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【摘要】 目的 探讨中药野菊花、白花蛇舌草、车前草对解脲支原体（Uu）的抑菌作用，为中药应用于临床治疗Uu感染，提供实验依据。方法 以水提法制备三味中药原液，以琼脂稀释法测定野菊花、白花蛇舌草、车前草对71株Uu的最低抑菌浓度（MIC）。结果 野菊花、白花蛇舌草对Uu具有明显的抑制作用，MIC均为125mg/ml。14株标准菌株中未发现对此两种中药的耐药菌株。车前草无明显的抑菌作用。三味中药均对细胞无明显毒性。结论 野菊花、白花蛇舌草在体外对Uu均有明显的抑制作用，车前草无明显抑菌作用。
关键词 解脲支原体（Uu） 中药 琼脂稀释法 最低抑菌浓度（MIC）
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106（2004）13-1235-02
Experimental study about inhibitory effects of
three Chinese traditional medicines on Uu in vitro
Dong Haiyan，Zhou Liping，Wang Ledan Microbiological Immunity Teaching and Researching Section，Wenzhou Medical College325000.
【Abstract】 Objective To investigate the inhibition of three Chinese traditional medicines，Chrysanthemi inˉdicum，Oldenlandia and hedyotis diffusa on ure aplasma urealyticum（Uu）and provide the experimental information about treatment of clinical Uu infction.Methods The minimum of inhibitory concentration（MIC）of three Chinese traditional medicines dilutions，which were extracted by water，was determined on seventy one strains Uu by agar diluˉtion methods.Results Floschrysanthemi，oldenlandia have significantly inhibitory effects on Uu，the MIC was both250mg/ml.The effects were related to concentrations.There is no resistant
strain of fourteen standard strains.herba plantaginis had no significant resistant effect.Three Chinese traditional medicines hadn’t cytotocity.Conclusion In vitro，Flos chrysanthemi，oldenlandia had significant resistant effects on Uu，but herba plantaginis hadn’t.
Key words ureaplasma urealyticum（Uu） Chinese traditional medicines agar dilution MIC
解脲支原体（Ureaplasma urealyticum，Uu）是引起男女泌尿生殖系统感染的常见病原体，也是男性不育及不良妊娠的重要原因之一。由于Uu没有细胞壁，故对青霉素类药物不敏感，仅对四环素类抗生素敏感。但是随着抗生素的广泛使用，耐药菌株不断增多 ［1］ 。因此，我们应用琼脂稀释法测定野菊花、白花蛇舌草、车前草三味中药对Uu的体外抑制作用，为中药应用于临床治疗Uu感染提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 解脲支原体菌株 1～14型标准菌株:由南京铁道医学院赵季文教授惠赠;57株临床分离株:均分离自温州医学院附属二院门诊的生殖系统感染患者分离所得，经鉴定后-20℃保存备用，共71株。
1.1.2 中药 野菊花、白花蛇舌草和车前草成药均购自温州市老香山药店，并经生药鉴定。
1.1.3 实验细胞来源 为人绒毛膜单层细胞，取自温州医学院附属二院妇产科门诊人工流产病人。取停经50d人工流产绒毛常规消化，置5%水解乳蛋白细胞培养液（含10%～20%小牛血清）3～5d成单层细胞备用。人绒毛膜单层细胞为本研究室自行制备，取停经50d人工流产的绒毛制备单层细胞3～5d，长成单层细胞。
1.1.4 Uu培养液及半固体培养基 按照本研究室常规方法制备，参见文献 ［2］ 。
1.1.5 含有中草药的药物平板的制备 制备半固体培养基，融化冷至50℃加入不同浓度的实验中草药，摇匀，冷却备用。以生理盐水做对照。
1.2 方法
1.2.1 中药原液制备 采用水提法 ［3］ 。三味中药各取100g，用蒸馏水300ml浸泡30min，强火加热煮沸，文火煮30min，搅拌，过滤。药渣再加入蒸馏水150ml，按上法煎熬、过滤。两液混合并浓缩成100ml，pH值调至6.0，过滤除菌后，作为原液（1ml药液相当于原药材1g），存放冰箱贮存备用。实验前以Uu培养液稀释。
1.2.2 细胞毒性实验 分别取12.5mg/ml野菊花、白花蛇舌草和车前草接种已成单层人绒毛细胞，置5%～10%CO 2 培养箱，37℃培养3～5d，以细胞未出现变圆、肿胀、皱缩、融合等病变并与正常细胞一致，确认该药物对细胞无毒性作用。
1.2.3 MIC测定方法 采用琼脂对倍稀释法 ［4］ 。于直径9cm灭菌培养皿中分别加入不同浓度中药药液1ml，然后注入已经融化的冷却至45℃的Uu琼脂培养液9ml，立即旋转混匀，凝固。分别取已传代3次的71株实验菌株各10μl接种于含有不同浓度三种中草药的琼脂平板（每个平板划10区，分别接种10株待检Uu菌株），生理盐水作为对照。置于5%CO 2 培养箱，37℃孵育48～72h置低倍镜下观察每一株菌在含不同药物各种浓度琼脂平板上阳性菌菌落数，取5个视野，取平均值。以未见菌落生长为最低抑菌浓度（MIC）。