气传致敏真菌与支气管哮喘相关性研究

【摘要】  目的 研究气传致敏真菌与过敏性哮喘的关系。方法 采用空气中暴片调查法和暴皿调查法，了解本地区气传真菌的品种和数量。应用5组多价真菌变应原对346例支气管哮喘患者进行了皮内试验。应用放射变应原吸附试验方法对真菌皮试阳性哮喘患者89例和50例健康者进行血清特异性IgE测定。结果 346例支气管哮喘患者真菌变应原皮内试验阳性89例（25.75%）。89例真菌变应原皮内试验阳性患者中特异性IgE阳性78例，真菌变应原皮内试验与sIgE两种检测方法一致率87.64%(78/89)，两种检测方法经一致性卡方检验，χ2=9.09 ，P＜0.01。对照组50例中仅2例阳性反应（4.0%），余均为阴性。两组结果经卡方检验，χ2= 89.98,P＜0.001。结论 气传致敏真菌是过敏性哮喘的重要致敏原，采用体内外检测方法联合测定真菌过敏原具有良好的相关性。

【关键词】  真菌；过敏原性；皮肤点刺试验；特异性免疫球蛋白E；哮喘

Study on relation of fungi allergenicity to intracutaneous test and bronchial astma

    Sun Yinghua

    Central Hospital of Shengli Oil  Field,Dongying  257034

    【Abstract】  Objective  To study on  relation of fungi allergenicity to intracutaneous test and serum specific IgE in patients with bronchial asthma.Methods  Airborne fungi were isolated and identified by using survey mathods of sheet glass and culture plate of exposure determination.Fungi allergen skin test was performed on 346 cases with  bronchial asthma.Serum specific IgE was given to patients who showed positive results on the skin test and control group.Results  78 of 89 cases with bronchial  asthma (87.64%) showed positive  specific IgE assay.Serum specific IgE significantly higher than that from normal control (χ2=89.98,P＜0.001),with concordance of two tests(allergen  skin test and serum sIgE) in bronchial asthma (χ2=9.09,P＜0.01).Conclusion  The airborne fungi are important sensitization allergens of bronchial asthma with concordance of both the  allergens skin test and serum sIgE.

    【Key words】  fungi,allergenicity,intracutaneous test,sIgE，asthma

    气传致敏真菌是外源性支气管哮喘的重要致敏原，它有一定的地区性和季节性。探明本地区气传真菌种类、数量及其季节消长规律，对于筛选致敏真菌、指导真菌过敏患者的诊断和治疗以及寻找更多的致敏真菌、开展分离提纯研究等工作都有重要意义。我院采用暴片和暴皿法对当地气传真菌进行了全年调查，对支气管哮喘患者进行真菌变应原皮内试验和血清特异性免疫球蛋白E（sIgE）检测，以期阐明真菌过敏原性与支气管哮喘发病关系。

    1  资料与方法

    1.1  临床资料  根据中华医学会呼吸分会支气管哮喘诊断标准［1］，选择我院门诊和住院支气管哮喘患者346例进行真菌变应原皮内试验，结果阳性患者89例，其中男46例，女43例。年龄5～65岁，平均年龄23.37岁，≤10岁35例，≤20岁21例，≤30岁17例，≤40岁12例，＞40岁9例。病程1～30年。学龄前儿童25例，学生33例，干部16例，工人15例。常年发病，季节性加重49例，夏秋季节25例，春秋15例。合并过敏性鼻炎32例，有发病诱因18例，有家族过敏史23例。健康对照组50例，为本院健康献血者，无过敏性疾病史。

    1．2  方法

    1．2．1  气传真菌调查：按全国统一的空气中暴片和暴皿调查法，采用暴皿和暴片方法同步调查。① 暴片方法：在四层楼顶设伞篷式收集器，每天暴片１张，共365张。每天上午10点钟暴露涂有一层凡士林黏附剂的载玻片１张，24 h取回，加１滴中性树胶，加盖22 mm×22 mm盖玻片，全盖玻片镜检，记录真菌孢子，菌丝体数量。②暴皿调查：应用11 cm培养皿， 马铃薯葡萄糖、沙氏、蔡氏三种琼脂培养基，三处定点暴皿，半月一次，共24次。每天上午10点钟暴皿3 min，25 ℃生化培养箱内培养，每日观察，记录菌落数，直到无新菌落出现为止，挑取菌落用直接压片或载玻片培养方法于镜下鉴定，对已鉴定真菌进行显微照相，并转入试管琼脂斜面培养和保存。

    1．2．2  真菌变应原皮内试验：真菌皮试液由本科实验室制备。真菌浸液: 50种真菌分别用马铃薯葡萄糖液体培养基静态培养，收集菌膜，洗净，95％酒精杀菌，凉干，乙醚脱脂，粉碎，用碱性浸提液（1∶25Ｗ／Ｖ，万分之一硫柳汞作防腐剂），磁力搅拌方法浸提，经过滤、透析、除菌制备成真菌浸液。Ｆolin酚试剂法测定蛋白质含量，经无菌检查和毒性试验合格后，冷藏备用。将常见的50种非产毒、非致癌、非致畸真菌浸液（单价），每10种取等量相混合，组成5种多价真菌浸液，再将多价真菌浸液按１∶100（Ｖ／Ｖ）用变应原溶媒稀释，作为皮试液。取病人上臂外侧做皮内试验，每点注入0.01 ml抗原稀释液，点间距≥5 cm。20 min看结果，注射部位出现红晕及风团直径≥0.5 cm即为阳性，同时以0.001%组胺及溶媒做阳性、阴性对照，观察皮肤反应。

    1．2．3  真菌特异性IgE 检测：过程均在Uni CAP100系统自动完成，所有试剂购自Pharmacia公司。

    1．2．4  统计学方法：计数资料采用χ2检验。

    2  结果

    2．1  气传致敏真菌调查  ①暴皿调查：全年共暴皿24次，共216个琼脂平皿，暴片处1 144个，总共收集菌落3012个。②暴片调查：全年暴片365张，共收集真菌孢子101 112个，菌丝体片2 367个，已鉴定真菌孢子101 089个，共39个种属。年真菌孢子数50个以上的有15个种属。

    2．2  真菌变应原皮内试验  346例支气管哮喘患者中真菌过敏原皮试阳性89例（25.75%）,多价真菌1组（PMⅠ）阳性69例次，多价真菌Ⅱ组（PMⅡ）阳性37例次，多价真菌Ⅲ组（PMⅢ）阳性9例次，多价真菌Ⅳ组（PMⅣ）阳性7例次，多价真菌Ⅴ组（PMⅤ）阳性3例次。“++”者仅5例次，其余均为“+”，又以 PMⅠ阳性反应率明显高于其他各组。

    2．3  sIgE检测  89例哮喘患者中0级11例，Ⅰ级30例，Ⅱ级37例，Ⅲ级9例，Ⅳ级2例，Ⅴ、Ⅵ级为0例。而对照组中仅2例Ⅰ级，余均为0级。两组结果经χ2检验，χ2= 89.98,P＜0.001，见表1。表1  哮喘患者及健康对照组真菌sIgE检测结果

    2．4  sIgE检测方法诊断评价  敏感性87.64%(78/89), 特异性96.0%(48/50), 假阳性4.0%(2/50), 假阴性53.93%(48/89), 阳性预测值97.5%(78/80),阴性预测值15.38%(2/13), 符合率90.65%(126/139）。

    2．5  真菌变应原皮内试验与sIgE两种检测方法比较  一致率为87.64%(78/89)，经一致性χ2检验，χ2=9.09，P＜0.01。皮内试验和sIgE检测结果见表2。 表2  89例哮喘患者两种检测方法结果对照

　3  讨论

    真菌调查由暴片和暴皿方法同步进行，并持续观察至少一年，能较全面系统地了解该地区主要致敏真菌。我们通过全年空气中气传真菌调查，发现了本地区优势菌系，其中以交链孢霉、单孢枝霉、芽枝霉、青霉、红酵母、曲霉、大孢芽枝霉、黑根霉、出芽短梗霉、黑附球霉、柔毛匍柄霉、瘤蠕孢霉等检出量最多。多数优势真菌常年都有飘散，高峰期在5—10月份，5—10月份暴皿菌落数占年收集菌落数的66.8％（2 010/3 012），暴片孢子数占年收集孢子数的84.6％（85 567／101 112），这与东营地区气候有关，东营地处黄河三角洲地带，受半湿润季风气候影响，冬春干旱，夏秋多雨，年平均气温12.4℃，4—10月份月平均气温在年平均气温以上，年降水量为574.0 mm，5—10月份较多，所以5—10月份气候适宜真菌生长繁殖。5—6月份和9—10月处于峰顶期，5—6月份菌落数和孢子数分别占年收集菌落数和孢子数的27.4％（824／3 012）和49.9％（50 412／101 112），9—10月份菌落和孢子数分别占年收集菌落和孢子数的22.7％（683／3 012）和23.6％（23 898／101 112）。7—8月份菌落和孢子数量都较少，菌落和孢子数分别占年收集菌落和孢子数的16.7％（504／3 012）和11.1％（11 257／101 112），其原因可能与7—8月份气温较高有关（月平均温度分别为26.3℃和25.7℃），不是某些优势真菌如交链孢霉、单孢枝霉等生长最适温度，也可能与7—8月份雨量过多有关（月降水量分别为195.0 mm和130.0 mm，占全年降水量的57.0％），因地表潮湿，真菌孢子和菌丝体不易飘散到空气，使空气中真菌孢子和菌丝体相对减少。暴皿法可收集到真菌菌落，不仅可以根据真菌菌群的性状、形态特征和系统发育鉴定出更多的真菌，可以鉴定出因孢子或特征不明显，在暴片中难以看到或难以辨认的真菌,如青霉、曲霉、酵母等。暴片法仅能鉴定孢子大、特征明显的少数真菌，但能鉴定出人工培养基上不生长或生长缓慢、发育不完全的真菌，如锈霉、黑粉霉等。因此，气传真菌调查应采用暴皿和暴片两种方法同步进行，结果比较可靠。

    过敏性哮喘是一种反复发作的呼吸道变态反应性疾病。是吸入变应原对气道持续刺激引起气道炎症的主要原因。IgE介导的Ⅰ型变态反应在支气管哮喘发病机制中起着十分重要的作用。因此，支气管哮喘变应原检测对预防和控制疾病的发生发展具有重要意义。对于真菌变应原性测定，一种为生物学方法，即变应原的皮肤试验，推测其变应原强度与活性；另一种为放射免疫法，即利用放射变应原吸附试验（RAST），从体外测定变应原浸液的变应原强度与活性。皮试可以反映特异性IgE的存在，特异性IgE增高通常伴随阳性皮试反应。由于sIgE测定方法特异性高，假阳性率低，与过敏原皮试具有良好的相关性，血清sIgE的检测和过敏原皮肤试验是确定过敏性哮喘的重要方法。

    本组真菌变应原皮试阳性的89例支气管哮喘患者中以PM1反应率明显高于其他各组，表明真菌过敏患者的皮试结果与我院真菌调查结果相一致。真菌过敏患者中以儿童多见，20岁以下患者46例。发病年龄越小，患病率越高，可能与室内活动增加有关。常年性发病者所占比例＞50%，提示真菌过敏的季节性不明显。由于真菌的遗传特性复杂，形态各异，而且多变，决定了它的过敏原性的复杂性。真菌的抗原物质绝大部分来自真菌的孢子和菌丝，不同的真菌菌株在有性繁殖期与无性繁殖期两个不同的阶段，在形态上有明显差别。不同真菌的变应原性又往往具有相对的交叉性。皮试阳性病例中无1例对单一真菌过敏者，说明具有变态反应体质者不仅对某一种真菌过敏，同时对某些不同种属的真菌变应原之间存在着交叉抗原性。346例患者中阳性率达25.75%，该结果与协和医院报告相近［2］。真菌过敏的发生率，由于诊断技术上的困难，目前国内外尚未提出一种确切的数据。而研究结果显示真菌与过敏性哮喘关系是明确的［3］。

    CAP系统在支气管哮喘变应原的诊断检测是一门新技术，为早期诊断和明确致敏原提供了可能［4］。对真菌皮试阳性患者sIgE检测，诊断评价指标为敏感性87.64%，特异性96.0%，阳性预测值97.5%，符合率90.65%。真菌变应原皮内试验与sIgE两种检测方法一致率为87.64%，与国外报道一致［5］。研究显示，测定血清sIgE对于诊断过敏性疾病、确定特异性过敏原、减少过敏原接触以及合理用药等方面是有价值的，有助于对哮喘的治疗和病情变化的检测。

    真菌过敏可以认为是一种环境性疾病。如能控制环境中真菌的浓度，可有效防止真菌过敏的发生，降低真菌引起的过敏性哮喘发生率。最简单和最好的方法是避免接触真菌过敏原，但该物质完全避免是不可能的。药物性预防是过敏性哮喘的重要环节。在无明显副作用的情况下，通过适当的药物进行预防性治疗往往可以避免哮喘发作。

【参考文献】
  1］ 中华医学会呼吸病学分会哮喘学组.支气管哮喘的定义、诊断、治疗及教育和管理方案［J］.中华结核和呼吸杂志，2008，3（31）：161163.

［2］　 叶世泰. 变态反应学［M］.北京：科学出版社，1998：225260.

［3］ Dill I, Nigge mann B. Domistic fungi viable propagules and sensitization in children with IgE mediated allergic disease［J］.Pediatr Allergy Immun, 1996, 7:151155.

［4］ Pastorello EA, Incorvaia C, Ortolani C,et al.Study on the relationship between the level of specific IgE antibodies and the clinical expression of allergy［J］.J Allergy Clin Immun, 1995, 96:580587.

［5］ Tschopp JM, Sistek D, Schindler C,et al.Current allergic asthma and rhinitis: diagnostic efficiency of three commonly used atopic markers (IgE, skintest,and phadatop). Results from 8329 randomized adults the SAPALDIA study. Swiss Study on air pollution and lung diseases in adults［J］.Allergy, 1998, 53(6):608613.

作者单位：胜利油田中心医院变态反应科 东营市 257034