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【摘要】 目的 探讨宫颈癌组织中PTTG、bFGF和cmyc的表达，并分析PTTG的临床意义及其与bFGF和cmyc表达的相关性。 方法 采用免疫组织化学SP法检测60例宫颈癌组织中PTTG、bFGF和cmyc蛋白的表达，并结合临床病理特征进行分析。选取同期30例宫颈宫颈上皮内瘤变病例和10例健康人宫颈组织作为对照。 结果 宫颈癌组织中PTTG蛋白表达率为56.67%，显著高于宫颈上皮内瘤变及正常宫颈组织的表达率（χ2=14.244；P＜0.01）。FIGO分期III～IV期组PTTG蛋白表达率显著高于I～II期组（χ2=10.809；P＜0.01），病理分级G3组PTTG蛋白表达率显著高于G1/G2组（χ2=6.787；P＜0.01）；有淋巴结转移组PTTG蛋白表达率显著高于无转移组（P=0.014）；PTTG蛋白的表达与年龄或病理类型无关（χ2=0.045，0.395；P＜0.01）。PTTG蛋白表达与bFGF及cmyc蛋白表达均呈明显正相关（τ=0.287，0.190；P＜0.01）。结论 PTTG蛋白在宫颈癌组织中呈高表达，并与肿瘤的临床病理特征有关，可能是通过上调bFGF和cmyc蛋白的表达而在宫颈癌的发生发展中发挥作用。
【关键词】 宫颈癌 垂体肿瘤转化基因 碱性成纤维细胞生长因子 cmyc
Expression and clinicopathological significance of PTTG，bFGF and cmyc in cervical cancer
ZHONG Jinyan WANG Yankui
Department of Gynecology,Medical College of Qingdao University，Qingdao 266003
【Abstract】 Objective To investigate the expression and clinicopathological significance of pituitary tumor transforming gene (PTTG) in cervical cancers，meanwhile identify their relationships with basic fibroblast growth factor (bFGF) and cmyc proteins.Methods Expressions of PTTG , bFGF and cmyc were detected by immunohistochemistry SP method in 60 cases of cervical cancer，30 cases of CIN and 10 cases of normal tissue were choosed as control. Results The positive expression rate of PTTG was significantly higher in cancers (56.67%) than in CIN and normal tissues（χ2=14.244，P＜0.01）．The expression of PTTG was closely related to the clinicalsurgical staging（χ2=10.809，P＜0.01），pathologic grading（χ2=6.787，P＜0.01）and lymphnode metastasis（P=0.014）．Expressions of bFGF and cmyc proteins were positively correlated with that of PTTG（τ=0.287，0.190，P＜0.01）．Conclusion Increased PTTG may play an important role in the carcinogenesis and development in cervical cancers by promoting the expression of bFGF and cmyc proteins．
【Key words】 cervical neoplasms，pituitary tumor transforming gene，basic fibroblast growth factor，cmyc
宫颈癌是严重威胁女性健康的恶性肿瘤，其发生与HPV感染密切相关［１］，然而只有一小部分感染高危HPV的宫颈上皮内瘤变(CIN )会进展为浸润性宫颈癌（ICC），提示可能还有其他因素参与肿瘤的发生。垂体肿瘤转化基因（PTTG）为新近发现的一种癌基因，其高表达在促进细胞增殖、转化及肿瘤发生中具有十分重要的作用。目前PTTG促进肿瘤发生的具体机制尚不明了，已有研究提示PTTG可与碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）形成正反馈环路并促进肿瘤血管生成［2］，也可激活cmyc基因或其它脯氨酸增殖基因［3］。关于PTTG宫颈癌中的表达及其意义的研究，国内外少有报道。本实验采用免疫组化技术检测PTTG 、bFGF和cmyc蛋白在正常宫颈组织、CIN和ICC宫颈组织中的表达，分析PTTG蛋白的表达与肿瘤类型、病理分级和FIGO分期等临床病理特征之间的关系，并探讨其与bFGF和cmyc蛋白表达之间的关系。
1 对象与方法
1.1 研究对象 选择2005年10月—2007年3月，在青岛大学医学院附属医院和青岛海慈医院活检或手术切除宫颈癌标本60例，其中鳞癌44例，腺癌16例；根据2000年FIGO分期，I期22例，II期18例，III期12例，IV期8例；根据WHO分级，高分化（G1）8例，中分化（G2）22例，低分化（G3）30例；宫颈癌中Ib～IIa期行根治术30例，其中淋巴结转移17例，无淋巴结转移13例。所有标本收集前未经化疗、放疗或生物学治疗。病人年龄28～67岁，中位年龄49岁。选取同期30例宫颈上皮内瘤变病例（CIN I 12例，CIN II～III 18例），和10例健康人宫颈组织作为对照。所有标本均福尔马林固定，石蜡包埋，连续切取4 μm厚切片4张。
1.2 检测方法 采用链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶连接(SP)法。羊抗人PTTG多克隆抗体(1∶250)、兔抗人bFGF多克隆抗体(1∶200)和鼠抗人cmyc单克隆抗体(1∶50)均购自美国SantaCruz公司，SP及DAB试剂盒购自北京中杉生物技术有限公司。试验步骤按SP试剂盒说明书进行。已知垂体腺瘤切片作为阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。
1.3 结果判定 PTTG、bFGF和cmyc计分方法均采用Sinicrope等［4］的改良法，按染色细胞计数所占比例(至少观察5个400倍视野)，分为5级，0分：＜5%，1分：5% ～ 25%，2分：26% ～ 50%，3分：51% ～ 75%，4分：＞75%。染色强度分为3级，1分：弱染色，2分：中度染色，3分：强染色。每份切片计分=染色细胞数分数×染色强度分数，所得分数＜1分为阴性结果，≥1分为阳性。
1.4 统计学分析 比较宫颈癌组、宫颈上皮内瘤变组和健康人宫颈组织之间及各临床特征组之间比较采用χ2检验（n＞40）或Fisher检验（n＜40），宫颈癌组织中PTTG和bFGF、cmyc表达的相关性采用Kendall相关分析。用SPSS11.5统计软件包统计分析，以P＜0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中PTTG蛋白的表达 30例宫颈癌组织中PTTG蛋白表达阳性率为56.67%，30例CIN宫颈组织中PTTG蛋白表达阳性率为30.00%，10例正常宫颈组织中PTTG蛋白表达缺失。宫颈癌中PTTG蛋白表达率显著高于宫颈上皮内瘤变及正常宫颈组织（χ2=14.244，P＜0.01）。PTTG蛋白主要定位于细胞浆和细胞核，阳性着色处为黄色深棕黄色颗粒。鳞癌中胞核表达明显，而腺癌中胞浆表达明显。
2.2 宫颈癌组织中PTTG蛋白表达与临床病理特征之间的关系 具体结果见表1。
2.3 宫颈癌组织中PTTG蛋白表达与bFGF、cmyc蛋白表达之间的关系 经Kendall's等级相关分析显示，宫颈癌组织中PTTG蛋白与bFGF蛋白的表达呈正相关（χ2=20.603，τ=0.287）；PTTG与cmyc的表达之间亦呈正相关（χ2=8.721，τ=0.190），提示PTTG可能通过bFGF和cmyc发挥其致瘤作用。具体结果见表2。表1 宫颈癌组织中PTTG蛋白表达与临床病理特征之间的关系 表2 宫颈癌组织中PTTG与bFGF、cmyc表达的相关性PTTG bFGF阴性阳性
3 讨论
PTTG基因为Pei等在1997年由垂体肿瘤中发现并分离出的具有强致癌作用的癌基因。该基因位于与肿瘤复发相关的5号染色体长臂5q33，全长超过10 kb，含有5个外显子和4个内含子。PTTG编码一个分子量为22 kD的蛋白，在细胞增殖活性高的正常组织呈高表达（如睾丸、胸腺和胚胎肝），在所有被研究的肿瘤细胞（包括垂体肿瘤、肺癌、乳腺癌、肝癌、白血病、结肠癌、子宫内膜癌和卵巢上皮癌等）和肿瘤细胞系中都有高表达［2，5～7］。研究证明PTTG是一种强有力的肿瘤转化基因，在没有其他辅助癌基因参与下即能独立引起细胞转化［8］，其机制尚未明确；可能与以下因素有关：①促进细胞转化；②促进其他原癌基因及促瘤因子的表达；③干扰姊妹染色单体分离；④促进bFGF参与的肿瘤血管生成。在大肠癌、食管癌和子宫内膜癌等上皮性癌组织中，PTTG mRNA与晚病理分期、高微血管密度及淋巴结转移密切相关，是肿瘤发生转移的分子标志之一［7～9］。
3.1 PTTG在宫颈癌组织中的表达及其意义 本实验采用免疫组化SP法，对正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变和宫颈浸润癌癌组织中PTTG、bFGF和cmyc蛋白表达情况进行了检测，结果显示正常宫颈组织中PTTG蛋白表达缺失，宫颈浸润癌癌组织中PTTG高水平表达，且其表达与较晚的FIGO分期、肿瘤的低分化和淋巴结转移有关。该结果提示PTTG在宫颈组织中的高表达不仅能促进肿瘤的发生，而且能够影响其恶性生物学行为，使肿瘤细胞进一步失分化且更具侵袭性。失分化可能与PTTG干扰姊妹染色单体分离的作用有关，而高侵袭性可能由VEGF、bFGF及其它原癌基因及促瘤因子的表达导致。
PTTG基因表达蛋白的羧基末端包含一个转录活性区域，该区域可与一种在人体内普遍表达的蛋白质，即PTTG结合因子（PBF）结合。PBF在体内外可特异性的与PTTG相互作用。PTTG主要在胞浆中表达，而PBF内含一碱性序列——核定位信号子序列（NLS），PTTG与PBF在同一细胞内共同表达可以导致PTTG由胞质向核内转移，进而发挥转录、活化功能，并最终导致癌症发生［10］。本实验检测结果显示宫颈癌组织中PTTG主要定位于细胞浆和细胞核，说明在这些细胞中同时表达PBF，形成细胞恶性转化的分子基础。PTTG表达与宫颈癌病理组织类型无关，但PTTG着色分布在不同病理类型之间存在差异（鳞癌中以胞核为主，腺癌中以胞浆为主），产生这种差异的原因尚未明确。
3.2 PTTG与bFGF、cmyc表达的相关性 本研究显示宫颈癌组织中PTTG的表达与bFGF、cmyc蛋白表达均呈正相关。据此推测PTTG的高表达可上调bFGF的表达，进而以自分泌或旁分泌形式促进细胞分裂增殖并强烈刺激肿瘤血管新生，最终导致宫颈癌的发生，并促进其向周围组织浸润及发生淋巴结转移。新生血管通透性高，且bFGF可促进型胶原酶（可降解间质）的分泌，为癌细胞的浸润转移提供了基础。PTTG还可通过激活cmyc导致细胞的扩增。体外实验已发现，PTTG可在转录起始位点附近与cmyc结合，激活cmyc转录［11］。cmyc是多功能的核内癌基因，它对自身基因表达调节的同时也调节其他细胞内的基因表达，影响着细胞的生长、增殖、分化、凋亡和细胞周期的进程，在肿瘤的发生和演进的过程中发挥重要作用。PTTG是否能够激活其它原癌基因进而促进恶性肿瘤的发生，还需要进一步研究。
综上所述，宫颈癌组织中PTTG蛋白呈高表达，并与肿瘤的恶性生物学行为有关。宫颈鳞癌大多对放疗敏感，腺癌敏感性相对较差，治疗效果欠佳。放疗导致的局部非感染性炎症和软组织的粘连挛缩使患者生存质量显著下降。因此，通过某种方法下调或消除PTTG基因的表达，可为宫颈癌的生物治疗开辟新的道路。
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作者单位：青岛大学医学院附属医院妇科 青岛市 266003