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重症肌无力患者外周血白细胞糖皮质激素受体的检测
中国神经免疫学和神经病学杂志 1999年第2期第6卷 论著
作者：刘 敏 丛志强 申黎青*
单位：青岛医学院附属医院神经科，青岛 266003
关键词: 重症肌无力；白细胞；糖皮质激素受体
摘要 目的 探讨重症肌无力患者外周血白细胞糖皮质激素受体含量与重症肌无力发病的关系。方法 用放免法测定重症肌无力患者血浆糖皮质激素水平，用放射配体结合法测定其外周血白细胞糖皮质激素受体含量。结果 测定前2个月未曾接受糖皮质激素治疗的患者，其白细胞糖皮质激素受体平均值为(6799±2055)位点/细胞，与对照组(2839±1787)位点/细胞相比，位点数明显增高(P＜0.001)。与患者的性别、年龄及疾病的临床类型无关。重症肌无力患者血浆皮质醇浓度为(458±170) nmol/L，正常对照组为(413±156) nmol/L，二者无明显差异(P＞0.05)。结论 重症肌无力患者外周血白细胞糖皮质激素受体含量增多，可能与重症肌无力发病有关。
中图号 R746.1
Detection of Glucocorticoid Receptors of Peripheral Blood
Leukocytes in Myasthenia Gravis
Liu Min Cong Zhiqiang Shen Liqing
(Department of Neurology, Qingdao Medical College, Qingdao 266003)
Objective To investigate the relationship between the glucocorticoid receptor (GCR) binding in peripheral blood leukocytes (PBL) of myasthenia gravis (MG) patients and its pathogenetic role.Methods The concentration of plasma glucocorticoid (GC) was measured by radioimmunoassay and level of peripheral leukocytes receptor was measured by radio-ligand-binding assay.Results GCR binding mean values were (6799±2055) sites/cell in PBL of 43 MG patients who had not received glucocorticoid since two months ago, which showed significantly higher than that of healthy donors, (2839±1787) sites/cell, (P＜0.001). Sex, age or clinical classification of MG did not influence the results. The blood plasma level of GC in MG patients was (458±170) nmol/L. There was no difference between the patients and donors, (413±156) nmol/L, (P＞0.05).Conclusion The results suggested that the increase of GCR values in MG patients might be involved in pathologic process in MG.
Key words myasthenia gravis; leukocyte; glucocorticoid receptor
重症肌无力(myasthenia gravis, MG)是累及神经-肌肉接头处突触后膜上烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)的自身免疫性疾病。免疫反应如同其他病理因素，可导致机体的应激反应，应激过程中多种激素平衡的改变，反过来又可作用于免疫系统产生免疫调节作用。我们测定MG患者外周血白细胞(PBL)糖皮质激素受体(GCR)及血浆皮质醇浓度，探讨GCR与MG发病的关系，旨在为临床治疗提供科学依据。
1 材料和方法
1.1 研究对象 随机选择来我院就诊的MG患者43例，都有典型的临床表现并经新斯的明试验确诊，测定前2个月均未曾接受糖皮质激素治疗。其中男性23例，女性20例；年龄13～60岁，平均(48±11)岁；病程7天～20年，平均(6±5)年。43例患者按Osserman分型，Ⅰ型16例，Ⅱ型17例，Ⅲ型7例，Ⅳ型3例。选择25名健康人作对照，男13人和女12人，年龄18～55岁，平均(37±13)岁。
1.2 检测方法
1.2.1 外周血白细胞GCR测定：采用放射配体结合法［1］。取当天上午8∶00～9∶00的抗凝血5～6 mL，分离白细胞。用 Hank液 (pH=7.20)将白细胞调成(3～8)×106细胞/mL的悬液，取1 mL白细胞悬液加30 μL3H-Dex(最终浓度11.5 nmol/L)作一点法分析。21℃保温3 h后，PBS终止反应。加体积分数为98%甲酸0.1 mL将细胞完全消化后，加8 mL闪烁液，用TRL-CARB4430液体闪烁计数仪计数。以外道比较法校正所得 Bq值为总结合，用加相同浓度3H-Dex和再加1800～2000倍醋酸地塞米松的平行测定管的 Bq值为非特异结合，总结合减去非特异结合 Bq值为特异性结合 Bq值，再换算成结合位点/细胞。
1.2.2 血浆皮质醇测定：按药盒说明书操作(中国同位素公司北方试剂研究所)。
1.3 统计学处理 采用未配对计量资料t检验，多个样本均数的方差分析，直线相关分析。
2 结果
2.1 正常人及MG患者PBL的GCR水平 MG患者PBL的GCR水平较正常人明显增高(P＜0.001)(表1)。不同型的MG患者GCR含量见表2，各型患者的GCR数较正常人均明显增高(P＜0.001)，各型间按随机设计的多个样本均数比较的方差分析,结果差异无显著性(P＞0.05)。
表1 MG患者PBL的GCR含量
Table 1 The glucocorticoid recepter binding in PBL
of MG patients (sites/cell,
| Group | Cases | GCR content | GCR range |
| MG | 43 | 6799±2055 | 3583～10170 |
| Control | 25 | 2839±1787 | 1794～4513 |
表2 不同型MG患者的GCR含量(sites/cell)
Table 2 The GCR binding in MG patients of different clinical
classification (sites/cell,
| Osserman classification | Cases | GCR content | GCR range |
| Ⅰ | 16 | 6836±1721 | 3583～8779 |
| Ⅱ | 17 | 7376±2182 | 4319～10170 |
| Ⅲ | 7 | 1238±1973 | 3995～5681 |
| Ⅳ | 3 | 7361±1817 | 4921～9800 |
2.2 MG患者PBL的GCR含量与血浆皮质醇浓度的关系 MG患者血浆皮质醇浓度为(458±170) nmol/L，正常对照组为(413±156) nmol/L，二者无明显差异(P＞0.05)。患者白细胞GCR含量与其血浆皮质醇浓度的相关性不显著(r=0.17, P＞0.05)。
3 讨论
3.1 MG患者PBL的GCR增多的原因 本组研究发现MG患者白细胞GCR水平增高，与国内外报道不尽一致［2，3］。一般认为白细胞GCR的变化能反映体内GCR水平的变化，MG患者白细胞GCR位点数增多可能与MG发病存在一定关系。MG是针对横纹肌 nAChR的自身免疫性疾病，患者血中抗AChR抗体滴度升高，CD4+/CD8+细胞比例上升。免疫反应如同其它病理因素，可导致机体的应激反应，应激过程中多种激素平衡的改变，反过来又可作用于免疫系统产生免疫调节作用。已有研究表明，对抗原的抗体应答到高峰时，血浆糖皮质激素水平升高。唐术成等［4］报道，使 sRBC致敏小鼠产生针对 sRBC的免疫应答，在免疫应答最高峰时脾脏淋巴细胞GCR位点数较对照组明显增高。这说明机体对抗原的免疫过程中存在着血浆糖皮质激素及靶细胞GCR共同形成的免疫调节作用，使机体抗损伤能力增强，促使机体内稳态尽快恢复正常。免疫反应可能是MG患者白细胞GCR增多的原因之一，但其血浆皮质醇浓度不增高，原因有待于进一步探讨。
Brentani［3］考虑MG患者白细胞GCR含量增多可能与患者淋巴细胞亚群分布异常有关。虽然B细胞、T细胞的GCR位点数相差不大［5］，但MG患者血中存在着大量能同时对抗Th细胞抗体和抗Ts细胞抗体反应的未成熟T细胞［6］，这些细胞可能有较多的GCR位点数，从而在一定程度上使MG患者白细胞GCR含量增多。
3.2 MG患者GCR增多的临床意义 一般情况下，甾体激素要对组织或细胞发挥调节作用，必须与细胞内相应的受体特异性结合，形成激素-受体复合物，通过影响核内基因的表达而产生生物学效应。在平衡解离常数不变的前提下，当受体浓度增多时激素-受体复合物的生成便增多，靶细胞的反应也就增高。MG患者淋巴细胞GCR的平衡解离常数正常［3］，我们的研究发现血浆皮质醇浓度正常，而白细胞GCR含量增多。因此，增加糖皮质激素浓度，即应用糖皮质激素治疗MG，就能在一定程度上增加激素-受体复合物的生成，提高激素对靶细胞的效应。
MG患者外周血淋巴细胞总数、B细胞、CD4+细胞及其亚群数量正常，而CD8+细胞明显减少［7］且功能下降。不同T细胞亚群GCR含量不同，其中CD8+细胞上有较多的地塞米松受体［8］。依据有关受体的低亲和力结合部位的研究［9］，推测CD8+细胞的GCR可能有较多的低亲和力结合位点，生理浓度的糖皮质激素不能与之结合，而药理浓度的激素可与低亲和力结合位点作用，提高CD8+细胞的功能活性，加强对B细胞的抑制。同时，大剂量糖皮质激素能抑制患者外周血白细胞化学趋向移动，使淋巴细胞尤其是CD4+细胞转移到骨髓，降低CD4+/CD8+比值，从而抑制B细胞分泌抗体。青岛医学院附属 医院神经病学研究室
参 考 文 献
1 田 英，徐仁宝.人周围血白细胞糖皮质激素受体的测定.中华核医学杂志，1983，3：27-30
2 蒋建明，涂来慧，张仁琴.重症肌无力患者白细胞GCR检测及其临床意义.中华神经精神科杂志，1993，26：341-343
3 Brentani MM, Marchiori PE, Martins VR. Glucocorticoid receptors of mononuclear leukocytes from myasthenia gravis patients. Acta Neurol Scand, 1985, 72:188-192
4 唐术成，苏宝田，史敏言.免疫反应对GCR的影响和意义.中国病理生理杂志，1991，7：445-448
5 Lippman M, Barr R. Glucocorticoid receptors in purified subpopulations of human peripheral blood lymphocytes. J Immunol, 1977, 118:1977-1981
6 Berrih S, Gand C, Bach MA, et al. Evaluation of T cell subsets in MG using anti-T cell monoclonal antibodies. Clin Exp Immunol, 1981, 45:1-8
7 Schimizu H, Ichikawa Y, Yoshida M, et al. Lymphocyte subsets of the peripheral blood in myasthenia gravis determined by two-color flow cytometry. Autoimmunity, 1990, 6:173-182
8 Distelhorst CW, Benutto BM. Glucocorticoid receptor content of T lymphocytes: evidence for heterogeneity, J Immunol, 1981, 126:1630-1634
9 乐颖影，钱国正，隋黎明，等.糖皮质激素的低亲和力位点.中国药理学报，1991，12：358-362
(1998-04-21收稿)