HLA-Ⅲ类成份及其构成的补体单体型与寻常型银屑病的相关性研究

HLA-Ⅲ类成份及其构成的补体单体型与寻常型银屑病的相关性研究

中华微生物学和免疫学杂志 1999年第1期第19卷 HLA

作者：杨利平　江晓芬　关艳冰　姜晓丹　赵修竹

单位：杨利平（510405 广州银屑病研究所）；江晓芬（第一军医大学）；关艳冰（广州市皮肤病研究所）；姜晓丹　赵修竹（同济医科大学中澳友谊补体实验室）

关键词：HLA-Ⅲ；银屑病；补体型；单体性

　　【摘要 】　目的　研究HLA-Ⅲ类成份及其构成的补体单体型与寻常型银屑病的相关性。方法　对50例无血缘关系的寻常型银屑病(Ps)患者家庭及24例家庭健康成员的EDTA血浆进行属于HLA-Ⅲ的Bf、C4A、C4B的遗传多态性及其构成的补体型检测。结果　通过家庭分析及对比发现：Ps的Bf基因频率与正常人无差异；C4AQ0、C4BQ0的基因频率病人远高于正常人；而C4B2则较常人为小。在补体型方面，患者与正常人均以S32、S31频率最高；S40、S30频率病人虽比正常人高，但经统计学处理后无意义。说明了补体型的检测比单座位的检测更能探求HLA-Ⅲ与疾病遗传的易感性关系。结论　Ps患者的S40之间存在着正向连锁不平衡，S41之间存在着负向连锁不平衡。

　　Association between the complement components and complotypes of MHC classⅢ and universal psoriasis　YANG Liping*,JIANG Xiaofen,GUAN Yanbing,et al.*Guangzhou Institute of Psoriasis,Guangzhou 510405

　　【Abstract 】　Objective　To research the association between the complement components and complotypes of MHC classⅢ and universal psoriasis(U.P). Methods　Genetic polymorphism and complotypes of MHC classⅢ were investigated and analyzed among 50 unrelated families with universal psoriasis(U.P group),which were compared with 24 healthy families (the control).All the data were analyzed and compared,made difference test with "Fisher accuracy probability" method.Results　Genetic frequencies (GF) of Bf in U.P group were not different from the control;GF of C4AQ0,C4BQ0 were considerably higher than that of the control;and GF of C4B2 was lower than that of the control.On the other hand,GF of S32,S31 in complotypes showed higher in both groups;GF of S40,S30 in U.P group were higher than that of the control but no significance in statistics.Conclusion　The results indicate that the determine of complotypes is closely related to susceptibility than that of single alleles in the way of researching the association between sensibility of MHC class Ⅲ and genetic diseases.Among S40 of U.P group,there is a positive linkage disequilibria; and among S41,a negative linkage disequilibria existed.

　　【Subject words】　MHC-Ⅲ　　Psoriasis　　Complotypes

　　银屑病是一种与遗传、免疫、环境等因素有关的多因素疾病^〔1，2〕。近年来国内外的许多研究表明：由遗传决定的主要组织相容复合体(MHC)的第一类、第二类(即人HLA-Ⅰ、Ⅱ)中的某些抗原如A1、B13、B17、B37、DR7等与银屑病明显相关^〔1～4〕。对于与自身免疫性疾病密切相关的MHC第三组补体型(Complotype,即HLA-Ⅲ)与银屑病的关系，日本NaKagawa H等人报道与C4A4、C4B2相关^〔5〕。国内赵氏、翦氏报道过C2、Bf及BfSS亚型的检测情况^〔6～8〕。但对于Ps与HLA-Ⅲ中的C4A、C4B、Bf,尤其是补体型的全面研究，尚未见到国内外的报道。

　　我们采集了50例Ps病例家系(50例病人)的血样本，检测计算补体B因子(Bf)、C4A、C4B的表型分布与基因频率，并通过家系分析求取补体型。

　　材料与方法

　　1.样本：50个Ps病人家系的血样本采自广州市皮肤病防治所银屑病专科门诊及其一级亲属。即一般的每家系采集3个血样，采血后EDTA抗凝，立即离心取血浆分装贮于-80℃的冰箱，检测时解冻。Ps的诊断符合1981年12月中国卫生部编制的《疾病诊断标准》^〔9〕。正常对照为广州市某学校24个健康家系48例份无血缘关系者血浆。

　　2.方法：主要依据武汉同济医科大学中澳友谊补体实验室仿国际C4、Bf标准定型程序而建立的方法进行^〔10〕。

　　3.命名：所有命名均采用国际通用命名法。因C2别型较少，92%以上为C型^〔11〕，故本研究未进行C2检测，直接将Bf-C4A-C4B的组合称补体型。

　　4.统计：按常染色体共显性遗传规律进行家系分析得出病人单倍型。等位基因频率和补体型频率用直接计数法算出。连锁不平衡参数(D值)按Dausset建立的DSM法(deltastandard method)计算。D值为0时表示平衡，D＞0或D＜0分别表示正向和负向连锁不平衡。Ds是除去基因频率影响后的标准D值。仅当D+(或D-)＞25%所检测的补体型数不少于3个时，D值才有意义^〔12〕。别型或补体型与疾病的关联用相对危险率(relative risk,RR)进行衡量：通过正常人与患者间分布频率的比较，求出RR。再用Fisher精确概率法进行差异性的检验，求取概率P值和校正概率值(Pc)^〔13〕。当Pc＜0.01时，求其病因分数(etiological fraction,EF)或预防分数(protective fraction,PF)。确定别型或补体型与疾病是否关联^〔14〕。

　　结　果

　　1.Bf与C4表型及其基因型频率：通过χ²检验发现Bf、C4表型在患者组、正常组中分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡律。在基因型方面，两组中的Bf、C4A、C4B基因频率的比较见表1。从中可见：Bf基因两组间差异无显著性。C4AQ0的基本频率，银屑病病人(0.09)远大于正常人(0.0104);C4BQ0的基因频率，患者(0.01)显著大于正常人(0)，而C4A3则银屑病人(0.60)小于正常人(0.7291)。其它等位基因频率差异均无显著性。银屑病患者C4AQ0的病因分数(EF)为0.0764，C4BQ0的病因分数(EF)为0.1056，带有C4AQ0、C4BQ0的人群患银屑病的可能性为不带者的6.610倍或者24.799倍。Pc分别为0.05或0.0032。C4A3的预防分数(PF)为0.3186,RR为0.562,Pc=0.0978。C4B2的预防分数(PF)为0.3195，RR为0.5937,Pc=0.0204。可见，虽C4AQ0、C4BQ0、C4A3、C4B2在两组的分布差异较大，但其统计学检验只发现C4AQ0、C4BQ0在银屑病组频率与正常组频率差异有显著性。

　　表1　银屑病人与正常人Bf、C4A、C4B基因频率的比较

　　Tablel. Comparison of the frequence of Bf,C4A and C4B between psoriasis patients and the healthy people

		Psoriasis Pationts (50)		Healthy people (48)		RR	P	Pc		EF/PF
		n	f	n	f
Bf	S	87	0.87	82	0.8542
	F	13	0.13	14	0.1458
Total		100	1.00	96	1.0000
C4A	4	26	0.26	21	0.2188		0.1061
	3	60	0.60	70	0.7291	0.562	0.01956	0.0978	PF0.3186
	2	2	0.02	43	0.0417		0.2256
	1	3	0.03	0	0.0000		0.131
	Q0	9	0.09	1	0.0104	6.610	0.0100	0.05	EF0.0764
Total		100	1.00	96	1.0000
C4B	6	1	0.01	0	0.0000	0.5102
	5	3	0.03	3	0.0313	0.3169
	2	40	0.40	57	0.0937	0.460	0.00291	0.0237	PF0.3195
	1	42	0.42	34	0.3542		0.0749
	Q0	11	0.11	0	0.0000	24.799	0.000459	0.0032	EF0.1056
	92	2	0.02	0	0.0000		0.259
	96	1	0.10	2	0.0208		0.3690
Total		100	1.00	96	1.000

　　2.补体型频率：所检测50例银屑病患者家系分析求得19种补体型，其中频率最高的6种补体型为：S32(0.24)，S31(0.24)，S42(0.11),F31(0.05),S40(0.05),S30(0.05)。其中S40、S41分别呈正向或负向不平衡(表2)。

　　　　　表2　银屑病人的补体型频率及其D、Dmax、Ds值(n=100)

　　Table 2. Frequencies for complotypes of psoriasis patients and their values of D、Dmax and Ds

Complotype	Number(n=100)	Frequency	D value	Dmax	Ds
S32	24	0.24	0.0312	0.1912	0.1632
S31	24	0.24	0.0208	0.2008	0.1036
S42	11	0.11	0.0196	0.1695	0.1156
F31	5	0.05	0.0172	0.0972	0.1770
S40	5	0.05	0.0251	0.0851*	0.2949
S30	5	0.05	-0.0074	-0.0574	0.1289
F41	4	0.04	0.0258	0.1158	0.2228
S41	3	0.03	-0.065	-0.0950*	0.6842
S02	3	0.03	0.0013	0.0587	0.0221
S35	2	0.02	0.0044	0.0143	0.3077
S11	2	0.02	0.009	0.0190	0.4737
F21	2	0.02	0.0189	0.0189	1.0000
S01	2	0.02	0.0129	0.0571	0.2259
F42	2	0.02	0.0065	0.1165	0.0558
S092	2	0.02	0.0184	0.0184	1.0000
S10	2	0.02	0.0071	0.0271	0.2620
S096	1	0.01	0.0092	0.0092	1.0000
S05	1	0.01	0.0077	0.0277	0.0278
S46	1	0.01	0.0077	0.0077	1.0000

　　*The value is statistically significant for determining the complotype existing linkage disequilibrium3.补体型在银屑病和正常组中的分布比较：从表3中可见S40、S30分布差异较大，可能与银屑病相关，其病因分数为0.0455,带有这个补体型的人群患银屑病的危险率为不带这个补体型人群的11.115倍，P=0.0329＜0.05,但Pc=0.3619。

　　　　　　　　　　　　表3　银屑病人与正常人补体型的比较

　　Table 3. Comparison for complotypes between psoriasis patients and healthy people

Complotypes	Psoriasis patient(100)		Healthy people(96)		RR	P	Pc	EF
	n	f	n	f
S32	24	0.24	31	0.3229
S31	24	0.24	31	0.3229
S42	11	0.11	14	0.1458
F31	5	0.05	1	0.1458
S40*	5	0.05	0	0	11.115	0.0329	0.3619	0.0455
S30*	5	0.05	0	0	11.115	0.0329	0.3619	0.0455
F41	4	0.04	2	0.0208
S02	3	0.03	1	0.0104
S35	2	0.02	3	0.0312
F42	2	0.02	4	0.0416
Dther	15	0.15	9	0.09375

　　*The difference of distribution is signficant between the complotypes S40 and S30

　　讨　论

　　关于银屑病与遗传、免疫的关系，尤其是HLA-Ⅰ、Ⅱ，国内外曾进行大量研究。而HLA-Ⅲ在中间的作用，至今报道甚鲜。1989年NaKagawa H等人曾报道C4A4、C4B2与日本银屑病患者关联。并设想C4B2-BFS-C2C-DRw8可能是银屑病患者的一种高危险扩展单体型^〔5〕。但报告病例甚少(＜10)。国内主要由武汉同济医科大学中澳友谊补体实验室作过一些关于银屑病与HLA-Ⅲ方面的研究^〔6～8〕。如银屑病患者的C2表型分布与基因频率(0.9828)、Bf的多态性、BfSS亚型的检测^〔15〕。仅发现BfSA-SA亚型的表型的频率(31.15%)高于正常(19.32%)，意义具有显著性(P＜0.05)。

　　本文报告的C4AQ0的基因频率银屑病人(0.09)远大于正常人(0.0104,陈氏报告的0.0476),C4BQ0的基因频率银屑病人(0.11)亦大于正常人(0，陈氏报告的0.0119),本文正常人结果与陈氏报告基本一致^〔16〕。统计学处理差异有显著性(P＜0.01)。这可能是S40呈正向连锁不平衡的基础。C4A3、C4B2 P值虽＜0.05,但经校正后则＞0.05，可以扩大样本数继续研究。其本质可能由于C4AQ0、C4BQ0属于原发性升高，C4A3、C4B2抗原频率则继发性升高。

　　银屑病人与正常人的补体比较，S40、S30 P值＜0.05，Pc值差异却无显著性。说明了补体型的检测比Bf、C4A、C4B单座位的检测更能探求HLA-Ⅲ与疾病遗传的易感性关系。

　　总而言之，银屑病患者的HLA-Ⅲ可能具有独特的遗传背景。今后应在扩大样本数的基础上，从DNA水平作进一步的研究。

　　志谢：本项目承蒙肖应庆、孙心郁、刘玉生、黄添友老师的大力支持，谨此感谢!

　　本项目受广州市卫生局青年科研基金资助

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(收稿：1997-09-23　　修回：1997-11-27)