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高亲和力IgE受体α链基因亚型的发现及其cDNA序列的克隆
中华微生物学和免疫学杂志 2000年第4期第20卷 基础免疫学
作者：孙仁山 刘荣卿 叶庆佾 胡厚祥 王延江
单位：孙仁山 刘荣卿 叶庆佾（400038 重庆，第三军医大学西南医院皮肤科）；胡厚祥 王延江（第三军医大学复合伤研究所）
高亲和力IgE受体(FcεR1)主要表达于肥大细胞及嗜碱粒细胞表面，与过敏性炎症形成密切相关。最近有报道，抗FcεR1自身抗体可以激活肥大细胞和嗜碱粒细胞参于部分荨麻疹的发生。为了深入研究慢性荨麻疹的发生机制，我们就来源于中国汉族人的FcεR1α链cDNA进行了克隆及序列测定。主要实验步骤：取肝素抗凝血10ml，用密度梯度离心法富集嗜碱粒细胞，异硫氰酸胍一步法提取总RNA，以此为模板进行RT-PCR，产物克隆入pGEX-4T-1载体，进行自动测序。另取5例不同个体的血样，提总RNA后，与上面个体来源的RNA一起进行PCR-SSCP分析。PCR产物电泳显示，主条带的相对分子质量大小与预计值一致，约为559bp。克隆片段的测序结果与GenBank中的碱基序列对比，发现第159位密码子由CAC置换成了CGC，185位密码子由TAT置换成了CAT。6例血标本来源的RT-PCR产物，经SSCP分析表明，其559bp扩增片段迁移率完全一致，结合测序结果，该实验证明我们所检测的6例正常个体，其FcεR1膜外区α链cDNA的第159和185位密码子分别均为CGC和CAT。SSCP技术是根据单链DNA片段在非变性介质中形成立体构象，其长的DNA片段因核苷酸组成不同而具有不同的构象，因而在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时表现为电泳速度的差别。本实验用来自正常个体的6例外周血嗜碱粒细胞，RT-PCR后，进行SSCP，结果表明6例结果完全一样。这支持了本实验克隆的FcεR1膜外区α链cDNA为来源于FcεR1α链基因的一个基因亚型，其生物学意义有待进一步探讨。
基金项目：重庆市科委院士基金资助项目
(收稿日期：1999-11-02)