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【摘要】 目的 探讨整和素α5、β1在鼻息肉组织中的表达及其与嗜酸粒细胞凋亡的相关性。方法 采用流式细胞法检测糖皮质激素治疗前后的鼻息肉组织（13例）中整和素α5、β1含量及凋亡的嗜酸粒细胞，并与7例健康人下鼻甲黏膜检测结果进行比较。结果 鼻息肉组织中有大量嗜酸粒细胞浸润，明显高于下鼻甲黏膜组；整和素α5、β1主要表达在嗜酸粒细胞，其次在血管内皮细胞也有表达；鼻息肉组织中嗜酸粒细胞表面均有整和素α5、β1表达，而下鼻甲黏膜组只有2例有整和素α5、β1表达，两组标本嗜酸粒细胞中整和素α5、β1的表达差异有显著性（P<0.05）；激素治疗后鼻息肉中整和素α5、β1的表达有下降趋势，但差异无显著性（P>0.05）。结论 整和素α5、β1在鼻息肉中高表达，但对嗜酸粒细胞凋亡的影响尚不能得出有意义的结论。
【关键词】 整和素α5、β1；鼻息肉；嗜酸粒细胞；凋亡
鼻息肉是鼻部的常见病，发病率1%～4%［1］，具体的发病机制仍未完全阐明。嗜酸粒细胞增多是其主要的病理特征，也是发病的关键。组织对嗜酸粒细胞的清除是依靠自身的凋亡作用来完成的。本研究采用流式细胞术（flow cytometry，FCM）检测糖皮质激素治疗前后鼻息肉组织中整和素α5、β1表达情况，并分析其在鼻息肉嗜酸粒细胞聚集及凋亡过程中的作用。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2003年9月～2005年12月依据海口标准［2］诊断为慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者13例，均为Ⅱ型1～3期。男8例，女5例，年龄17～63岁，平均46.7岁。同时期住院行鼻中隔黏膜下切除术患者下鼻甲黏膜标本7例。男5例，女2例，年龄21～39岁，平均29.7岁。
1.2 标本收集 所有患者经变应原试验确定无变应性鼻炎病史，就诊前至少1个月未用过激素及抗组胺药物治疗。鼻息肉患者一经确诊，咬取小块息肉组织备用，然后进行激素治疗：丙酸氟替卡松喷鼻200μg/喷，2喷/次，1次/d，连续4周。4周后给予鼻息肉摘除手术，留取息肉组织标本备用。下鼻甲黏膜在患者手术时取得。所有标本均分2份。
1.3 主要试剂和仪器 整和素α5、β1鼠抗人单克隆抗体购自博士德公司，苏木精-伊红（HE）染色剂、离心机（国产LDZ5-2型）、流式细胞仪（美国库尔特公司FAScan-420型产品）及其配套软件均由河北医大四院肿瘤研究所提供。
1.4 检测方法 所有标本经10%福尔马林固定，按常规制成石蜡块保存备用。检测时一组蜡块制成5μm厚的石蜡切片，常规HE染色，200倍光镜下记数炎症细胞高分区嗜酸粒细胞的数量。另一组标本常规脱蜡至水后，取5g组织用眼科剪刀在260目尼龙网上制成单细胞悬液，用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗1次，离心1500r/min， 5min，弃上清液，重复上述冲洗、离心步骤，复制体积为0.2ml含1×105单细胞悬液，分2管，一管为PE标记鼠抗人α5、β1单克隆抗体，另一管为IgG PE阴性对照抗体。每管放0.1ml单细胞悬液充分混匀后室温暗处静置15min，每管加20ml PBS，上机检测。流式细胞仪检测时使用激发波488nm，横轴为绿荧光，纵轴为90°侧向散射光，记数5000个，在直方图上，以PE标记IgG对照单抗调整并确定电压及放大倍数。
凋亡检测采用APO 2.7标记法取1×106个细胞，加入digitonin（sigma），冰浴20min，用冷PBSF冲洗1遍，加20ml APO2.7-PE，震荡、混匀，室温避光15min，用PBSF冲洗1遍，弃上清液，重悬，避光至上机检测。
1.5 统计学分析 实验结果采用统计软件SAS 6.0进行分析，用t检验进行统计学分析。
2 结果
13例激素治疗前鼻息肉标本中均有大量嗜酸粒细胞浸润，下鼻甲黏膜中虽有嗜酸粒细胞浸润，但数量明显少于鼻息肉组织；激素治疗后的鼻息肉标本中嗜酸粒细胞明显减少，但仍高于下鼻甲黏膜。整和素α5、β1主要在嗜酸粒细胞中表达，在血管内皮细胞中亦可见整和素α5、β1表达；在鼻息肉组织中的表达明显高于下鼻甲黏膜，两者差异有显著性（P<0.05）；在糖皮质激素治疗后的鼻息肉组织中整和素α5、β1的表达略较治疗前的鼻息肉组织中减少，但两者差异无显著性（P>0.05）。见表1。表1 整和素α5、β1在鼻息肉中的表达情况本研究发现，不论激素治疗与否，均未见凋亡的嗜酸粒细胞。
3 讨论
鼻息肉是以黏膜炎性病程进展及纤维渗出为主，以大量的炎细胞尤其是嗜酸粒细胞浸润为病理特点。本研究结果证实鼻息肉组织中嗜酸粒细胞含量大大高于下鼻甲黏膜，显示嗜酸粒细胞聚集在鼻息肉的发生、发展中起着重要作用。这与以往的研究结果一致。嗜酸粒细胞从外周血跨过血管壁并定向聚集到鼻黏膜局部，这一过程需要借助包括整和素、选择素等多种黏附分子来介导［3～5］。白细胞从血液进入组织的前提是白细胞与血管内皮细胞黏附，这一过程包括白细胞和血管内皮细胞表达选择素、启动黏附过程，使白细胞流动减慢并沿血管壁滚动；血管内皮细胞表达细胞因子，活化以整和素为代表的黏附分子［6］；整和素介导白细胞与内皮细胞紧密黏附，白细胞穿越内皮细胞移行进入组织。但某种特征性黏附分子表达失控则引起异常的免疫应答，导致疾病发生。
大量研究证实糖皮质激素可以通过抑制多种细胞因子的表达来减少嗜酸粒细胞的浸润。张罗等［7］报道布地奈德治疗可减轻鼻息肉组织中炎性细胞的浸润，提示糖皮质激素类药物可能使鼻息肉组织中细胞因子IL-5的表达水平下降。机体正常状态下，整和素α5、β1呈低表达，当病变局部的细胞因子如IL-5等释放时，整和素α5、β1等表达量上调，使内皮细胞对嗜酸粒细胞的黏附作用增强，进而选择性地聚集于鼻黏膜。本研究中丙酸氟替卡松治疗4周鼻息肉组织中嗜酸粒细胞的浸润程度明显减轻，同时鼻息肉组织中整和素α5、β1阳性细胞的数量较未经治疗的鼻息肉组织有下降趋势，但结果无统计学意义。可能是由于：（1）标本不是新鲜组织；（2）药物本身的作用强度、剂量、作用方式和疗程等因素的作用，使糖皮质激素对整和素α5、β1在鼻息肉组织中表达的影响显得不明显。
本研究采用流式细胞术检测鼻息肉与正常下鼻甲黏膜中整和素α5、β1的表达，发现鼻息肉组织中的整和素α5、β1的表达明显高于下鼻甲黏膜（P<0.05），提示整和素α5、β1在鼻息肉形成过程中起着一定作用。整和素α5、β1主要在嗜酸粒细胞中表达，整和素α5、β1的高表达与嗜酸粒细胞的聚集密切相关，提示可能在嗜酸粒细胞黏附于基底膜过程中起促进作用。实验证明整和素α5、β1可选择性地介导嗜酸粒细胞与血管内皮细胞之间的黏附穿内皮迁移，继而促进嗜酸粒细胞在鼻息肉组织中的浸润［8］。
本研究采用流式细胞法检测鼻息肉组织中嗜酸粒细胞的凋亡，不论激素治疗与否，均未发现凋亡的嗜酸粒细胞，这与张罗等［10］关于糖皮质激素诱导体内鼻息肉组织中嗜酸粒细胞凋亡的研究结果相一致。但张罗等关于糖皮质激素诱导体外鼻息肉组织中嗜酸粒细胞凋亡的研究结果得出与此相反的结果，而且Davidsson［11］最近的研究显示，糖皮质激素药物喷鼻治疗后鼻息肉中可检测到凋亡嗜酸粒细胞，肯定了激素类药物在体内通过诱导嗜酸粒细胞的凋亡，促使炎性反应消散的作用。
鼻腔应用糖皮质激素类药物是目前临床治疗鼻息肉的重要辅助手段之一，相关研究从不同侧面阐述了激素作用的途径和机制。本研究关于嗜酸粒细胞浸润的结果与以往的研究相符，但激素诱导嗜酸粒细胞凋亡的结果与以往的结果有不尽相同之处，有待进一步研究。
【参考文献】
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10 张罗，韩德民，张伟，等.糖皮质激素诱导鼻息肉组织中嗜酸粒细胞凋亡的体外体内研究.耳鼻咽喉-头颈外科，2001，8：296-299.
11 Davidsson A，Andersson T，Hellquist HB.Apoptosis and phagocytosis of tissue-dwelling inophils in sinonasal polyps.Laryngoscope，2000，110：111-116.
*基金项目：河北省科技攻关计划项目（编号：05367）
作者单位： 1 050011 河北石家庄，河北老年病医院耳鼻喉科
2 河北石家庄，河北医大第四医院
（编辑：萧 凝）