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甲型肝炎病毒经猴体传代后核苷酸变异的研究

来源:中华微生物学和免疫学杂志
摘要:甲型肝炎病毒经猴体传代后核苷酸变异的研究中华微生物学和免疫学杂志2000年第4期第20卷病毒学作者:陈勇毛江森洪艳杨连华凌志强俞为群单位:310013,浙江省医学科学院本实验室曾观察到,新捕获的野生短尾猴(MacacaTibetana)甲肝病毒(HAV)抗体一般阴性,而人工饲养的猴则多为HAV抗体阳性,说明人与猴可......

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甲型肝炎病毒经猴体传代后核苷酸变异的研究

中华微生物学和免疫学杂志 2000年第4期第20卷 病毒学

作者:陈勇 毛江森 洪艳 杨连华 凌志强 俞为群

单位:310013,浙江省医学科学院

  本实验室曾观察到,新捕获的野生短尾猴(Macaca Tibetana)甲肝病毒(HAV)抗体一般阴性,而人工饲养的猴则多为HAV抗体阳性,说明人与猴可交叉感染。国内科学家的研究也已表明,产于我国的短尾猴是HAV良好的动物模型,且来源丰富,现已广泛应用于HAV的研究及疫苗检定。

  为探讨HAV株经短尾猴传代后基因型变化及遗传变异情况,我们从杭州近郊甲肝病人的粪便提取物中,分离病毒株Gkm,并以106 TCID50/0.5ml接种短尾猴,14d和22d后收集粪便,粪便经差速离心、聚乙二醇沉淀后,按Linemeyer等改良法分离纯化,获得猴传代株Gkm/M。病毒再经异硫氰酸胍提取RNA后,用逆转录-聚合酶链反应扩增5′非编码区(5′NTR)(+56/-293)和VP1/2A区(+2984/-3265),反应条件为逆转录42℃ 45min,PCR反应为94℃ 30s,52℃ 30s,72℃ 60s,共循环33周。PCR产物经电泳检测后,用Wizand PCR纯化试剂盒纯化,纯化的产物经序列分析试剂盒直接测序,测序引物为+56和+2984。

  结果表明,在5′NCR区,HAV Gkm株和Gkm/M的核苷酸同源性为98.75%(158/160),仅有2个核苷酸发生变异(119nt和159nt),且这2个核苷酸均位于5′NCR区二级结构(茎环结构)的基底区,预计不会影响其HAV特性,在VP1/2A区,Gkm株和Gkm/M株的核苷酸同源性为100%,未见任何核苷酸变异,基因型未变,仍属IA亚型,可见目前国际上通用的基因分型方法是可靠的。可用于流行病学追踪调查及人HAV和猴HAV相关性的研究,分清来源于人或猴的HAV,从而有利于HAV在我国的预防控制。试验结果还表明,甲肝病毒基因结构较稳定,宿主种族的改变不太可能发生基因水平的快速突变,HAV各基因型的出现可能是长期适应传代的结果,短尾猴作为HAV的动物模型是可靠的。

(收稿日期:1999-11-30)


作者: 风清扬 2009-2-21
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