金莲花水浸提取液抗病毒的实验研究

金莲花水浸提取液抗病毒的实验研究

中华微生物学和免疫学杂志 1999年第1期第19卷 病毒学

作者：温云海　林岳生　黄海　刘小朋　魏国志　付芬兰　吴佩环　杨才生

单位：温云海　刘小朋　魏国志　付芬兰　杨才生（350002 福州，解放军476医院）；黄海（福建中医学院）；林岳生　吴佩环（龙岩市第一医院）

　　金莲花(Trollius chinensis Bge)广泛分布于我国东北、华北和内蒙一带，药源丰富，具有抗菌作用，民间广泛用于治疗呼吸道和肠道等感染^〔1〕。我们将其水浸提取液作了体外抗病毒试验。

　　材料与方法

　　1.材料

　　(1)金莲花由内蒙古牙克石市图里河林业局卫生科张奎兰等提供。自制成0.5g/ml水浸提取液。

　　(2)Hep-2细胞和腺病毒（Ad）7型和21型、CoxB3和A24变异株、ECHO18型、PolioⅠ型等病毒由福建省防疫站提供。

　　2.方法

　　(1)用96孔微量板，常规法培养好Hep-2单层细胞。测定药物对Hep-2细胞的毒性及抗病毒试验。细胞在37℃　5% CO₂培养箱中培养。每日光镜下观察两次，用“-～++++”记录药物对细胞的毒性。

　　（2）抗病毒试验： 用维持液将药液稀释成对细胞无毒浓度（3.905mg/ml），将各种病毒液稀释成100 TCID₅₀。①先加药液37℃培养2小时后弃药加病毒液；②药液和病毒混合，37℃作用1小时后加入细胞孔中；③先加病毒，37℃培养2小时后，弃病毒加药。每种病毒加4孔，每孔200μl，3组均设无药的病毒对照和正常细胞对照。37℃　5％CO₂培养箱中培养，光镜下每日观察两次细胞病变（CPE）情况，用“－～++++”记录试验孔细胞病变程度。

　　结果与讨论

　　金莲花水浸提取液对Hep-2细胞的毒性与浓度成正比，浓度小于3.905mg/ml时，细胞生长正常，可维持1周。浓度为3.905mg/ml时，无论先加药后染病毒，先染病毒后加药，药物病毒作用1小时后同时加入，均对Ad7、Ad21、ECHO18和PolioⅠ病毒无活性。对先加药后染病毒的Cox B3和Cox A24变异株也无作用。药物和病毒作用1小时后同时加入或先染病毒后加药，则对Cox B3有很强的作用，对Cox A24变异株有一定的作用。分析其作用机理，可能是药物抑制了病毒吸附细胞后的某一环节，也不否认直接灭活病毒的可能性。见表1。

表1　药物抗病毒情况

　　药物浓度0.061～1.953mg/ml时，抗Cox B3病毒的作用与浓度正相关，浓度小于0.031mg/ml时，无抗病毒作用。半数有效浓度为0.318mg/ml，大于90％有效浓度为0.978～3.905mg/ml。

　　目前认为抗病毒中药多为清热解毒药^〔2〕，多种黄酮具有抗病毒活性，在化学结构上，同C3位上是否具有羟基或C'3、C'4或C'2、C'4上同时存在羟基密切相关；也有人认为3-甲氧基和5-羟基是活性必需的^〔3〕。金莲花味苦、性寒、无毒，具有清热解毒作用^〔1〕，其主要成份荭草甙的C'3、C'4、C5上均有羟基，牡荆甙的C'4、C5上也有羟基^〔4〕。提示其抗病毒活性，可能与此有关。临床上可以试用于Cox B3病毒所致的各种感染。参考文献

　　[1]北京制药厂.金莲花的药理试验和临床观察报告.新医药学杂志,1973,5∶31-34.

　　[2]曹伟春.近年来中药抗病毒作用的实验室研究进展.中医药信息,1992,5∶42-44.

　　[3]富杭育.中草药和天然药物中的抗病毒活性物质及其作用原理.药学通报,1988,23(4)∶195-199.

　　[4]康少文,于永芳,王沛.金莲花化学成分的研究.中草药,1984,15(6)∶7-9.

(收稿：1997-06-28　　修回：1998-09-28)