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【摘要】 目的 本研究通过制作不同幼龄大鼠骨骼染色透明标本来探讨大鼠骨骼染色透明标本制作的基本方法，为实验动物透明标本的制作和普及奠定基础。方法 随机抽取生后8～23 d的大鼠为研究对象，按照脱水、净化、再脱水、氢氧化钾处理、染色、透明、保存等步骤制作大鼠骨骼染色透明标本。结果 制作好的大鼠透明标本肌肉和软组织结构无色透明，骨骼界限明显，易于识别，其中第8天大鼠的透明效果明显优于第23天大鼠。结论 新生大鼠骨骼染色透明标本的制作与其它动物的透明标本制作有明显不同，且透明效果与鼠龄相关。
【关键词】 新生大鼠；骨骼染色； 透明标本
The study of rat bone specimens of transparent stain
LI Wen1 HUANG Fei2 WANG Limin2 et al
1 Grade 2006,Clinical Medicine Binzhou Medical University，Yantai 264003； 2 Department of Anatomy,Binzhou Medical University
【Abstract】 Objective Different neonatal rats’ transparent stain rat skeletal specimens were made to explore the basic method of making laboratory animal’s transparent sample.Methods Neonatal rats aged from 8 days to 23 days were selected randomly, according to dehydration, purification, dehydration, potassium hydroxide, dyeing, transparent, and other steps，the rat skeletal specimens were made.Results The making good specimens had easily identifiable muscle and soft tissue, the transparent effect of the eight days was better than the 23 days. Conclusion The procedure of neonatal rat specimen had difference with other animals, and the effects of transparent associated with the age.
【Key words】 neonatal rat,bone stain,transparent sample
1858年，Beal首次制作出人体的胚胎透明标本，1897年，Schulze用2％～3％的氢氧化钾茜素红及甘油制作了胚胎骨骼的染色标本，1958年，我国钟世镇院士等［1］用丙酮、氯仿、乙醚、冰醋酸混合液加速脱水制作了冬青油透明标本。目前关于透明标本的制作已经引起了广大科学家的兴趣［2，3］。随着科学技术的不断发展，关于透明标本的制作方法也层出不穷，但是关于大鼠骨骼染色透明标本制作方法的探讨却很少。本研究通过制作大鼠骨骼染色透明标本来探讨动物骨骼染色透明标本制作的基本方法，为实验动物透明标本的制作和普及奠定基础。
1 材料与方法
1.1 取材 制作透明标本的材料要求新鲜，本实验选用滨州医学院动物中心提供的新生Wistar大鼠为实验对象。日龄从出生后第8天至第23天。
1.2 方法
1.2.1 去脑，去内脏：取新生大鼠，窒息死亡后常规消毒，从前囟做切口去除脑组织，经腹前正中切口通过膈肌进入胸腔，将胸腹腔的内脏完全去除，过程中注意保护胸骨和肋弓。去除组织后，用流动的清水进行清洗，去除残余血液。
1.2.2 脱水：处理好的大鼠控干水份后，置于95％酒精中固定1周。期间可换液一次。
1.2.3 净化：1周之后，将固定好的大鼠从95％酒精中取出，放入3％重铬酸钾溶液中进行净化，时间为1周。
1.2.4 再脱水：将净化好的标本放入重新配制的95％酒精中，进行再脱水处理１周。
1.2.5 透明：再脱水处理后的标本置于2％氢氧化钾中6 h。此步骤的操作要结合大鼠的年龄和体重。年龄大、体质量重的大鼠浸泡时间要相应延长，当观察到肌肉可以轻轻用镊子插透的时候可以取出。
1.2.6 染色：透明后的标本用饱和茜素红溶液进行染色1～2 d，期间要经常观察染色的情况，尽量使染料沉着于骨骼，而周围肌肉等组织不致过染。
1.2.7 脱色：把标本从饱和茜素红染液中取出，置于铵甘油中脱色4 d。
1.2.8 脱铵：用20％甘油溶液对标本进行脱铵处理7 d。
1.2.9 脱水：逐级梯度甘油脱水各3 d，一般选择30％、50％、70％甘油作为脱水剂。
1.2.10 置于100％甘油中长期保存。
2 结果
制作好的大鼠透明标本肌肉和软组织结构无色透明，而骨骼界限明显，易于识别。年龄越小的大鼠透明效果越好。第8天大鼠透明标本效果最好，第23天大鼠透明效果较差，骨骼不易染色，已经基本不能用于透明标本的制作。第8、16、17天大鼠透明标本见图1～3。
3 讨论
3.1 标本材料的要求 标本材料要尽量新鲜，本实验中我们选择处死大鼠后立即进行实验。操作过程中脱水要彻底，材料的大小与所需脱水时间密切相关，材料越大则脱水时间越长。对于幼龄大鼠1周的时间足以脱掉水分。
3.2 标本处理 幼龄鼠（8～17 d）可在透明后剥皮，大龄鼠（18～23 d）在处死时剥皮。剥皮时注意不要破坏鼠的细微处，如爪和尾的末端；还要注意保护鼠的耳部、嘴部、爪部、尾部，此处皮肤要保留。这样可以阻止在透明时碱液对细微处骨骼的破坏，同时还可以防止尾骨在操作过程中的脱落丢失。剥皮后，去除附着在肌肉上的脂肪组织。
3.3 透明过程中氢氧化钾溶液浓度的选择 标本放在氢氧化钾溶液中的时间和氢氧化钾浓度的选择与大鼠的年龄和体重有关。例如，体质量越重，年龄越大，坚实程度越强，碱液渗入组织也越困难［４］，所用氢氧化钾的浓度要相应适当的提高；体质量越小，年龄越小,组织越嫩则相反。组织在碱液内透明是一个逐渐渗透的过程，因此，不能为了加快透明速度而提高碱液浓度，以免引起标本腐蚀，使标本出现骨骼脱落现象。
3.4 染色过程 染色过程需要及时察看，以便掌握染色时间和染色程度，染色过浅会使骨骼染色程度不够；染色过深则会使软组织脱色困难，影响标本质量。
新生大鼠透明标本的制作是在原有动物骨骼染色透明标本的基础上进行了一定的改进，制作的标本可以用于平时的日常教学，同时也可以用于科学研究，具有一定的研究价值。
【参考文献】
［1］ 李忠华,王兴海.解剖学技术［Ｍ］.第2版.北京：人民卫生出版社，1998：190-191.
［2］ 侯金才,李公启,张翠香.大脑断层透明标本的制作［J］.齐齐哈尔医学院院报，2005,26(5):540.
［3］ 刘万祥,蔡滢,王长月.骨骼透明标本制作及应用［Ｊ］.天津医科大学学报,2002,8(3):377-378.
［4］ 刘万胜,黄明,刘力华.新生儿骨骼透明标本的制作［Ｊ］.卫生职业教育,2004,22(14)：94.
作者单位：1 滨州医学院2006级临床专业 烟台市 264003;2 滨州医学院解剖学教研室