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【摘要】 目的 探讨黄柏中多糖的含量和黄柏粗多糖初步的药理作用。方法 采用蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量。ELISA双抗体夹心法验证黄柏多糖对HBsAg、HBeAg的影响。结果 黄柏多糖含量为6.94%;ELISA双抗体夹心法实验证明黄柏粗多糖能降低OD值。结论 黄柏多糖是黄柏的主要有效成分之一;黄柏粗多糖对乙肝抗原有一定的抑制作用。
关键词 黄柏 多糖蒽酮-硫酸比色法 药效
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106（2004）13-1237-02
Studying and assaying on polysaccharides of Phellodendron amurense
Lai xiaoping，Lv Xiaolan，Deng Huancai，et al.
Department of Pharmacy，Jiangxi Medical College，Nanchang330006.
【Abstract】 Objective To study the polysaccharides contents and pharmacological effects of phellodendron aˉmurense Rupr.polysaccharids.Methods Anthrone-sulfonic acid colorinetry was applied to analyze the contents of polysaccharides.ELISA was used to determine the effects on HBsAg and HBeAg.Results The content of phellodenˉdron amurense Rupr.polysaccharids was6.94%and it could dcrease OD.Conclusion Polysaccharids is one of the main effctive constituents of phellodendr on amurense Rupr.Coarse phellodendron amurense Rupr.Polysaccharids show inhibitive effects on Hpatitis B antigen.
Key words phellodendron amurense Rupr polysaccharids anthrone-H 2 SO 4 color imetry pharmacological effect
黄柏（Phellodendron amurense Rupr.）的树皮，具有清热燥湿，泻火解毒的功效。临床用于热痢、泄泻、消渴、黄疸等证。其所含化学成分为小檗碱、药根碱、木兰花碱、黄柏碱、N-甲基大麦芽碱、掌叶黄己碱、蝙蝠葛碱等生物碱;另含黄柏酮、黄柏内酯、白鲜交酯、黄柏酮酸、7-脱青豆甾醇、β-谷甾醇、菜油甾醇等成分 ［1］ 。黄柏多糖的研究未见报道，我们采用了蒽酮-硫酸比色法 ［2］ 测定黄柏中多糖的含量，并对黄柏粗多糖的药理作用进行了初步的探讨。
1 仪器与试剂
752紫外分光光度计（上海精密仪器有限公司分析仪器总厂）。TDL-40B台式低速离心机（上海安亭科学仪器厂）。RE-52A旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）。黄柏购自江西省中医院中药房。蒽酮、无水葡萄糖及其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 多糖的提取与纯化 取黄柏5.0g至100ml圆底烧瓶中，加入60ml85%乙醇，加热回流提取2次。药渣挥干乙醇后，加入10倍量的蒸馏水，90℃保温3h。如此提取3次，合并提取液，旋转蒸发浓缩至原体积的四分之一，浓缩液用95%乙醇调至溶液含醇80%，置冰箱过夜。离心分离，沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚各洗涤3次，真空干燥，备用。
2.2 溶液的配制
2.2.1 蒽酮溶液的配制 称取蒽酮0.2g，加浓硫酸100ml，混匀即可（现配现用）。
2.2.2 标准葡萄糖溶液的配制 精密称取干燥至恒重的无水葡萄糖配制成浓度为1.0640mg/ml的溶液，备用。
2.2.3 多糖溶液的配置 精密称取干燥至恒重的黄柏多糖，配制成516.0μg/ml的溶液，备用。
2.2.4 样品溶液的制备 精密称取黄柏粉末0.1034g，用85%乙醇回流提取3h，过滤，滤渣用85%热乙醇洗涤2次，挥干乙醇后，用蒸馏水20ml，90℃保温3h，过滤，滤渣用蒸馏水洗涤3次（每次6ml）。然后，加蒸馏水配制成50ml备用。
2.2.5 标准曲线 精确吸取标准葡萄糖溶液0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml于10ml的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。分别取2.0ml于10ml具塞试管中，以2.0ml蒸馏水作空白对照，各加蒽酮-硫酸试液4.0ml，摇匀，置沸水中加热8min，迅速冷却至室温，于620nm测定吸光度A，以浓度C对A回归，得回归方程A=1.054×10-2C+0.03046（r=99.87%），表明葡萄糖在3.55～24.83μg/ml范围内与吸光度呈较好的线性关系。
2.2.6 换算因子的测定 取多糖溶液2.0ml和蒽酮-硫酸试液4.0ml于10ml具塞试管中，混匀，以下按2.2.5项操作测定A值，计算多糖溶液中葡萄糖含量。算得f=3.654，RSD=1.40%（n=5）。
2.2.7 加样回收率的测定 精密称取黄柏粉末0.1009g，加入一定量的黄柏多糖，用85%乙醇回流提取3h，过滤，滤渣用热85%乙醇洗涤2次，挥干乙醇后，用蒸馏水20ml，90℃保温3h，过滤，滤渣用蒸馏水洗涤3次（每次6.0ml）。然后，加蒸馏水配制成50ml。取2.0ml于10ml具塞试管中，以2.0ml蒸馏水作空白对照，各加蒽酮-硫酸试液4.0ml，摇匀，置沸水中加热8min，迅速冷却至室温，于620nm测定吸光度A，计算回收率为99.75%，RSD=2.02%（n=5）。
2.2.8 样品中多糖测定 精取样品溶液2.0ml和蒽酮-硫酸试液4.0ml于10ml具塞试管中，混匀，以下按2.2.5项操作测定A值，求出样品溶液中葡萄糖含量，按下式计算得黄柏中多糖的含量为6.94%，RSD=2.89%（n=5）。公式:多糖%=C×D×f W %C为样品溶液中葡萄糖浓度μg/ml）;D为样品溶液的稀释因数;f为换算因子;W为样品重量（μg）。
3 黄柏多糖对HBsAg、HBeAg的影响