有效的治疗手段，慢性HCV感染者对-α干扰素的反应可低至15%～25%，其它抗病毒核酸类似物的效果甚微，因此，需要提高治疗手段及发展有效的疫苗以控制HCV感染。HCV的包膜蛋白是宿主攻击的主要目标，一直都是HCV疫苗研制的首选抗原。本文概述了近年来对HCV包膜蛋白的体液免疫及疫苗研究等方面的进展。
1 HCV包膜糖蛋白的结构特征
HCV属于黄病毒家族的一员，其基因组全长约9.4kb，编码3010～3 033个氨基酸的多蛋白前体，结构蛋白（核心蛋白C，包膜蛋白E1和E2）在宿主内质网中信号肽酶的作用下[2，3]，裂解出包膜蛋白E1和E2对应的氨基酸位置分别为E1：192～383；E2：384～809。E1糖蛋白是一个约30～35kD的糖基化蛋白，含N-糖基化位点5～6个，脱糖基后为21kD。E2糖蛋白含糖基化位点约11个，其糖蛋白的分子量为58kD～70kD，在内源性糖基化酶的作用下，得36kD～40kD的脱糖基蛋白[4]。目前的研究表明，HCV e1、E2蛋白通过非共价键相连形成异源二聚体，代表了HCV包膜糖蛋白的天然构象。E2的N端为高变区（HVR），HVR1位于氨基酸的384～411，日本学者的研究显示，在474～480位存在第二个高变区（HVR2），但对它的研究相对较少。
2 HCV包膜糖蛋白的体液免疫
2.1 HCV外膜区B细胞表位。病毒的包膜蛋白对于宿主产生体液免疫反应很重要，因为宿主首先接触的是包膜蛋白，而且这些蛋白的表达水平较高；宿主的保护性免疫常依赖于针对病毒表面蛋白的抗体，该抗体能阻断病毒与敏感细胞的结合，也可能通过加强细胞免疫清除病毒，因此，研究针对HCV包膜蛋白的体液免疫具有重要意义。HCV感染后血清中病毒含量极低，同时目前缺乏有效的体外培养系统及合适的动物模型繁殖病毒，无法获得大量的天然病毒抗原，目前只能通过合成肽或基因重组的方法，获得HCV包膜蛋白抗原，用于研究HCV感染者中针对HCV包膜蛋白的免疫特征。
根据外膜区推测的相应氨基酸序列，合成一系列相互重叠的多肽作为抗原，可对外膜区的抗原表位进行定位。Ray的研究表明，在E1区存在两段潜在的表位，P1：210～223，P2：315～327，P1位于变异较大的区哉，P2位于高度保守的区哉，在38份感染者血清标本中，有35份（92%）与P2反应，仅17份（44 .7%）与P1反应[5]。Jackson等的研究认为，代表E1、E2非高变区肽20段中仅1段与45份抗-HCV（+）血浆标本有明显的反应，而代表高变区的24个肽中有18个与抗-HCV（+）的血浆标本反应，且40%的血标本与两个以上的肽起反应，其中有的肽段的差异达50%以上，有两份血标本与7个不同的肽序列有交叉反应，结果表明，许多抗-HCV（+）的标本中有广泛的抗高变区抗体存在，可能这些抗体限制了高变区序列的变异[6]。多数研究认为在HVR1存在中和性的抗原表位，而在HVR2则没有，目前认为，HVR1的B细胞表位包括：400～409aa[7]、398～410aa[8]以及399～405aa[9]。
这种使用合成肽鉴定表位的技术也存在一些问题。首先，合成肽只能反映线性表位，而忽视了外膜糖蛋白中的许多构象型表位。其次，鉴定出的表位能否在体外诱导中和性抗体，在体内产生保护作用还有待进一步研究。
2.2 HCV抗外膜蛋白抗体的检出及意义。使用HCV重组外膜蛋白作为抗原检测HCV感染者中抗外膜蛋白的抗体，其检出率在不同研究者中的差异很大。多方面的因素影响抗外膜蛋白的检出。首先，抗外膜蛋白抗体的检出高度依赖于抗原产生的方法。使用来自E.coli的E2的融合蛋白作为抗原，在HCV感染者中的检出率低至20%。而使用糖基化形式外膜蛋白作为抗原，在HCV rNA阳性慢性携带者中抗体的检出率可达97%[10]。在缺乏E2的情况下，针对重组E1的反应较低，Kohara用痘苗病毒表达的E1（gp35）作为抗原，仅在少许NANBH患者（7%～23%）的血清中检测到抗体，尽管在这些患者中抗-核心、抗-NS3的抗体检测可高达90%～95%[11]。目前对HCV外膜蛋白的结构研究表明，E1的正确折叠和抗原性依赖于E2，这可解释重组E1在缺乏E2时的微弱免疫反应，表明E1和E2均是HCV疫苗必不可少的成分。因此，将E1、E2在合适的表达系统中共表达，获得具有与天然构象相似的膜抗原，对于发展有效的疫苗是有帮助的。其次，抗外膜蛋白抗体的检出率与HCV感染的不同阶段密切相关。慢性HCV感染者的检出率较急性者为高，而且，在慢性感染的不同阶段，针对HCV蛋白的抗体都能检测到，说明针对HCV外膜蛋白的反应在肝炎起始后即已开始，并在疾病的慢性阶段进一步发展。最后，使用的实验方法也显著影响抗外膜蛋白抗体的检出，