冬虫夏草对小鼠淋巴细胞增殖和IL2产生的作用

【摘要】  目的 探讨冬虫夏草对小鼠淋巴细胞增殖反应和IL2的产生的免疫学作用。方法 取小鼠24只，随机分为对照组和实验组，分别用生理盐水和100%冬虫夏草水浸出液定期给小鼠灌胃，然后检测小鼠淋巴细胞增殖和IL2的产生。结果 实验组对以上两项免疫学指标均有显著增强作用，与对照组相比均有非常显著性差异（P＜0.01）。结论 冬虫夏草可明显增强机体免疫功能。

【关键词】  冬虫夏草 淋巴细胞增殖 白细胞介素2 小鼠

    Effect of cordyceps sinensis sacc. on lymphocyte proliferation and interleukin2 production of mice

    LIU Jiao  MI Wei  LI Lin  et al

    Department of Anatomy, Binzhou Medical University, Binzhou  256603

    【Abstract 】  Objective  To research  the effect  of  cordyceps sinensis sacc.（CSS) from the viewpoint of immunology.Methods  24 mice were divided into 2 groups(control group and experimental group) randomly.Filled the stomaches with NS and 100% water extract of CSS respectively and tested lymphocyte proliferation and interleukin2 production.Results  Compared with control group the lymphocyte  proliferation and interleukin2 production increased significantly in experimental group (P＜0.01).Conclusion  The results indicated that  CSS could enhance immune function obviously .

    【Key words】  cordyceps sinensis sacc.(CSS),lymphocyte proliferation, IL2，mouse

    冬虫夏草，始载于《本草纲目拾遗》，因其冬季为虫，夏季为草，故名；为麦角菌科真菌冬虫夏草［cordyceps sinensis (Berk.) sacc.，CSS］，寄生蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体，主要功效为益肾补肺、止血化痰、止嗽定喘［1］。我们对冬虫夏草进行了淋巴细胞增殖和IL2免疫学方面的初步研究。

    1  材料与方法

    1.1  试剂和仪器  冬虫夏草购采自滨州医学院附属医院。水煎液制备：取冬虫夏草200 g，加2 000 ml水，浸泡2 h，水煎2次，每次煮沸30 min，合并水煎液，浓缩成200 ml备用。RPMI1640为GIBO公司产品，LPL和ConA 为美国Sigma 产品，MTT为 FLUKA公司产品，二甲基亚砜(DMSO) 为苏州化工研究所产。美国产全自动酶标仪（Multiskan)，CO2培养箱，由美国Former 公司生产，低速冷冻离心机(Beckman,USA)，超净工作台由苏州净化设备厂生产，100目不锈钢网，50 ml离心管。

    1．2  动物分组与给药  BALB/C小鼠24只，体重18～22 g，雌雄不限，购于北京医科大学实验动物中心。将动物随机分为两组，每组12只。Ⅰ组为生理盐水对照组，Ⅱ组为冬虫夏草实验组。Ⅰ组用生理盐水灌胃，0.5 ml/（次·只），1次/天；Ⅱ组用冬虫夏草液灌胃， 0.5 ml /（次·只），1次/天，共15次。

    1．3  检测指标及方法

    1．3．1  淋巴细胞增殖反应［2］：无菌制备小鼠脾细胞悬液，用 RPMI1640 不完全培养液洗涤 2 次，每次 1 000 r/min ，离心10 min ，然后用完全培养液配成5×106 /ml ，   取100 μl加入96孔细胞培养板（每孔含5×106 /ml个细胞），加入终浓度为5 μg/ml 的ConA ，置37℃，5%CO2 培养箱中培养48 h后,每孔加入10 μl MTT 溶液（5 mg/ml），再继续培养12 h，然后加入DMSO 100 μl ，充分震荡后静止20 min，全自动酶标仪用560 nm波长进行比色分析。

    1.3.2  IL2的诱生：取上述已制备的脾细胞悬液5×106 /ml，放入培养瓶，置37℃，5%CO2 培养箱中培养40 h，离心收集上清液，置-20℃冰箱保存备用。

    制备活化的脾淋巴细胞［3，4］：按上法无菌取正常BALB/C小鼠脾脏，制成 5×106/ml细胞悬液，加入ConA使其终浓度为5 μg/ml ，置37℃，5%CO2 培养箱中培养48 h，收集细胞，离心洗涤2次，用完全RPMI 1640配成5×105/ml细胞悬液，作为检测IL2的反应细胞。

    1．3．3  IL2活性检测［3］：取-20℃保存的IL2上清液，并做1/2和1/4的稀释，在96孔平底培养板中，每孔加入IL2上清液或不同稀释度的IL2上清液100 μl及上述反应细胞100 μl；阳性对照不加IL2 上清，加100 μl 1640培养液。每组各设12个复孔，置37℃，5%CO2 培养箱中培养48 h，每孔加MTT(5 mg/ml) 10 μl，继续培养4h ，吸弃100 μl上清液，加入酸化异丙醇  100 μl(0.04 mol/L HCl异丙醇)［4］，充分震荡后静止20 min，全自动酶标仪用560 nm波长进行比色分析。

    1．4  结果处理  实验结果采用组间均数差异t检验的方法进行统计学分析。

    2  结果

    冬虫夏草对小鼠淋巴细胞增殖反应和IL2产生的影响见表1。 表1  冬虫夏草对小鼠淋巴细胞增殖反应和IL2产生的影响 表1显示实验组对脾淋巴细胞增殖反应明显，IL2的产生明显增强，与对照组相比有非常显著性差异（P＜0.01）。

    3  讨论

    本实验研究了冬虫夏草对小鼠淋巴细胞增殖和IL2产生的影响，结果表明冬虫夏草可使ConA激发的T淋巴细胞增殖反应明显增强，表明冬虫夏草对T淋巴细胞功能具有增强作用，同时对B淋巴细胞免疫功能也具有明显增强作用。已知T细胞是机体免疫系统赖以实现免疫调节的重要细胞，在机体特异性免疫应答中起核心作用 ，T细胞功能障碍会直接影响机体的细胞免疫应答和免疫调节。本研究还发现冬虫夏草对细胞因子IL2的产生有促进作用。IL2主要是由辅助T细胞产生的非特异性细胞因子，作用于活化的T细胞促进其增殖，并对B细胞有调节作用。 冬虫夏草可明显促进小鼠脾细胞产生IL2，间接增强体液免疫应答。分析上述免疫指标改变的原因可能是冬虫夏草对T淋巴细胞的直接促进作用，或作用于巨噬细胞促进T淋巴细胞的产生，从而促进了T淋巴细胞及IL2的产生。以上两项免疫学指标均明显增强，组间相比均有非常显著性差异（P＜0.01），说明冬虫夏草可明显增强机体免疫功能，是良好的保健食品。

【参考文献】
  ［1］ 高学敏.中药学（下册）［M］.北京：人民卫生出版社，2000：16901696.

［2］ 高梅，贾镭，陈芬，等. 虎尿对小鼠淋巴细胞增殖和IL2产生的影响［J］.中国实验临床免疫学杂志，1999，11（3）：39.

［3］ 邱世翠，李宗山，郭毅， 等. 枸杞对辐射损伤小鼠造血功能恢复的影响［J］.中国中医药科技，2000,7（6）：362.

［4］ 邱世翠，李波清，王运平，等.康宝饮对小鼠的抑瘤作用［J］.中国现代医学杂志，2001，11（2）：33.

作者单位：滨州医学院解剖学教研室 滨州市 256603