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【关键词】血型；血清；二巯基乙醇
血清中IgG抗A（B）效价的测定，是预测ABO血型不合发生新生儿溶血病（HDN）可能性的重要试验项目。文献报道［１，２］及权威实验室的实验方法有明显不同，但都以效价大于或等于 64 作为判断血型不合婴儿受害的参考值［１，３，４］。我们对在不同条件下所用方法进行了比较分析，报告如下。
1资料与方法
1.1标本来源对我市数家医院送检的孕妇血液标本，我们以某血液中心血型参比室的操作方法进行抗A或抗B的效价测定，随机抽取 60 例血清标本作为实验对象。
1.2试剂二巯基乙醇；多特异性抗人球蛋白试剂（批号：20040306）购于上海市血液中心；A型或B型红细胞悬液由本院中心实验室配制。
1.3方法
1.3.1血型参比室操作方法：血清中加入等量二巯基乙醇放37℃水浴作用 10 min。取0.05 ml处理血清加入 10 支各含 0.05 ml生理盐水的第一管中然后倍比稀释，加入 2%A型或B型红细胞悬液0.05 ml于每一管中，37℃孵育 30 min，用生理盐水洗涤3 次后，每管加入一滴抗人球蛋白试剂，离心，观察结果，以凝集强度“+”稀释度的倒数为IgG抗A（B）效价。
1.3.2其它操作方法按文献［1，2］步骤进行。每管中加入红细胞悬液里均为0.05 ml。
5结果
2.1二巯基乙醇处理血清时间的不同对测定的影响见表 1（Ridit 分析法）。
表 1不同处理时间对结果的影响（略）注：χ2=3.164，P＞0.05
2.2血清处理时间为10 min，稀释血清与红细胞反应时间的长短对检测结果的影响见表 2。
表 2不同反应时间对结果的影响效价[略]注：χ2=5.612，P＞0.05。
2.3倍比稀释量的多少对检测结果的影响（反应时间为30 min）见表 3。
表 3稀释量的多少对结果的影响效价[略]注：χ2=86.182，P＜0.01。
3讨论
血清中IgG抗A（B）效价测定是一种间接抗人球蛋白实验，目的是通过检测血清中抗体结合在红细胞上的数量来推测血清中抗体含量的高低，是目前预测ABO新生儿溶血病发生可能性不可缺少的项目，方法虽然简单，但文献［１，２］介绍少，造成了实验室之间方法的差异，结果可比性降低。从结果来看，二巯基乙醇对血清处理时间、血清与红细胞的作用时间来对比看，选择血清处理时间为 10 min，血清与红细胞反应 30 min是可以的，这符合试验简便快速的要求。我们观察到，稀释量的多少对结果的影响较大。随着稀释量的增加效价也升高，且有显著性差异。其原因为，抗体与红细胞抗原的结合不符合一般的抗原体结合方式：一般［Ag］+［Ab］=［AgAb］，只要抗体浓度不变，抗原抗体复合物浓度不变，与稀释量无关。但IgG抗A（B）抗体与A型（B）红细胞结合时，由于受红细胞体积、表面位阻、结合水膜的影响，一个红细胞需要结合多个抗体才能在抗人球蛋白实验中显示出来。据文献报道［５］，每个细胞至少要包被200~500 个IgG分子才能检测出来。被稀释血清量的多少决定了抗体量的多少，直接影响到结合 200 ~ 500 个IgG分子红细胞产生的多少，所以造成结果的差异。但不是随稀释量的无限增加而效价也在增加，我们对照 0.2 ml与0.4 ml稀释量，结果无差异。我们增加红细胞悬液量至 0.1 ~ 0.2 ml，结果也无差异，其机制有待于进一步研究。有些实验室习惯用滴管进行血清的倍比稀释，我们认为该方法会导致结果不准确。一是滴管的角度、口径对稀释量造成误差，二是稀释血清的粘稠度不同于生理盐水。刚稀释时滴大而后逐渐变小，稀释度不准，造成结果偏高。从上述结果看稀释量对结果有较大影响，滴管无法保证稀释量的多少。应该用比较准的加样器进行稀释，以保证结果的正确性。IgG抗A（B）效价是指凝集强度为“+”时稀释度的倒数，因而出现效价为1∶64［3，4］是不妥当的。作为一项常规检测项目，操作规程应力求统一，制定出参考值，以便使检测结果具有可比性，维持检测结果的真实性和严谨性。
参考文献
1.肖星甫.输血技术手册［Ｍ］.成都：四川科技出版社，1992.160 ~ 506
2.叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程［Ｍ］.第 2 版.南京：东南大学出版社，1997，101 ~ 102
3.罗丽兰.生殖免疫学［M］.武汉：湖北科学技术出版社，1998.106
4.王梦玖.临床生殖免疫学［Ｍ］.上海：上海科学技术出版社，2000.288
5.李勇，杨贵贞.人类红细胞血型学实用理论与实验技术［Ｍ］.北京：中国科学技术出版社，1999.262
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