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造血干细胞疾病患者血清可溶性Fas水平的变化
免疫学杂志 1999年第4期第15卷 临床免疫学
作者：王鲁群 马晓星 孔凡盛 刘希民 马玉桂 周兰月 杨道理 迟翠芳
单位：王鲁群 孔凡盛 刘希民 马玉桂 周兰月 迟翠芳（济南军区总医院血液科 济南 250031）；马晓星 杨道理（济南军区总医院免疫科）
关键词：再生障碍性贫血 骨髓增生异常综合征 急性白血病 可溶性Fas受体 凋亡
摘 要 为了探讨再生障碍性贫血（AA）、骨髓增生异常综合征（MDS）和急性白血病（AL）等造血干细胞疾病患者血清可溶性Fas（sFas）受体水平及其临床意义，采用ELISA法检测了30例AA，18例MDS和42例AL患者血清sFas受体水平。结果发现与对照组比较，AA和MDS-RA患者血清sFas受体水平显著降低（P＜0．01），而MDS-RAEB／RAEB-t和难治性AL均显著升高（P＜0．01）。表明血清sFas受体与造血干细胞疾病的发病机制及其临床生物学特征有一定的相关性。
中图号 R556.5
STUDY ON THE SOLUBLE FAS LEVEL IN SERA FROM PATIENTS
WITH HEMATOPOIETIC STEM CELL DISEASE
Wang Luqun，Ma Xiaoxing，Kong Fansheng，Liu Ximin，Ma Yugui，
Zhou Lanyue，Yang Daoli，Chi Cuifang
（Department of Hematology，Jinan General Hospital of PLA， Jinan 250031）
Abstract To analysis the soluble Fas（sFas） receptor level in sera from patients with hematopoietic stem cell diseases，including aplastic anemia（AA），myelodysplastic syndrome（MDS） and acute leukemia（AL），and investigate its clinical significance，the levels of sFas receptor in sera from 30 patients with AA，18 patients with MDS and 42 patients with AL were detected by using ELISA methods．The results suggested that the sFas receptor levels in sera from patients with AA and MDS-RA were significantly lower than those from normal control （P＜0．01），and they were marketly higher in the patients with MDS-RAEB／RAEB-t and AL than in normal control（P＜0．01）．These demonstrated that the sFas receptor in sera from patients with hematopoietic stem cell disease may be correlation with their pathogenic mechanism and clinial features．
Key words Aplastic anemia，Myelodysplastic syndrome，Acute leukemia，Soluble Fas receptor，Apoptosis
造血干细胞疾病是一组由造血干细胞质和量异常导致的疾病。不同的造血干细胞疾病，不仅具有相似的致病因素和临床表现，而且某些造血干细胞疾病在其病程中还可以相互转化，表明其发病机制和病理过程具有密切的内在联系。近年的研究发现，骨髓造血干细胞凋亡异常与造血干细胞疾病的发生密切相关。有关Fas（Apo-1／CD95）受体的表达及其对细胞凋亡的调节作用的研究发现，不仅存在膜型Fas（mFas）受体，而且存在sFas受体，同样发挥着调控细胞凋亡的作用［1］。造血干细胞疾病血清中是否存在sFas受体，是否与其病理过程和临床特征有关，尚未见报道。为此，本研究分析了再生障碍性贫血（AA）、骨髓增生异常综合征（MDS）和急性白血病（AL）等造血干细胞疾病患者血清sFas受体。
1 材料和方法
1.1 研究对象 系1995～1997年在本院住院的患者，经血液学和骨髓细胞学或骨髓病理学检查确诊。分别依据1987年第4届全国再生障碍性贫血学术会议确定标准和FAB标准对AA、MDS和AL进行分型［2～4］。30例AA中，急性AA（AAA）20例，慢性AA（CAA）10例，男18例，女12例，年龄14～51岁，平均32岁；18例MDS中，难治性贫血（RA）8例，原始细胞增多的难治性贫血（RAEB）6例，转化中的原始细胞增多的难治性贫血（RAEB-t）4例，男12例，女6例，年龄18～68岁，平均31岁；42例AL中，急性淋巴细胞白血病（ALL）10例，急性非淋巴细胞白血病（ANLL）24例，慢性粒细胞白血病急粒变（CML-BC）8例。男24例，女18例，年龄14～78岁，平均35岁。
1.2 标本采集 抽取空腹静脉血5ml，自凝后分离血清，置－20°C保存备用。所有患者留取标本前无输血史。以20例健康献血员空腹静脉血血清为正常对照。
1.3 血清sFas受体测定 采用ELISA法检测血清中sFas受体水平，所用试剂盒为Genzyme公司产品，按说明书操作，主要步骤为：向待测孔加1∶1稀释的血清100μl，混匀后37°C孵育60min后洗板，加生物素标记二抗100μl，37°C孵育60min后洗板，加酶联底物100μl，37°C孵育20min后洗板，加底物100μl，避光37°C孵育15min，加终止液50μl，测定450nm的OD值，根据标准品测得的标准曲线，求出标本sFas值。实验中设空白对照孔。
1.4 统计学方法 采用计量资料的两样本均数的t检验。
2 结果
2.1 再生障碍性贫血（AA） 30例AA患者血清sFas水平见表1所示。与正常对照组比较，AAA组和CAA组sFas受体水平均显著降低（P＜0．01）。AAA组与CAA组比较无明显差异（P＞0．05）。
表1 造血干细胞疾病患者血清sFas水平（
Tab 1 The levels of sFas in sera from patients with
hematopoietic stem cell diseases（
| Classification | No． | sFas（ng／ml） | P* |
| Normal control | 20 | 6．29±1．07 | |
| AA：AAA | 20 | 4．14±1．12 | ＜0．01 |
| CAA | 10 | 4．52±1．05 | ＜0．05 |
| MDS：RA | 8 | 2．89±1．72 | ＜0．01 |
| RAEB | 6 | 9．75±2．28 | ＜0．01 |
| RAEB-t | 4 | 19．98±5．24 | ＜0．01 |
| AL：Refractory | 18 | 10．86±3．05 | ＜0．01 |
| Effective | 16 | 5．12±2．86 | ＞0．05 |
| CML-BC | 8 | 9．44±4．14 | ＜0．01 |
*Compared with normal control2.2 骨髓增生异常综合征（MDS） 18例MDS患者血清sFas水平见表1所示。与正常对照组比较，RA组sFas受体水平显著降低（P＜0．01），而RAEB组和RAEB-t组sFas水平均显著升高（P＜0．01）。MDS各组之间比较，RAEB组和RAEB-t组sFas水平均显著高于RA组（P＜0．01），而RAEB-t组又显著高于RAEB组（P＜0．01）。
2.3 急性白血病（AL） 根据化疗的效果将AL分为难治组18例（两个疗程标准方案化疗未取得部分缓解者）和有效组16例。难治组AL，其血清sFas水平均显著高于有效组和正常对照组（P＜0．01）；有效组与正常对照组比较无显著差异（P＞0．05）。ANLL与ALL比较，无论有效或无效，彼此间均无显著差异（P＞0．05）。8例CML-BC化疗均无效，其血清sFas水平显著高于正常对照组（P＜0．01），与难治组AL比较无显著差异（P＞0．05），但明显高于有效组AL（P＜0．05）。
3 讨论
Fas作为肿瘤坏死因子（TNF）和神经生长因子（NGF）受体超家族成员之一，在传递细胞凋亡信号和参与T细胞介导的细胞杀伤过程中发挥着重要作用。进一步的研究发现，不仅存在mFas受体，而且存在游离sFas受体。sFas受体是由于交替拼接转录翻译（Translation of an alternatelyspliced transcript）所致，即跨膜区两侧内含子拼接，导致翻译产物缺乏跨膜区，因而呈可溶性分泌［5］。
造血与细胞凋亡的研究倍受关注。已有的研究结果表明：细胞凋亡参与了包括AA、MDS和AL等造血干细胞疾病的发病机制或病理过程。在AA和MDS-RA患者骨髓，CD34＋细胞表面mFas受体表达水平明显升高，骨髓CD34＋细胞和骨髓基质细胞的凋亡率显著高于正常骨髓［6，7］。不同MDS亚型之间，由MDS-RA经过MDS-RAEB／RAEB-t转化为白血病的过程中，凋亡抑制基因bcl-2的表达率逐渐增高，表明MDS患者骨髓的病态或无效造血及其向白血病转化的病理机制与骨髓细胞凋亡异常密切相关［8～10］。在某些AL细胞亦存在mFas受体的高表达，但同时伴有bcl-2等凋亡抑制蛋白的高表达，后者抑制了前者的凋亡诱导作用［11，12］。
本研究结果发现：AA和MDS-RA患者血清sFas受体水平显著降低，而MDS-RAEB／MDS-RAEB-t和AL患者血清sFas受体水平显著升高，且各组之间的差异均具有统计学意义。表明AA患者造血干细胞的缺陷，或外周血的全血细胞减少和MDS-RA患者的难治性贫血，或骨髓的无效造血，除了与骨髓造血前体细胞高表达mFas受体有关外，与其血清sFas受体降低，导致过多的FasL与mFas受体结合，诱导骨髓造血前体细胞过度凋亡有关。相反，MDS-RAEB／RAEB-t患者骨髓原始细胞增多，或病态造血和AL患者白血病细胞的积聚，除了与骨髓造血前体细胞mFas受体表达降低和bcl-2蛋白表达升高有关外，还与其血清sFas受体增高，使得异常的骨髓造血前体细胞凋亡受抑有关。此外，在化疗无效的难治性AL，尤其是ANLL和CML-BC，血清中sFas受体水平明显高于治疗有效组，而与白血病的类型无关，表明血清sFas受体水平与化疗疗效或白血病细胞的耐药性可能有关。通过调控mFas和sFas受体的表达，抑制或促进细胞的凋亡，可能成为造血干细胞疾病治疗的一条新途径。
需要指出的是，无论是AA、MDS或AL，其发病机制和病理过程与细胞凋亡的关系还远未阐明，有许多问题有待进一步研究，如血清sFas受体的来源，是否存在FasL系统的异常，以及如何调控mFas和sFas受体的表达等。毫无疑问，这些问题的解决不仅有助于阐明造血干细胞疾病的发病机制，而且有助于改善治疗效果和临床预后。
第一作者：男，34岁，硕士，副主任医师
参考文献
1 Cheng JH，Zhou T，Liu CD，et al．Protection from Fas-Mediated apoptosis by a soluble form of the Fas molecule．Science，1994，263：1759
2 中华血液学会第四届全国再生障碍性贫血学术会议纪要.再生障碍性贫血诊断标准与疗效标准.中华血液学杂志，1987，8（8）：486和封四
3 Bennett JM，Catovsky D，Daniel MT，et al．Proposals for the classification of the myelodysplastic syndromes．Br J Haematol，1982，33：189
4 Bennett JM，Catovsky D，Daniel MT，et al．Proposal revised criteria for the classification of acute myeloid leukemia．Ann Intern Med，1985，103：620
5 Cascino I，Papoff G，Maria RD，et al．Fas／APO-1（CD95） receptor lacking the intracytoplasmic signaling domain protects tumor cells from Fas-mediated apoptosis．J Immunol，1996，156：13
6 Maciejewski JP，Selleri C，Sato T，et al．Increased expression of Fas antigen on bone marrow CD34＋ cells of patients with aplastic anemias．Br J Haematol，1995，91：245
7 Philpott NJ，Scopes J，Marsh JCW，et al．Increased apoptosis in aplastic aemia bome marrow progenitor cells：Possible pathophysiologic significance．Exp Hematol，1995，23：1642
8 Raza A，Gezer S，Mundle S，et al．Apoptosis in bone marrow biopsy sample involving stromal and hematopoietic cells in 50 patients with myelodysplastic syndromes．Blood，1995，86：268
9 Rajapaksa R，Ginzton N，Rott LS，et al．Altered oncoprotein expression and apoptosis in myelodysplastic syndrome marrow cells．Blood，1996，88：4275
10 Bogdanovic AD，Jankovic GM，Colovic MD，et al．Apoptosis in bone marrow of myelodysplastic syndrome patients．Blood，1996，87：3064
11 Knipping E，Debatin KM，Striker K，et al．Identification of soluble APO-1 in supernatants of human B-and T-cell lines and increased levels in B-and T-cell leukemias．Blood，1995，85（6）：1562
12 Lijima N，Miyamura K，Itou T，et al．Functional expression of Fas（CD95） in acute myeloid leukemia cells in the context of CD34 and CD38 expression：Possible correlation with sensitivity to chemotherapy．Blood，1997，90（12）：4901
（1999-01-04收稿；1999-05-20修回）