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斑点金免疫渗滤法测定人全血中抗HBc抗体
中国免疫学杂志 1999年第12期第15卷 学术会议优秀论文选登
作者：邓为民 徐世文 潘菊芬
单位：天津医科大学免疫学教研室，天津300070
关键词：斑点金免疫渗滤法；抗HBc Ab；全血
摘 要 目的：建立一种适合斑点金免疫渗滤法(Dot Immu no gold Filtration Assay DIGFA)特点的快速全血诊断方法。方法：选择可瞬间分离血中细胞和血清的膜，依据DIGFA的原理对33份HBcAb阳性血样和48份阴性血样进行了全血抗HBcAg抗体的检测。结果：测定阳性标本符合率为96.7％，阴性标本符合率为100％。结论：提供了一种简便、快速、可行的全血检测抗HBcAg抗体的方法。
中国图书分类号 R392.6
Detecting anti-HBc antibody in whole blood by dot immunogold filitration assay
DENG Wei-Min, XU Shi-Wen, PAN Ju-Fen.
Department of Immunology, Tianjin Medical University, Tianjin 300070
Abstract Objective:To establish a rapid, simple and reliable assay for detecting anti-HBc Ab in human whole blood.Methods: A new dot immunogold filtration assay was selected. Results:In detecting 33 anti-HBc Ab positive samples and 48 negative samples confirmed by clinical indexes, the positive coincidence rate was 96.7% ;and negative rate was 100%. Conclusion:This method not only has the characteristics of rapidness,simpleness and reliability, but also has an obvious advantage, that we could detect the anti-HBc Ab in whole blood, but not in serum,and obtain the result immediately.
Key words DIGFA Anti-HBc Ab Whole blood
斑点金免疫渗滤法（DIGFA）被广泛应用于临床各种定性指标的测定［1-3］。由于这种方法是待测物直接滴加于硝酸纤维膜表面，所以待测物需是血清或血浆，不能直接测定全血，临床检验要分离血清，操作仍较为繁琐。本工作在上述方法的基础上，结合笔者近两年的研究工作，建立了全血法检测抗HBcAg抗体的方法，并在临床应用中获得成功。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 重组HBcAg 蛋白含量20 μg/ml，纯度85％，中国预防医学科学院病毒所谭文杰老师惠赠。胶体金标记兔抗人IgG，按文献和我室资料自制［4］。
1.1.2 测定装置 自己制备，参见图1。硝酸纤维素膜购自Geleman公司。
图1 DIGFA渗滤装置图
Fig.1 DIGFA structure diagram
1.1.3 检测标本 阴性血样48份，其中4份HBsAg阳性，由天津医科大学总医院检验科血清室提供；HBcAb阳性血样33份，由北京医科大学第三附属医院检验科李呈瑞医师提供。
1.2 方法 于测试条表面样品孔滴加1滴洗液，待渗入。滴加全血标本50 μl，待渗入，追加1滴洗液。掀起表面覆盖条，暴露出显示孔滴加1滴洗液，待渗入。滴加胶体金兔抗人多抗50 μl，待渗入。滴加洗液1滴，以孔中央出现一圆形斑点，孔下部出现一圆斑为阳性；仅孔下部出现一圆斑者为阴性。
2 结果
表1中所列的阳性标本为北京医科大学第三附属医院检验科临床检验确证为HBc抗体阳性的标本。本检测条测试的结果符合率为96．7％。 阴性标本为天津医科大学总医院检验科血清室体检标本，其中有4例为“澳抗”阳性。
表1 临床血清学检／测方法与新DIGFA检测方法检测结果的比较
Tab.1 The comparison between the clinical serological assay and the new DIGFA
| Number | Positive number
(by DIGFA) |
Negative number
(by DIGFA) |
Coincidence
rate(%) |
|
| Positive sample | 33 | 32 | 1 | 96.7 |
| Negative sample | 48 | 0 | 48 | 100 |
3 讨论
金标快速诊断方式包括斑点金免疫渗滤法（DIGFA）和免疫层析两大主要方式。DIGFA具有实验装置简单、易于实验室小规模制备等特点而且易于通过银加强来提高其灵敏度；而免疫层析法则具有灵敏度高、适合大规模商品化生产、操作更加简单等特点。目前免疫层析法已经可以测定全血中相应指标，并且已有商品问世，但DIGFA仍无全血测定的装置，这极大地限制了DIGFA作为快速诊断方式的发展。建立全血的诊断，不但是免疫工作者所需要的，而且更适合临床各种生化指标的定性、定量测定。
抗HBcAg抗体是乙型肝炎发病过程中，最早出现的指标，仅次于“澳抗”HBsAg，而且贯穿乙肝发病的全程。韩松等人早在1996年前就分别建立了抗HBcAg抗体的测定方法和一步法测定抗-HBcAgIgG及IgM的方法［5］。但这些测定都是检血清或血浆标本，距离全血测定尚有一步。
抗HBcAg抗体也可鉴别“澳抗”阳性者与乙肝患者，同时还可用于鉴别甲、乙、丙型肝炎，是临床诊断和鉴别诊断乙肝的重要指标，故本工作易于推广和使用。
作者简介：邓为民，女，31岁，硕士，讲师，研究免疫调节和单抗制备应用；
徐世文，男，30岁，硕士，研究临床快速诊断和基因诊断
参考文献
1 徐元宏，陈 莉，张 敏. 胶体金法检测梅毒螺旋体特异性抗体的初步观察. 中华皮肤科杂志，1998;31(3):192
2 周志文，戎广亚，杨守纯. 胶体金免疫层析法检测乙型肝炎病毒表面抗原. 中华医学检验杂志，1998;21(1):30
3 皮国华，邓 瑶，温丽君. 胶体金酶联免疫吸附试验在人免疫缺陷病毒抗体检测中的应用. 中华实验和临床病毒学杂志，1996;10(3):276
4 Frens G. Controlled nucleation for the regulation of the partide size in monodisperse gold suspensions. Nature,1973;241:20
5 韩 松，杨守纯，陶义训 et al. 滴金免疫法检测血清抗HBc IgM及IgG抗体. 中华医学检验杂志，1996;19(1):8
收稿1999-06-20 修回1999-08-29