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小檗碱对小鼠DTH及其体内几种细胞因子的影响

来源:中国免疫学杂志
摘要:小檗碱对小鼠DTH及其体内几种细胞因子的影响中国免疫学杂志2000年第3期第16卷中医中药与免疫作者:吕燕宁邱全瑛单位:吕燕宁(北京中医药大学微生物学与免疫学教研室,北京100029)。DTH。细胞因子摘要:目的:以二硝基氟苯(DNFB)所致迟发型超敏反应(DTH)小鼠模型观察小檗碱对小鼠DTH及其体内几种重要......

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小檗碱对小鼠DTH及其体内几种细胞因子的影响

中国免疫学杂志 2000年第3期第16卷 中医中药与免疫

作者:吕燕宁 邱全瑛

单位:吕燕宁(北京中医药大学微生物学与免疫学教研室,北京100029);邱全瑛(北京中医药大学微生物学与免疫学教研室,北京100029)

关键词:小檗碱;DTH;细胞因子

  摘要目的:以二硝基氟苯(DNFB)所致迟发型超敏反应(DTH)小鼠模型观察小檗碱对小鼠DTH及其体内几种重要细胞因子的影响。方法:采用1%DNFB腹部致敏、耳廓发敏的方法建立DTH小鼠模型,以巨噬细胞NO2-释放法测定血清IFN-γ水平,胸腺细胞法检测IL-1水平,丝裂原激活的淋巴母细胞法检测IL-2水平,L929细胞结晶紫染色法测定TNF-α水平。结果:发现小檗碱可抑制DNFB诱导的小鼠DTH,降低其血清IFN-γ水平,抑制其腹腔MΦ产生IL-1及TNF-α,抑制其脾细胞产生IL-2。结论:表明小檗碱有抑制小鼠DTH的作用,其机制可能是抑制了IFN-γ、IL-1、TNF-α、IL-2等细胞因子的产生和分泌,从而抑制免疫反应,减轻炎症损伤。

  中国图书分类号:R392.11 R285.5

Effects of berberine on the levels of DTH and several important cytokines in the mice induced by DNFB

L Yan-Ning QIU Quan-Ying

  (Department of Microbiology and Immunology,Beijing University of Traditional Chinese Medicine and Pharmacology,Beijing 100029)

  AbstractObjective: In order to search the immunosuppressive function of Berberine.Methods: The authors used the mouse DTH model induced by DNFB to study the effects of Berberine on the levels of DTH and several important cytokines.Result:The results showed that Berberine can inhibit DTH in mice induced by DNFB,also can decrease the levels of IFN-γ,IL-1,IL-2 in serum of DTH mice,could inhibit its peritoneal macrophage producing IL-1 and TNF-α,inhibit its splenocytes producing IL-2.Conclusion:All these facts suggest that Berberine has a function of suppressing the mice DTH induced by DNFB,by means of inhibiting production and secretion of the cytokines,such as IFN-γ,IL-1,TNF-α,IL-2 et al.to suppress immunologic reaction and lessen immunologic pathologic lesion.

  Keywords:Berberine DTH Cytokines

  盐酸小檗碱(黄连素)为黄连、黄柏等植物中提取的生物碱,具有多种药理作用如抗病原微生物、抗炎、抗癌、抗凝血、抗心律失常、降血糖等,广泛应用于临床。近年有资料表明,小檗碱用于治疗复发性口炎、白塞氏综合症等自身免疫性疾病有一定疗效。目前对小檗碱药理作用研究多集中于对血液及心血管系统的影响,而涉及其对免疫系统作用的研究较少,我们的研究初步表明小檗碱具有一定的免疫抑制作用。本文以二硝基氟苯所致迟发型超敏反应(DTH)小鼠模型观察了小檗碱对小鼠DTH及其体内几种重要细胞因子的影响,以进一步探讨小檗碱的免疫抑制作用。

  1 材料与方法

  1.1 药品及试剂 盐酸小檗碱(Berberine,Ber.中国药品生物制品检定所,化学对照品)以蒸馏水配成5 mg/ml的浓度。二硝基氟苯(DNFB,AR.级,英国产)以50%丙酮-50%橄榄油配成1%的浓度,室温避光保存。

  1.2 L929细胞株 引自本校气功所免疫室,由本室常规传代培养。

  1.3 动物 NIH小鼠,雄性,体重(16±1) g(北京生物制品研究所,京动字第01-3071号,一级);Balb/c小鼠,雄性,(16±1) g(北京中日友好医院动物部);C57BL/6J小鼠,雄性,(12±1) g(北京医科大学动物部,医动字01-3045号,一级)。

  1.4 DTH小鼠模型的建立与实验分组 雄性NIH小鼠(16±1)g,按体重随机分为3组,每组10只:①生理盐水对照组,②小檗碱小剂量组(1 mg/ml),③小檗碱大剂量(5 mg/ml)。剪去小鼠腹毛,腹部涂抹1%DNFB 50 μl致敏,同时给药,每日灌服药物或生理盐水0.5 ml/只,共7 d。致敏后第5天每只小鼠左耳廓涂抹1%DNFB 5 μl发敏,36 h后即得DTH小鼠模型。

  1.5 待测血清的制备 将小鼠摘眼球放血处死,收集血液,分离血清,-20℃保存,供测各种细胞因子。

  1.6 DNFB所致小鼠DTH强度测定 将小鼠放血处死,以直径7 mm打孔器取左右耳各一片,以电子天平称重,计算左右耳纯重量之差为肿胀度。

  1.7 DTH小鼠血清IFN-γ水平测定 采用巨噬细胞NO-2释放法,见文献[1]。

  1.8 DTH小鼠腹腔MΦ产生IL-1能力及血清IL-1水平测定 IL-1诱生及活性测定见文献[2,3]。

  1.9 DTH小鼠腹腔MΦ产生 TNF-α能力测定 TNF-α诱生及活性测定 见文献[2,3]。

  1.10 DTH小鼠脾细胞产生IL-2能力及血清IL-2水平测定 IL-2诱生及活性测定见文献[3,4]。

  2 结果

  2.1 小檗碱对DNFB所致小鼠DTH的影响 小檗碱能明显抑制DNFB诱导小鼠的DTH,与对照组相比有极显著性差异,但大小剂量间无明显差别,见表1。

表1 小檗碱对DNFB所致小鼠DTH的影响

  Tab.1 Effect of berberine on DTH of mice induced by DNFB

Group n
Control 10 3.8±1.6
Ber.(1 mg/ml) 9  1.5±0.61)
Ber.(5 mg/ml) 7  1.6±0.51)

  Note:1)P<0.01,compared with control2.2 小檗碱对DTH小鼠血清IFN-γ水平的影响 小檗碱可显著降低DTH小鼠血清中IFN-γ含量,与对照组相比有极显著性差异,但大小剂量间无明显差别,见表2。

表2 小檗碱对DTH小鼠血清IFN-γ水平的影响

  Tab.2 Effect of berberine on the level of IFN-γ in serum of DTH mice

Group n
Control 10 0.273 7±0.014 6
Ber.(1 mg/ml) 9 0.206 3±0.009 31)
Ber.(5 mg/ml) 7 0.179 7±0.021 01)

  Note:1)P<0.01,compared with control2.3 小檗碱对DTH小鼠腹腔MΦ产生IL-1及血清IL-1水平的影响 小檗碱可抑制DTH小鼠腹腔MΦ产生IL-1的能力,与对照组相比有显著性差异,但大小剂量间无明显差别;而血清中的IL-1水平亦显著低于对照组,其大剂量组略低于小剂量组,但无明显差异,表明小檗碱抑制DTH小鼠腹腔MΦ产生IL-1,从而导致血清中IL-1水平降低,见表3。

表3 小檗碱对DTH小鼠腹腔MΦ产生IL-1及血清IL-1水平的影响(

  Tab.3 Effect of berberine on the level of IL-1 in serum and peritoneal macrophage produced in DTH mice (

Group n Level of IL-1(A570 value)
Serum
Control 10 0.469 0±0.016 1 0.664 3±0.018 0
Ber.(1 mg/ml) 9 0.415 0±0.021 1 0.565 0±0.035 71)
Ber.(5 mg/ml) 7 0.420 0±0.020 0 0.561 3±0.055 81)

  Note:compared with control:1)P<0.052.4 小檗碱对DTH小鼠腹腔MΦ产生TNF-α能力的影响 小檗碱能明显抑制小鼠腹腔MΦ产生TNF-α的能力,与对照组相比有显著性差异,见表4。

表4 小檗碱对DTH小鼠腹腔MΦ产生TNF-α能力的影响

  Tab.4 Effect of berberine on the ability of producing TNF-α of peritoneal macrophage of DTH mice

Group n
Control 10 0.358 3±0.020 4
Ber.(1 mg/ml) 9 0.501 3±0.065 82)
Ber.(5 mg/ml) 7 0.465 3±0.015 22)

  Note:compared with control:1)P<0.052.5 小檗碱对DTH小鼠脾细胞产生IL-2及血清中IL-2水平的影响 小檗碱能明显抑制DTH小鼠脾细胞产生IL-1的能力,与对照组相比有显著性差异,但大小剂量间无明显差别。而血清中水平亦显著低于对照组,表明小檗碱通过抑制脾细胞产生IL-2而降低血清中IL-2水平,见表5。

表5 小檗碱对DTH小鼠脾细胞产生IL-2及血清IL-2水平的影响(

  Tab.5 Effect of berberine on the level of IL-2 in serum and splenocyte produced in DTH mice (

Group n Level of IL-1(A570 value)
Splenocyte Serum
Control 10 0.5447±0.0134 1.054 7±0.085 0
Ber.(1 mg/ml) 9 0.483 3±0.034 62) 0.851 3±0.063 61)
Ber.(5 mg/ml) 7 0.492 7±0.024 12) 0.8130 1±0.100 01)

  Note:compared with control:1)P<0.05

  3 讨论

  DTH是机体细胞免疫功能的体现,本实验观察到体内给药时小檗碱可显著抑制DNFB诱导小鼠的DTH,表明小檗碱可抑制机体的细胞免疫反应。

  在DTH中,除了Tc的直接杀伤作用导致局部组织损伤外,TDTH释放的多种细胞因子亦是引起炎症反应的重要原因。

  在DTH中CD4+T细胞分泌的IFN-γ可作用于抗原递呈细胞,如MΦ和内皮细胞,增加其MHC-Ⅱ类分子的表达,提高抗原递呈效率,这是一种重要的诱导DTH反应的放大机制。IFN-γ能活化多种细胞产生NO,NO调节着多种免疫活性介质如TNF、PGE2、IL、IFN等的合成分泌而更为广泛地影响机体免疫功能。因此,IFN-γ是一种重要的免疫促进因子和致炎因子,本实验发现小檗碱可显著降低DTH小鼠血清中IFN-γ水平,从而抑制免疫反应,减轻炎症损伤。

  在DTH中,IL-1和TNF可作用于血管内皮细胞,使之表达粘附分子和分泌趋化性细胞因子,如IL-8等,这些因子有利于吸引血流内白细胞、淋巴细胞及单核细胞等与血管内皮粘附、迁徙并外渗至组织内引起炎症反应,小檗碱可通过抑制IL-1、TNF-α等致炎因子的产生和分泌而减轻炎症反应,抑制小鼠的DTH。

  同时,在DTH中,抗原活化的T细胞可借其IL-2的自分泌和旁分泌作用促进T细胞增殖,此外还能促进CD4+T细胞合成细胞因子,如IL-2、TNF、IFN-γ和淋巴毒素(LT)等,特别是在DTH晚期,LT分泌量可大于TNF,导致炎症反应。因此,在DTH中IL-2是一种重要的促进因子,小檗碱可显著抑制DTH小鼠脾细胞产生IL-2,同时小鼠血清中IL-2水平也明显降低,说明小檗碱可以通过抑制IL-2的产生和分泌来抑制免疫反应。

  综上所述,小檗碱有抑制小鼠DTH的作用,其机制可能是抑制了IFN-γ、IL-1、TNF-α、IL-2等细胞因子的产生和分泌,从而抑制免疫反应,减轻炎症损伤。这不仅为小檗碱治疗自身免疫反应性疾病、炎症性疾病,更为进一步扩大其临床应用范围提供了理论基础。

  作者简介:吕燕宁,女,27岁,硕士

  参考文献:

  [1]Migliorini P, Corradin G,Corradin S B.Macrophage NO2- produce as a sensitive and rapid assay for the quantitation of murine IFN-γ.J of Immunological Methods I M,1991;139:107

  [2]王海明,何南洋.单核细胞产生IL-1,IL-6和肿瘤坏死因子的观察.中国免疫学杂志,1990;6(6):341

  [3]钱玉昆主编. 实用免疫学新技术. 北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社,1994:46-55

  [4]周道洪,沈元珊,赵曼瑞. 测定淋巴细胞转化和鼠白细胞间素2活性的新方法——MTT比色法.中国免疫学杂志,1986;2(2):39

收稿日期:1998-12-30

  修改日期:1999-03-03


作者: 风清扬 2009-2-21
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