针灸延缓衰老的机制研究进展

    衰老又称老化，是指生物体发育成熟后，随着年龄的增加，自身机体功能衰退，对内环境的控制能力与应激能力降低。并伴有机体各组织器官功能等全面的不可逆的退行性改变：随着世界人口老龄化速度的日益加快，老龄问题已经成为世界性的突出社会问题。如何延缓衰老，提高老年人的生活质量已成为生命科学研究的重点：诸多研究显示针灸疗法在延缓衰老方面疗效确切。在疗效肯定的基础上，针灸延缓衰老的机制研究也取得了较大进展：本文对近十年来针灸延缓衰老的机制研究作一综述。
1抗自由基损伤
    研究证明，衰老的主要原因是自由基导致脂质过氧化，引起细胞破裂和进行性病变，维持体内适当水平的抗氧化剂和自由基清除剂能延缓衰老。针灸能够通过提高体内的抗氧化剂和自由基清除剂水平来延缓衰老。临床研究发现，隔药灸脐法能够改善衰老的临床症状，提高血清超氧化物歧化酶(SOD)含量，降低丙二醛(MDA)含量，提示隔药灸脐法能明显延缓衰老，其机制与改善体内SOD、MDA含量有关。动物实验研究中，封丽华等。4。建立亚急性衰老小鼠模型，发现艾灸能通过提高衰老小鼠SOD含量，降低MDA含量，改善自由基代谢，提高机体抗氧化能力，达到延缓衰老的目的。孙上明等观察到电针涌泉穴可升高老年大鼠血清和脑组织SOD活性，降低过氧化脂质(LPO)含量，以提高内源性抗氧化能力，改善自由基代谢，而延缓衰老。林庶茹通过针刺肾俞、关元穴能提高大鼠肾组织中SOD、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)活性，减少MDA的产生，抑制脂质过氧化反应。韦良玉等研究结果显示，艾炷灸可以通过提高D．半乳糖衰老小鼠脑组织总SOD、铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)的活力，保护脑细胞免受一氧化氮(N0)自由基损害，提高学习记忆能力，延缓脑组织老化。杨春英等发现针灸足三里穴能够降低皮肤组织MDA含量，增强GSH．Px活力，升高羟脯氨酸(Hyp)含量，而达到拮抗衰老小鼠皮肤衰老的目的。
2调节细胞周期和凋亡
    细胞周期是细胞生命活动的基本过程，细胞经历周期时相变迁进入增殖、分化、衰老和死亡等生理过程。细胞阻滞于Gl期，不能进入S期，细胞停止增殖而衰老，失去对有丝分裂原的反应能力和合成DNA的能力，细胞的衰老最终导致机体衰老。因此，调控细胞Gl／S期可能能延缓机体衰老。研究发现，艾灸肾俞可明显提高D-半乳糖诱导的亚急性衰老模型大鼠肝脏细胞蛋白激酶C(PKC)、蛋白磷酸酶2A(PP2A)的表达，使肝组织G0／Gl期细胞比例降低，增殖指数(PI)增高。临床研究亦显示，温和灸肾俞、关元穴可降低老年人外周血单核细胞G0／Gl期细胞比例，升高PI。提示艾灸可能通过降低细胞周期G0／Gl期比例，升高Pl，进而增加有丝分裂原的反应能力和合成DNA的能力，促使细胞进入S期而发挥延缓细胞衰老的目的。
    增龄过程中由于细胞凋亡调节机制异常，使细胞凋亡加快，促进机体老化和疾病发生。抑制细胞凋亡，延缓神经元的老化可能是针灸延缓衰老的重要机制。杜艳军等研究显示艾灸能明显降低老年大鼠海马线粒体膜电位、神经元凋亡的数量，降低海马及皮质半胱氨酸蛋白酶一3(caspase-3)的蛋白表达，有效抑制细胞凋亡的发生，延缓神经元的老化。赵果毅等研究提示艾灸神阙穴能有效改善衰老，可能是通过促进衰老大鼠海马神经元Bcl-2的表达，降低Bax的表达，进而抑制细胞的凋亡，减少神经元的丢失来实现的。原淑娟等观察到电针干预能显著增强大鼠脑海马组织中凋亡抑制基因Bcl一2蛋白的表达而抑制神经细胞凋亡，进而延缓衰老。王志强等研究发现针灸足三里穴能上调快速衰老小鼠脑组织Bcl-2基因mRNA的表达，而抑制细胞凋亡。
3减轻DNA损伤
    DNA损伤与细胞衰老是现代生物学研究的热点。DNA如果持续损伤能引起DNA复制或翻译错误，从而导致点突变或染色体重排及经由各种信号途径引起应激反应致使细胞衰老。张遵真等应用臭氧照射雄性小鼠制造衰老模型，以彗星试验对小鼠肝、脾细胞拖尾率和尾长进行检测，结果发现针灸能够降低异常增加的肝、脾细胞拖尾率和尾长，提示针灸能提高机体保护DNA的能力从而起到延缓衰老的作用。研究艾灸对衰老模型鼠外周血淋巴细胞DNA损伤程度影响的实验亦显示，艾灸能够通过减轻淋巴细胞DNA的损伤程度，从而达到延缓衰老的目的。此外，对增龄相关的线粒体DNA含量进行研究发现，D一半乳糖衰老大鼠肝细胞线粒体DNA含量明显增加，温和灸能减少衰老大鼠异常增加的肝细胞线粒体DNA含量而延缓衰老。
4提高免疫功能
    随着年龄增长，机体免疫功能不断衰退，各种免疫相关性疾病发病率逐步提高。而针灸在防病治病、延缓衰老方面，在很大程度上是通过调节机体的免疫功能来实现的。赵粹英等采用隔药饼灸治疗223例老年人，结果老年人经灸治后，衰老积分明显下降，在临床症状改善的同时细胞免疫功能增强，T淋巴细胞总数增加，CD4+／CD8+比值恢复正常，白细胞介素2(IL一2)合成分泌增加；B内啡肽(p—EP)作为免疫调节的神经介质，灸治后明显提高，提示衰老过程与免疫功能密切相关，艾灸能纠正异常免疫状态、稳定机体内环境达到延缓衰老之目的。钟兰等。研究显示，电热隔药贴灸神阙穴能提高老年前期大鼠红细胞C3b受体花环率(RBC—C3bRR)，降低红细胞免疫复合物花环率(RBC—ICR)，从而提高红细胞免疫功能，起到延缓衰老的作用。高希言等研究发现艾灸督脉穴能增加小鼠的胸腺、脾脏重量，提高胸腺、脾脏指数，有效地延缓了小鼠免疫器官的萎缩退化；且能增高小鼠T细胞亚群中CD3+、CD4+，降低CD8+，升高CIM+／CD8+比率和红细胞C3b受体花环率而增强机体的免疫机能。李佳等电针关元、足三里穴能升高亚急性衰老大鼠下丘脑室旁核(PVN)神经肽Y信使核糖核酸(NPYmRNA)，降低血清白细胞介素I6(IL-6)、PVN区IL．6R的水平，达到调节神经免疫功能的作用，进而延缓衰老。谢娃等怛钊观察到艾灸衰老小鼠的关元、足三里穴能明显升高血清IL-2水平、淋巴细胞转化率、脾脏指数，降低血清IL-6水平而增强衰老机体的免疫器官功能，提高淋巴细胞转化率，从多个途径增强或改善机体免疫功能。刘建
民等的研究显示电针强壮穴能通过提高T细胞增殖能力、T细胞分泌IL-2及其受体水平，以及提高CD8+T细胞表面分子CD28表达等而达到调节T细胞免疫，延缓衰老的目的。
5调节中枢神经递质
    中枢神经递质的含量变化是神经系统衰老的重要标志。随着增龄，生物体中枢内胆碱能神经系统功能逐渐衰退，表现为代谢失调，受体数目和亲和力的变化，导致中枢神经生理异常。艾灸能够通过调节中枢神经递质达到延缓衰老的作用。DUYan-jun等的研究发现艾灸能有效升高衰老大鼠基底神经节、海马、大脑皮质乙酰胆碱(Ach)的含量，提高乙酰胆碱转移酶(ChAT)的活性，从而达到对中枢胆碱能损害的修复作用，延缓脑老化。钟兰等研究提示电热隔药贴灸“神阙”和药饼灸均能显著提高老年前期大鼠大脑皮质5一羟吲哚乙酸(5一HIAA)、5一羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)的含量，说明灸法能通过提高大脑皮质单胺类神经递质含量而达到延缓衰老的目的。梁欣等研究发现耳针、艾灸能提高D一半乳糖大鼠血清褪黑素(MT)含量，增大MT昼夜节律性振幅而发挥其抗氧化、调节免疫及生物钟等功能，从而延缓衰老；进一步的研究提示耳针延缓衰老的机制之一可能是通过减少松果体中脂褐素(LF)的积累而干预松果体的氧化损伤，延缓松果体衰退进程，从而在一定程度上延缓机体衰老。王彤等研究显示调补气血针法能显著提高快速老化大鼠SAMPl0脑组织中的DA、5．HT、Ach含量，进而影响SAMPl0脑中枢神经作用，而改善了SAMPl0的神经损害，起到延缓脑衰老的作用。
6调节内分泌
    针灸对衰老机体生殖内分泌系统具有良好的调节作用。辛保玉等发现天灸可增加快速老化小鼠SAMPl0血清睾酮(T)含量，使E2／T比值下降，初步阐释了天灸延缓衰老的内分泌机制。刘晓艳报道针灸衰老小白鼠“气海”穴，能促进性腺激素分泌，增加性腺器官重量；在调节性腺激素、性腺重量方面，针与灸无显著差异，只有经穴才是有效刺激点。李晓泓的研究显示逆灸关元穴对更年期大鼠子宫退行性改变具有延缓作用，这种保护作用可能与逆灸调节子宫局部E2、孕酮(P)及雌激素受体(ER—α)表达有关。
7调控衰老基因的表达
    现已确定的与衰老和长寿相关的基因已达几十种。温廷益研究显示针刺能升高快速老化鼠脑、肝细胞核活性基因、提高基因转录水平。付于等发现，小鼠脑衰老与热休克蛋白84(HSP84)、热休克蛋白86(HSP86)基因表达异常有关，针刺可以通过上调SAMPl0鼠全脑、皮层、海马中HSP84、HSP86基因表达增强细胞保护、抵抗氧化应激、抑制细胞凋亡，从而起到延缓衰老的作用。丁晓蓉等对快速老化小鼠施予“益气调血，扶本培元”针法后，能逆转或部分逆转与脑老化相关的基因表达，而达到延缓脑老化的作用。于涛等应用cDNA阵列技术观察到针刺能下调快速老化小鼠SAMPl0中谷胱甘肽s转移酶、热休克蛋白86、成纤维细胞生长因子8、NF．kappa—B转录因子P65亚单位4个与氧化应激反应有关的基因的表达，改善氧化应激水平延缓脑衰老。樊小农等叫的实验研究发现，醒脑开窍法针刺能提高快速老化小鼠SAMPl0脑钙调神经磷酸酶(CaN)mRNA表达水平，起到良性调节脑老化的作用。付于等的进一步研究显示针刺能上调SAMPl0小鼠NF-E2、YB一1、LRG47在全脑、皮层、海马中的表达，增强红细胞系统功能和细胞增殖，提高细胞抗菌免疫，从而起到延缓衰老的作用。于建春等研究发现真核生物翻译起始因子EIF3．P66的表达伴增龄发生规律性的变化，可伴快速老化表达增加，而针刺可下调其表达，成为针刺延缓衰老的可能机制之一。张卫等研究显示针刺对衰老大鼠37条基因的表达有显著调节，其中蛋白质合成相关基因5条，针刺通过调节衰老过程中与蛋白质合成相关基因的表达量，调节机体蛋白质的含量与组成比例，起到改善机体功能状态延缓衰老的作用。
8调节细胞衰老信号通路
    细胞衰老是指可增殖细胞在信号通路的调控下，不可逆地脱离细胞周期后进人的一种相对稳定的状态。细胞衰老是借助于信号调控机制来实现的，其中P19ARF／P53／P21 CiPl和Pl6／Rb两条信号通路是比较公认的细胞衰老信号转导途径。处于衰老诱导信号转导途径核心位置的几个抑癌基因的产物，主要包括Rb、P53、Pl6INK4a、Pl9ARF、F21Cipl抑癌蛋白等。当这些途径中的关键调节因子发生突变，细胞将发生早老或绕过衰老程序继续增殖。近年来对衰老相关通路的研究得到一定的发展，主要是从细胞衰老诱导途径中核心位置的几个抑癌基因的产物着手研究。如杜艳研究发现艾炷灸能降低D一半乳糖衰老小鼠大脑皮质P16蛋白表达，增强PRb的表达而达到延缓衰老的目的。李珉等电针涌泉穴能下调抑癌蛋白P53基因表达以延缓衰老；由P53控制的细胞衰老信号途径至关重要，下调P53基因的表达能有效延缓衰老。本课题组的研究发现温和灸亚急性衰老大鼠“肾俞”穴，能显著降低其肝组织中羰基蛋白的含量，并下调肝组织Pl9ARF、P53mRNA的表达，提示温和灸“肾俞”穴可能是通过有效调节细胞衰老P19ARF／P53／P21 CiPl通路中的关键因子而达延缓衰老之目的。
9结语
    针灸延缓衰老具有悠久的历史，早在《黄帝内经》中对针灸延缓衰老的理论和应用就有详细记载，其作用确切，值得深入系统地进行研究。综上所述，近十年来针灸在延缓衰老的机制研究方面得到了快速的发展，主要集中在抗自由基损伤，调节细胞周期和凋亡，修复DNA损伤，调节免疫功能，调节中枢神经递质，调节内分泌，调控衰老相关基因和衰老相关信号通路等方面，可以发现针灸延缓衰老是多靶点、多方位的，因此从不同角度、不同方面系统全面地阐释针灸延缓衰老的效应机制，仍是我们今后的研究方向。
    在针灸延缓衰老的机制研究中，衰老动物模型是研究的关键。衰老模型的多样化、无法统一使得研究结果的可重复性得到质疑，衰老模型的研究亦有待于进一步开展；衰老的观察指标繁多，针灸干预衰老选穴处方亦不统一，探寻针灸延缓衰老的关键效应指标、优选穴位处方，对于针灸延缓衰老机制的阐明具有重要意义。此外，目前针灸延缓衰老的研究主要以在体实验为主，细胞离体培养的衰老相关研究相对较少；针灸调节细胞衰老信号通路的研究刚刚开展；今后针灸延缓衰老的研究，在注重在体实验研究的同时应加强离体实验研究；还要从细胞周期及其细胞衰老信号通路等方面进一步推进针灸延缓衰老的分子机制研究，丰富和发展针灸理论。
    针灸延缓衰老的研究期待新的理论基础与实验技术方法的突破，不断应用现代医学的研究方法和成果进一步深入研究针灸延缓衰老的作用机制，将有助于针灸延缓衰老作用机制的全面阐明，促进针灸疗法在延缓衰老中的进一步应用与推广。