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胸腺上皮细胞上清液促进85细胞增殖的研究

来源:免疫学杂志
摘要:胸腺上皮细胞上清液促进85细胞增殖的研究免疫学杂志2000年第1期第16卷短篇报道作者:龙建平单位:龙建平(中山医科大学分子医学研究中心,广东广州510089)关键词:胸腺上皮细胞。上清液。增殖中图分类号:R371文献标识码:AStudiesonproliferation-promotingeffectofsupernatantfrom......

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胸腺上皮细胞上清液促进85细胞增殖的研究

免疫学杂志 2000年第1期第16卷 短篇报道

作者:龙建平

单位:龙建平(中山医科大学分子医学研究中心,广东 广州 510089)

关键词:胸腺上皮细胞;上清液;增殖

  中图分类号:R371文献标识码:A

Studies on proliferation-promoting effect of supernatant from thymic epithelial cell culture on 85 cell▲

  胸腺是T细胞分化发育的场所。源于骨髓的前T细胞迁入胸腺后,在胸腺微环境作用下,经阳性和阴性选择过程,发育分化成功能性T细胞迁至外周[1]。目前对胸腺基质细胞如何影响成熟T细胞株的研究较少。为此,本文利用体外原代培养人胸腺上皮细胞,比较不同培养条件下细胞生长情况。观察上清液对T细胞株85细胞增殖的影响,了解上清液对85细胞存活的效应。

  1 材料和方法

  1.1 人胸腺上皮细胞的培养 将人胸腺组织剪成约0.5mm的碎块,用0.15%的胰酶消化组织块10min,另一组组织碎块不用胰酶消化。将组织块接种到培养瓶中4h,轻轻加入10%FCS-DMEM培养液或DM培养液(DMEM培养基中加入胰岛素5μg/ml、氢化可的松2.7×10-6M、EGF10ng/ml组成DM培养液)。

  1.2 培养上清液的制备 当胸腺上皮细胞在培养瓶底部行将长满时,换成无血清培养液(DM培养组不变),培养12h,收集上清液。上清液经0.45μm的滤膜过滤,分装,-20°C冻存备用。

  1.3 85细胞增殖测定 将1×105/ml 85细胞加入96孔培养板内,再于每孔内加1∶10、1∶20、1∶40、1∶80不同稀释度的TES,对照组分别加IL-2 50u/ml或培养液。培养24h、48h、72h,培养结束前18h加入3H-TdR 1μ ci/孔,测定CPM值。

  1.4 台盼兰试验 85细胞培养于10%FCS-RPMI或DM中,将1×105/ml 85细胞加入96孔培养板内,再于每孔内加1∶10的TES,对照组分别加IL-2 50u/ml、IL-6 50u/ml或培养液。24h后取细胞进行0.5%台盼兰染色,计数死细胞。

  1.5 FACS分析85细胞 85细胞培养于10%FCS-RPMI或DM中,将1×105/ml 85细胞加入96孔培养板内,再于每孔内加1∶10的TES,对照组分别加IL-2 50u/ml、IL-6 50u/ml或培养液。24h后加入0.3mmol Dio(Sigma产品)染色30min,作流式细胞仪分析。

  2 结果

  2.1 原代培养条件的比较 胸腺组织体外培养3d后,可见大量游离的淋巴细胞和已贴壁生长的上皮样细胞。10d后,上皮细胞形成多个集落,呈相嵌状。第15~20d,胸腺上皮细胞在培养瓶底部长满。仅剪切的组织块与剪切后加消化的组织块相比较,两者生长情况良好,无明显差异。10%FCS-DMEM与DM培养液相比较,两者生长情况亦无明显差异。

  2.2 TES对85细胞株的作用 TES单独使用能促使85细胞增殖,实验组与对照组相比,CPM值有明显差异(P<0.01)。源于10%FCS-RPMI与源于DM的上清液均可促使85细胞增殖,TES作用48h的效应高于作用24h,而TES作用72h对85细胞无效应。源于血清的TES与源于DM的TES对85细胞的效应无明显差异。

  2.3 TES对85细胞存活的影响 TES能维持85细胞存活,与阴性对照组相比,TES能明显提高85细胞的存活率(P<0.01),而IL-6单独不能维持85细胞生存。

  3 讨 论

  胸腺细胞分化过程是极为复杂的,受多种细胞表面抗原分子及多种细胞因子的相互作用[2]。TES上清可促使增殖反应,实为TEC上清中含有的细胞因子的作用。近年来很多研究表明胸腺上皮细胞可分泌多种细胞因子,如CSFIL-1、IL-6、IL-7、IL-8、SCF、LIF、TNFα、TNFγ和TGBβ[3,4]。85细胞是一种IL-2依赖型T细胞株,必须给予IL-2才能生存。未见到TES上清中存在IL-2的报道,然而本文所获的TES上清单独能促使85细胞的增殖,提示上清液中可能存在一种未知的细胞因子。此外,TES能短时间维持85细胞生存。作者认为TES中的细胞因子不仅影响胸腺细胞的分化发育,对T细胞株也有作用,可能影响T细胞株的生长周期。

  本研究发现含血清的培养基与含生长因子的培养基培养效果无明显差异,仅剪切也能培养纯净的胸腺上皮细胞,提供了一种简单、经济、可行的培养方法。■

  作者简介:龙建平(1962-),女,湖南郴州人,副研究员,硕士,主要从事肿瘤免疫方面的研究。

  参考文献:

  [1] NIKOLIC-ZUGIC J.Phenotypic and functional stages in the intrathymic development of T cell[J].Immunol Today,1991,12(2):65~70.

  [2] GODFREY DI,KENNEDY J,GATELY MK,et al.IL-12 influences intrathymic T cell development[J].J Immunol,1994,152(6):2729~2735.

  [3] CARDING SR,HAYDAY AC,BOTTOMLY K.Cytokines in T-cell development[J].Immunology Today,1991,12(7):239~243.

  [4]田 兰,陈慰峰.几种细胞因子对成年小鼠CD4CD8胸腺细胞的增殖作用[J].中华微生物学和免疫学杂志,1995,15(2):77~81.

收稿日期:1999-02-15

修回日期:1999-06-30


作者: 风清扬 2009-2-21
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