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Home医源资料库在线期刊滨州医学院学报2006年第29卷第6期

山东籍汉族寻常型天疱疮与HLADRB1基因的相关性研究

来源:滨州医学院学报
摘要:【摘要】目的探讨HLADRB1、DQB1位点基因在山东籍汉族寻常型天疱疮易感性中的作用。方法用序列特异性引物聚合酶链反应(PCRSSP)方法,对61例寻常型天疱疮(pemphigusvulgaris,PV)患者和57名正常对照者进行了HLADRB1、DQB1等位基因的分型,并分析了DRB1、DQB1基因在两组中的分布。结果与正常对照组比较,PV患......

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       【摘要】  目的  探讨HLADRB1、DQB1位点基因在山东籍汉族寻常型天疱疮易感性中的作用。方法  用序列特异性引物聚合酶链反应(PCRSSP)方法,对61例寻常型天疱疮(pemphigus vulgaris,PV)患者和57名正常对照者进行了HLADRB1、DQB1等位基因的分型,并分析了DRB1、DQB1基因在两组中的分布。结果  与正常对照组比较,PV患者组DRB1 *14(*1401、*1404、*1405)基因频率明显增高(Pc分别<0.05)。结论  HLADRB1*14是山东籍汉族PV的易感基因。

    【关键词】  天疱疮;寻常型;聚合酶链反应;HLADRB1

    Association between HLADRBl genes and pemphigus vulgaris in Han Shandong Chinese

    ZHOU Shuhua  WANG Xiumin  HAN Zhaodong  et al

    Department of Dermatology,Affiliated Hospital of Binzhou Medical College,Binzhou 256603

    【Abstract】  Objective  To investigate the predisposing role of HLADRB1 genes in pemphigus vulgaris(PV).Methods  We used polymerase chain reactionspecific sequence primers method to type HLADRB1,DQB1 subregion in the patients with PV of Han nationality from Shandong Province and matched control subjects.Results  The results demonstrated that DR4,DRB1*14(*1401,*1404,*1405)gene frequencies were significantly higher in PV than those in controls(Pc<005).Further typing of DR4 positive subjects revealed that the gene frequencies of DRB1*0406 were significantly in PV patients compared with controls(P<005).Conclusion  The results suggested that HLADRB1*14 may be the susceptible haplotypes for PV patients in Chinese Han.

    【Key words】  pemphigus  vulgaris,PCR,HLADRB1,HLADQB1

    天疱疮是一种原因不明的自身免疫性疾病,结合于角质形成细胞表面的自身抗体导致细胞连接松弛,结果使皮肤粘膜发生水疱或大疱[1]。国外研究提示,本病与HLAⅡ类基因相关。为探讨遗传易感性在天疱疮发病机制中的作用,本文用序列特异性引物聚合酶链反应(PCRSSP)方法对山东籍汉族人寻常型天疱疮(pemphigus vulgaris,PV)患者进行了HLADRB1基因分型,并探讨HLAⅡ类在我国PV发病中的作用。

    1  对象与方法

    11  研究对象  选择山东籍汉族PV患者,为2001年8月至2004年1月门诊或住院者,共53例。根据临床表现、组织病理和免疫荧光确诊,并无其他免疫性疾病,其中男30例,女23例,年龄27~82岁,平均年龄(4637±1323)岁。对照组为山东地区与患者无血缘关系的健康汉族个体,共70人,年龄19~74岁,平均年龄(4911±1251)岁;其中男37人,女33人。除记录年龄、性别、病程等一般情况外,根据以下内容对患者进行登记随访,①病情:根据治疗前皮损情况将病情分为轻度、中度与重度。水疱、红斑或糜烂面数目≤20块,或皮损面积≤15%体表面积者为轻度。水疱、红斑或糜烂面20~50块,或皮损面积占体表面积的15%~50%者为中度。水疱、红斑或糜烂数目≥50块,或皮损面积≥50%体表面积,或粘膜损害明显以及皮损面积≥40%体表面积者为重度。②有无黏膜损害。③病期:活动期,指患者不断出现红斑与张力性水疱大疱;缓解期,无明显水疱发生,留有陈旧性皮损。④治疗反应:即糖皮质激素须用量,分为用常规剂量皮质类固醇(相当于泼尼松1 mg·kg1·d1)能控制病情组,与须用大剂量皮质类固醇才能控制病情组。

    12  方法

    121  基因组DNA的制备:参考文献[2,3]用饱和盐洗法提取基因组DNA。

    122  DRB1、DQB1基因片段的体外扩增:参考文献[2]设计引物,本课题所用的HLADRB1、DRB1*04和DQB1基因引物均由中国医学科学院细胞生物研究所上海赛尔公司合成。总反应体积为50 μl,其中包括:基因组DNA 60 ng,浓度为50 pmol/μl的上游引物和下游引物各25 μl,阳性对照引物用量为特异性引物的1/5,10×PCR缓冲液5 μl,25 mmol/L MgCl2 5 μl,25 mmol/L dNTP 5 μl,TaqDNA聚合酶(Promega)15 u。各等位基因引物的反应条件参考文献[2,3]。

    123  序列分析:根据已发表的核苷酸序列对有关等位基因进行序列分析。

    124  统计学分析:用直接计数法计算基因频率。两组间基因频率的比较采用χ2检验。P值均用Bonferron法进行校正得校正P值(Pc),即P值乘以实验系统所检出的基因数,显著性检验水平为005。用比值比(OR)代表疾病与HLA基因的相关性强度。

    2  结果

    21  PCR扩增效果的检测  基因组DNA样本经PCR扩增后,阳性者在18%的琼脂糖电泳凝胶上可见一清晰条带,分子量与预期值一致。

    22  HLADRB1基因分型结果  53例PV患者组和70例正常对照组的HLADRB1基因频率见表1。表1  PV患者和对照组HLADR基因频率的分布DR基因PV组(n=53)结果显示,DRB1*14在PV组的基因频率高于健康对照组(OR=567,χ2=1318,Pc=000369):DR4在PV组的基因频率高于健康对照组,但P值经矫正后无统计学意义。

    23  相关性分析结果  DRB1*04与黏膜损害呈正相关,与所须皮质类固醇激素用量呈正相关。女性患者与DRB1*04相关性较男性患者更明显。

     3  讨论

  应用血清学方法研究发现,中欧与东欧的犹太人(Ashkenazi 犹太人)寻常型天疱疮与HLADR4血清型相关,非犹太人天疱疮与HLADR4及HLADR6血清型相关[4]。不同种族间天疱疮与HLA的相关性不同。法国人寻常型天疱疮与HLADRB1*0402,DRB1*1401,DRB1*1404,DQB1*0302和DQB1*0503相关[5]。日本PV与HLAⅡ类抗原相关性研究中报道了PV与HLADRB1*1405以及DQB1*0503相关[6]。中国北方汉族PV中HLADRB1*12、DRB1*14较正常人频率高,而DRB1*1501/1502和*0901频率降低,提示上述基因分别是PV的易感基因和保护基因[7,8]。我们使用PCRSSP方法获得我国山东籍汉族PV患者HLADRB1基因频率。在进行HLAⅡ类基因分型时,实验结果准确可靠,重复性好;分型结果较血清学方法精细,对一些血清学特异性相同的,可借助PCRSSP技术分出其基因型别的差异。为了提高分型结果的精细程度,可根据需要,针对低分辨的型别,进一步设计组内各亚型特异性的引物,再进行PCRSSP[3]。我们的结果提示,与正常对照组比较,PV患者组DRB1*14(*1401、*1404、*01405)基因频率明显增高(Pc分别<005),表明DRB1*14与山东汉族PV呈强相关。相关性分析结果提示,DRB1*04与黏膜损害呈正相关,与所须皮质类固醇激素用量呈正相关。作者既往对HLADQB1的研究结果表明,PV患者中DQB1*0503频率显著高于正常对照组。汉族人群中HLADR*14与DQB1*0503呈连锁不平衡。在所有HLADRB1*14阳性的PV患者中,DQB1*0503的频率与对照组间无显著差别。结合序列分析结果,DRB1*0403、DRB1*0406、DRB1*1401、*1404、*1405抗原的β链高变区第26位、67位、71位、86位上的氨基酸残基相同,它们分别是苯丙氨酸、亮氨酸、精氨酸、缬氨酸。DQB1*0503、DQB1*0302则不具备上述氨基酸残基[9]。上述结果支持与汉族PV相关联的主要是上述DRB1基因。

    参  考  文  献

    1Mentink LF,Mackenzie MW,Toth GG,et alRandomized controlled trial of adjuvant oral dexamethasone pulse therapy in pemphigus vulgaris[J]Arch Dermatol,2006,142(5):570

  2周淑华,林麟,靳培英,等江苏、安徽汉族天疱疮患者HLADR基因的相关性研究[J]中华皮肤科杂志,2002,35:13

    3Olerup O,Zetterquist HHLADR typing by PCR amplification with sequencespecific primers(PCRSSP)in 2 hours:An alternative to serological  DR typing in clinical practice including donorrecipient matching in cadaveric transplantation[J]Tissue Antigens,1992,39:225

    4Ahmed AR,Wagner R,Khatri K,et alMajor Histocompatibility complex haplotype and class Ⅱ genex in nonJewish patients with pemphigus vulgaris[J]Proc Natl Acad Sci USA,1991,88:5056

    5Loiseau P,Leeleach L,prost C,et alHLA class Ⅰ polymorphism contributes to specify desmoglein derived peptides in pemphigus vulgaris and pemphigus foliaceus[J]J Autoimmun,2000,15:67

    6Niizeki H,Inoko M,Mizuki N,et alHLADQB1 and DRB1 genotyping in Japanese pemphigus vulgaris patients by the PCRRFLP method[J]Tissue Antigens,1994,44:248

    7耿龙,翟宁,张庆瑞,等中国北方汉族寻常型天疱疮与HLADRB1等位基因的相关性研究[J]中华医学遗传学杂志,2000,17:303

    8耿龙,翟宁,肖汀,等中国北方汉族寻常型天疱疮与HLADRB1等位基因的相关性研究[J]中华皮肤科杂志,2000,33:277

    9周淑华,林麟,靳培英,等HLADRB1基因与汉族人寻常型天疱疮的相关性研究[J]中华医学遗传学杂志,2003,20:79

    10Stanley JRAutoantibodies against adhesion molecules and structures in blistering skin diseases[J]J Exp Med,2000,181:14

    11Amagai M,ClausKovtum V,Stanley JR,et alAutoantibodies against a novel epithelial cadherin in pemphigus,a disease of cell adhesion[J]Cell,1991,67:869

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    13Ahmed AR,Wagner R,Khatri K,et alMajor Histocompatibility complex haplotype and class Ⅱ genes in nonJewish patients with pemphigus[J]Proc Natl Acad Sci USA,1991,88:5056

    14Niizeki H,Inoko M,Mizuki N,et alHLADQA1,DQB1 and DRB1 genotyping in Japanene pemphigus vulgaris patients by the PCRRFLP[J]Tissue Antigens,1994,44:248

    15Ahmed AR,Park MS,Tiwari JL,et alAssociation of DR4 with Pemphigus[J]Exp Clin Immunogenet,1987,4(1):8

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    17Lombardi ML,Mercuro O,Ruocco V,et alCommon human Leukocyte antigen alleles in pemphigus vulgaris and pemphigus foliaceus Italian patients[J]J Invest Dermatol,1999,113(1):107

    18GonzalezEscribanno MF,Jimenez G,Walter K,et alDistribution of HLA class Ⅱ alleles among Spanish patients with pemphigus vulgaris[J].Tissue Antigens,1998,52(3):275

    19徐春,白耀,崔莲仙,等慢性淋巴细胞性甲状腺炎与HLADQ位点基因的相关性分析[J]中华内科杂志,1998,37(6):393

     基金资助项目:山东省自然科学基金(Y2003Col)

 滨州医学院附属医院皮肤科  滨州市  256603

作者: 周淑华 王秀敏 韩兆东 高 昱 张玉杰 杨 磊 张 2007-4-26
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