可溶性TNF受体在大肠杆菌中表达

可溶性TNF受体在大肠杆菌中表达

中华微生物学和免疫学杂志 1999年第1期第19卷 细胞因子

作者：梁小兵　周洁　刘学博　孔祥英　詹轶群　李胜华　郭庆福　高杰英

单位：100850 北京，军事医学科学院微生物流行病研究所

　　TNF受体（TNFR）通过介导TNF的信息而在炎症、肿瘤坏死、细胞增殖、分化及凋亡中发挥着重要作用。TNFR信号传导机理及其在诱导细胞凋亡和激活核因子 NF-KappaB之间的平衡是目前研究的热点。为了探索TNFR在炎症及肿瘤细胞中的作用，我们克隆并表达了TNFR膜外区蛋白（sTNFR）。

　　根据已发表的人TNFR膜外区基因序列设计合成一对引物，两端分别引入 XbalⅠ酶切位点，以含人TNFR-p55全长cDNA的pUC-19质粒为模板，扩增出516bp 的膜外区cDNA。基因扩增片段与表达载体pGEX-KG经XbalⅠ酶切、连接、转化大肠杆菌JM101，构成新的重组子pGK-sTNFR。重组质粒经XbalⅠ，TaqI酶切鉴定及采用双脱氧链终止法对sTNFR进行DNA序列分析表明，所克隆的sTNFR基因与报道的一致（见图1）。

　　　　　　　　　　图1　pGK-sTNFR表达质粒的酶切鉴定

　　D:MW marker， C:pGK-sTNFR，B:pGK-sTNFR digested with TaqⅠ，A:pGK-sTNFR digested with XbalⅠ

　　转化菌经IPTG诱导表达4小时，细菌裂解物进行SDS-PAGE分析， 发现在分子质量为4.3×10³处出现明显GST-sTNFR融合蛋白诱导表达带，大小与预计的理论值相符，表达量占全菌总蛋白的15％左右。重组蛋白以包涵体形式存在，经溶解、变性、复性、GST-Sepherose 4B 亲和层析纯化、凝血酶裂解融合蛋白，得到 sTNFR 蛋白。Western blot 分析表明：表达产物为sTNF受体蛋白。

（收稿：1998-08-26　　修回：1998-10-15 ）