卢 华 ，李修善 ，陈 英 ，郭炎荣 :清咽胶囊质量标准研究

 清咽胶囊由穿心莲、栀子、墨旱莲等组成，具有清热解毒、消肿止痛之功效，主要用于喉痹、急性咽喉炎等风热证。穿心莲为方中君药，主要成分为穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯。笔者探讨了该制剂的质量标准。
1  仪器与材料
    Agilent 1100型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；BP211D型电子天平(德国赛多利斯，感量O．01 mg)；SK3300LH型超声振荡仪(上海科导超声仪器有限公司)。穿心莲内酯对照品(批号为0797—200106)，脱水穿心莲内酯对照品(批号为110854—200305)，栀子对照药材(批号为120986—200303)，均为中国药品生物制品检定所提供；穿心莲(批号为200410121050)，栀子(批号为20041123)，墨旱莲(批号为200411211025)，3种药材均为广西南宁生源中药饮片有限公司提供；清咽胶囊(广西万寿堂药业有限公司，批号为20050312．20050526，20050527，20050528)；甲醇为色谱纯，水为二重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2  方法与结果
2．1  薄层色谱鉴别(TLC)    
2．1．1  样品制备：称取穿心莲50 g，栀子50 g，墨旱莲50 g，加水煎煮两次，每次2 h，过滤，合并滤液并浓缩至相对密度为1．30（50℃），称取穿心莲、栀子细粉各50 g，与稠膏混匀，干燥，所得干膏粉碎成细粉，装入胶囊即可。按照清咽胶囊样品制备方法，依次制备TLC鉴别所需要的缺各味药的阴性样品。
2．1．2  穿心莲：取清咽胶囊样品粉末(批号为050312)l g，加无水乙醇40 mL，加热回流l h，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 mL溶解，作为供试品溶液；同时取缺穿心莲阴性样品、穿心莲对照药材l g，同法制备成阴性样品溶液及对照药材溶液；另取脱水穿心莲内酯对照品l mg，加无水乙醇溶解，使成l mL含1 mg的对照品溶  液。照薄层色谱法[2000年版《中国药典  (一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述4种溶  液各5μL分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G F254薄层板上，以氯仿一丙酮(2：1)为展开剂展开，取出，晾干。置紫外光灯(254nm)下检视。结果所得斑点圆整、清晰(见图1)。2．1．3  栀子”取清咽胶囊样品粉末(批号为050312)l g，加无水乙醇40mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lmL使溶解，作为供试品溶液；同时取栀子对照药材、缺栀子阴性样品同法制备对照药材溶液及阴性样品溶液；另取栀子苷对照品]mg加乙醇1 mL使溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2000年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述4种溶液各5 txL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿一甲醇(3：1)为展开剂展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液和对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，且斑点圆整、清晰，重现性及稳定性好(见图2)。
2．1．4  墨旱莲：取清咽胶囊样品粉末(批号为050312)6 g，加无水乙醇50mL，加热回流1h，滤过，滤液加人中性氧化铝柱(18g，100-200目，内径1 cm)上，用无水乙醇50 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液；同时取缺墨旱莲阴性样品，同法制备阴性样品溶液；另取墨旱莲对照药材3 g，加乙醇50 mL，加热回流l h，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2mL使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法[2000年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各5 txL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇一醋酸丁酯(7．5：1)为展开剂展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。结果上柱处理后所得图谱斑点清晰、圆整、无杂质干扰(见图3)。
2．2  含量测定
2．2．1  色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，采用Agilent 1100 Reliesil C．s柱(250 mm x4．6 mm，5 LLm)，流动相为甲醇一水(65：35)，检测波长为250 nm，柱温为25℃，流速为l mL／min，进样量5 μL。理论塔板数按穿心莲内酯峰计算不低于5000。在此色谱条件下，供试品中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯能与其他成分很好分离，阴性对照品溶液对测定无干扰(见图4)。
2．2．2  溶液制备：精密称取穿心莲内酯对照品lO．50 mg、脱水穿心莲内酯对照品4．48 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得对照品贮备液(每l mL含穿心莲内酯O．42 mg，脱水穿心莲内酯0．179 2 mg)。精密称取清咽胶囊粉末(批号为050312)1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，浸渍30 min，超声处理30 min，取出放冷，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，进样前用O．45μm微孔滤膜滤过即得供试品溶液。按本品处方、制法制备缺穿心莲的阴性样品，按供试品溶液制法制备缺穿心莲的阴性对照品溶液。
2．2．3  线性关系考察：精密吸取对照品贮备溶液1．0，2．O，5．0，7．0，9．0mL，分别置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，分别进样5 IxL，测定峰面积。以峰面积为纵坐标、进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线，得标准曲线方程穿心莲内酯为r=2 536．88X一9．089 39(r=0．999 9)，脱水穿心莲内酯为r1=3 901．59x’一3．485 7(r’=O．999 8)。结果表明，穿心莲内酯进样量线性范围是0．084一0．756μg，脱水穿心莲内酯进样量线性范围是O．036-0．324μg。
2．2．4  精密度试验：精密吸取供试品溶液，重复进样5次，测定峰面积值。结果穿心莲内酯平均峰面积为l 039．2，RSD为0．44％；脱水穿心莲内酯平均峰面积为736．9，RSD为o．24％．表明仪器精密度良好。
2．2．5  重现性试验：对同一批号(20050312)胶囊平行提取5份，分别依法进行测定。结果穿心莲内酯平均峰面积RSD：O．6％(n=5)，脱水穿心莲内酯平均峰面积RSD：l．2％(n=5)，表明方法重现陸良好。
2．2．6  稳定性试验：取同一份供试品溶液分别在o，2，4，8 h时进样测定．结果穿心莲内酯平均峰面积为1 032．2(RSD为2．15％)，脱水穿心莲内酯平均峰面积为737．8(RSD为2．45％)，表明供试品溶液稳定性良好。
2．2．7  阴性干扰试验：取缺穿心莲的阴性对照品溶液，按文中拟定的色谱条件测定。结果阴性对照品溶液在对照品溶液位置五色谱峰出现，表明处方中其他成分对测定无干扰。
2．2．8  加样回收试验：取2．2．5项下的清咽胶囊样品(批号为20050312，已知穿心莲内酯含量为4．239 9 mg／g，脱水穿心莲内酯含量为l．6745 mg／g)约0．5 g，精密称定，精密加入对照品溶液1 mL，依法测定，计算回收率。结果见表1．
2．2．9  样品含量测定：取本品内容物细粉适量，依法测定，结果批号为050526，050527，050528的3批样品中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量分别为4．022 1 mg／g和1．682 5 mg／g，3．965 9 mg／g和1．546 1 mg／g，4．750 3 mg／g和1．733 4 mg／g(n=3)。
3  讨论
3．1  本次试验是为了制订清咽胶囊的质量标准，经方法学考察，本法专属性强，分离度好，且保留时间适宜，重现性、稳定性及加样回收率均良好，故采用此法可以有效地控制本品质量。
3．2  在选择供试液提取方法时，分别对直接超声提取、浸渍后超声提取、回流提取进行了考察，结果浸渍后超声方法所提取的总含量高过其余两种方法，因此采用浸渍后超声的方法提取。同时对提取溶剂的选择、提取溶剂的量、浸渍时间及超声处理时间都进行了考察，结果文中方法基本能将穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯提取完全。
3．3  穿心莲的主要有效成分为二萜内酯类，它含有穿心莲内酯、新穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯等成分，文献中多以成分含量最高的穿心莲内酯作为考察指标，但是在一定条件下穿心莲内酯易脱水转化为脱水穿心莲内酯，2000年版《中国药典》对穿心莲药材的含量控制就以穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯两者的总含量作为考察指标，因此选择两者的总含量作为测定指标。
3．4  2000年版《中国药典》越鞠丸中栀子的TLC鉴别法采用醋酸乙酯一丙酮一甲酸一水(20：14：4：1)为展开剂，该系统为四元含水系统，具有组成复杂、展开时间长等缺点，故本研究采用氯仿一甲醇(3：1)为展开剂，收到了较好的分离效果，并克服了前者的缺点。文献[7]报道以甲醇一水的不同比例来测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，通过对几批样品的考察，按文中的流动相比例，能使二者完全分开，无杂质峰干扰，分离度好，灵敏度高。
3．5  穿心莲成分的含量与其产地、收期和加工提取工艺有很大的关系，这从3批成品样品的含量就可以看出。因此寻找合理稳定的指标成分，建立准确简便的分析方法，是今后的努力方向。