RPHPLC法测定拟眩宁胶囊中黄芩苷的含量

　   【关键词】  HPLC；拟眩宁胶囊；黄芩苷；含量测定

　    拟眩宁胶囊有苍耳子（炒）、菊花、胆南星、黄芩等药味经加工制制，其清肝胆、利湿热，用于头晕目赤、胁痛口苦、湿热带下。其质量标准收载于原《卫生部药品标准》中药成方制剂第六册，但标准中没有制定含量测定方法，不能有效的控制药品质量。方中黄芩清热燥湿、泻火解毒，为臣药，其有效成分为黄芩苷等［1］。为此，我们试用HPLC法测定拟眩宁胶囊内的黄芩苷含量，作为该制剂的质控方法之一，取得满意效果。

    1  仪器和试药

　SP1000高效液相色谱仪，SP100 UV检测器（美国SpectraPhysics公司），工作站：大连Frank1000，ODS（46 mm×200 mm，5 μm）大连依利特，黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：715200010），拟眩宁胶囊由某药业有限公司提供（批号20040706  20040911，20050106）。甲醇为色谱纯。

    2  实验方法

    21  色谱条件  流动相：甲醇—水—冰醋酸（45∶55∶1），流速：10 ml/min，检测波长：276 mm。

    22溶液的制备

    221  对照品溶液：精密称取60℃干燥4 h的黄芩苷对照品125 mg，置25 ml容量瓶中，加50%甲醇适量，振摇，使对照品溶解，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀。超声除去气泡，用50%甲醇补足至刻度。

    222  样品溶液：取本品10粒，研细，混匀，精密称取1 g，置100 ml容量瓶中，加50%甲醇，超声处理20 min，放冷，加50%甲醇至刻度，滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得。

    223  阴性对照液：取缺黄芩的处方药，按标准制法，制备不含黄芩的阴性对照样品，按样品溶液制备方法制备阴性对照液。

    23  系统适用性试验  分别取对照品溶液、样品溶液、阴性对照液注入色谱仪，记录色谱图。黄芩苷峰保留时间约为66 min，阴性对照色谱图在黄芩苷峰位置无假阳性峰，即本试验条件下黄芩苷峰与其它组分分离完全，表明其它组分对测定无干扰。黄芩苷峰与其它组分峰的分离度为35，理论塔板数以黄芩苷峰计算为26320。

    3  结果

    31  线性考察  精密量取对照品溶液（05 mg/ml）05，10，20，30，40，50 ml分别置10 ml容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀。每个浓度点进样2次测定，各进样10 μl，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标进行线性回归。结果表明，峰面积与进样量呈良好线性关系，回归方程为：y＾=5896×106x-80887×104，r=09991，范围为025~25 μg。

    32  加样回收实验  取已知含量拟眩宁胶囊适量，精密称定，精密加入黄芩苷对照品液适量，按222样品溶液制备，从“置100 ml容量瓶中……”开始，制备回收实验液，按35样品测定方法测定含量，计算回收率。结果平均回收率为9880%，RSD=109%（n=5）。

    33  方法精密度考察  依法对同一样品分别进行5次独立测定，测定结果的RSD=092%。结果表明，本法具有一定的精密性。所选定的色谱条件系统稳定。

    34  重现性试验  取同一拟眩定胶囊样品5份，按供试液制备方法制备，分别依法测定。结果，黄芩苷含量RSD为099%，表明本法重现性好。

    35  样品测定  取对照品溶液01 mg/ml和样品溶液用045 μm微孔滤膜滤过，各进样10 μl，读取峰面积值，按外标法计算含量，结果见表1。表1  3批样品测定结果批号

    4  讨论

    41  用HPLC法测定黄芩苷含量，文献中有多种流动相［2，3］，比较了多种比例的甲醇—醋酸—水的分离效果，以甲醇—醋酸—水（45∶1∶55）为优，其与杂峰分离度为30；保留时间适中。

    42  用50%甲醇超声处理20 min后的样品，继续用50%甲醇超声10 min提取，同法测定，结果几乎测不到黄芩苷，表明本法提取完全，无需复杂的提取方法。

    参  考  文  献

    1王本祥现代中药药理学［M］天津：天津科学技术出版社，1997299

    2宋宁宁高效液相色谱法测定复方鱼腥草颗粒中黄芩苷的含量［J］药物分析杂志，1999，19（1）：63

    3卫生部药典委员会卫生部药品标准新药转正第十四册［S］.19986

   1 博兴县人民医院  256500；2 滨州市药品检验所；3 博兴县中心医院