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摘要：目的 了解人芽囊原虫的粪便检查方法和光镜下的形态特点。 方法 对就诊病人新鲜粪便，用生理盐水涂片、碘染色和吉氏染色三种方法制作玻片标本，光镜下观察人芽囊原虫的形态特征。 结果 1495例就诊病人，查出162例人芽囊原虫感染者，感染率为1084%；三种方法可查见人芽囊原虫滋养体期的空泡型和颗粒型，检出率相近，生理盐水涂片偶见阿米巴样型，碘液染色可见包囊期。 结论 广西人芽囊原虫感染较高，生理盐水涂片和碘染色方法适用于人芽囊原虫的粪便检查，本观察图片可为临床检验提供参考。
关键词：人芽囊原虫；粪便检查；形态
中图分类号：R531 文献标识码：A 文章编号：1009-9727（2005）02-221-03
Stool examination and morphological observation of Blastacystis hominis TIAN Chun-lin LIU Deng-yu, LU Zuo-chao, et al (Department of Parasitology of Guangxi Medical University , Nanning 530021, Guangxi , P R China)
Abstract:Objects To understand the methods of the stool examination and morphology feature of Blastacystis hominis Methods The fresh fecal specimen of patients were examined by direct smear, iodine stained and giemsa stained method under light microscope Results It was observed that out of the 1 495 outpatients,162 were infected,with an infection rate of 1084% The Vacuolated form and Granular form of Bhominis can be easily identified and the Ameba form be seen occasionaly on direct normal saline smear, the cyst can be identified after stained with iodine Conclusion The prevalence of Bhominis in Guangxi area is high Direct smear and iodine stained examination of faeces is adequate for detection of Bhominis infection and the photographs of Bhominis can serve as reference for clinical diagnosis
Key words:Blastacystis hominis; Stool examination; Morphology
人芽囊原虫（Blastacystis Hominis，Bh）由Loesch于1849年首次发现，曾长期误认为它是一种对人体无害的肠道酵母菌，直至1976年，Zierdt［1］概括了该虫具有原虫的生理形态特征后，才逐渐引起研究者的兴趣和关注。近10多年来的研究表明，人芽囊原虫是一种可致病的肠道原虫，感染者可出现腹痛、腹泻等消化道症状［2，3］。由于人芽囊原虫感染的临床症状轻重不一，一般无特征性表现，确诊须依据病原学检查。本研究采用三种常用的粪便检查方法对广西地区的就诊病人进行检查,现将结果报告如下。
1 材料与方法
11 标本来源 收集广西医科大学一附院1495例门诊和住院病人新鲜粪便。
12 检查方法 生理盐水涂片法：取一滴生理盐水加到载玻片上，用竹签挑取绿豆大粪块，在生理盐水中涂匀，加盖玻片，静置1～3min后镜检；碘染色法：生理盐水涂片，加1滴2%碘液，加盖片后镜检；吉氏染色法：生理盐水涂片，晾干后用甲醇固定5min，吉氏原液经蒸馏水稀释5倍后的染液染色20～30min，水洗晾干后镜检。
13 结果记录 先在低倍镜（10×10）下观察，发现可疑虫体后转高倍镜（10×40）下辨认，用Nikon显微镜在油镜（10×100）下测量大小、照相并描述形态特征。
2 结果
粪检1495例就诊病人，查出162例人芽囊原虫感染者，感染率为1084%。三种方法可查见人芽囊原虫滋养体期的空泡型和颗粒型，生理盐水涂片偶见阿米巴样型，碘染色片可见包囊。三种方法检出率相近。其光镜的形态特点如下。
21 生理盐水涂片法 油镜下观察时常见空泡型和颗粒型、偶见阿米巴样型。空泡型(Vacuolated form)多呈圆球形或卵圆形，无色透亮，视野中呈分散或成堆出现。低倍镜下观察约大头针头大，虫体大小差别较大，容易忽略。高倍镜下可见虫体的空泡，其它结构难以辨认。油镜下观察（图1-A），可见虫体内有一个占着很大容量的空泡 (中心体),常与细胞膜之间形成1-2个“月牙”状间隙, 细胞质位于“月芽”状的区域内并环绕中心体，在“月芽”状间隙内常见数个闪光颗粒，大小为1μm左右。测量120个虫体直径为450～2910μm,平均132μm。空泡型虫体另有一种形态称为巨圆形空泡虫体，大小25～291μm（图1-B）；颗粒型(Granular form)虫体呈圆球形或卵圆形，无色半透亮，高倍镜下可见含圆形或椭圆形闪亮小体。油镜下观察（图1-C），可见虫体内充满细胞质，含有数目不等、大小不均、具折光性较强呈亮绿色的颗粒，有的虫体呈空泡状颗粒，且不断增多增大，当充满整个虫体后可致细胞膜破裂而逸出，形成新的虫体。颗粒型虫体可进行多分裂，多个虫体首尾相接，颗粒型虫体也能长出空泡型虫体（图1-E）；阿米巴型(ameba form)生理盐水涂片中偶见少数虫体似阿米巴滋养体，大小10～15μm，有不太明显的伪足且有时向外极缓慢地伸出，但无位移，伪足区域可见空泡或小泡状突起，小泡可脱离母体，形成子代虫体（图1-D）。
22 碘染色涂片 油镜下观察时常见空泡型、颗粒型和包囊。空泡型呈球形、单独或成堆出现，虫体内的中心体染成棕色。细胞质淡棕褐色，呈环状或月芽状，围绕中心体。在碘液着色的胞浆区有多个不连续的深染颗粒沿细胞边缘分布（图1-F）。胞浆有时向空泡区出芽。在涂片中，常能见到处于二分裂状态的空泡型虫体，偶见多分裂状态虫体，即一个空泡型虫体同时在两个方向上处于二分裂状态；颗粒型呈球形或卵圆形，着色较空泡型稍深。胞膜界限清晰，着色深，胞体被深浅不一的胞浆所充满，可见具折光性的细颗粒；包囊型呈球形，黄色或棕黄色。虫体形态结构完整，细胞明显分为内部的圆球形和其外较厚的囊壁样结构两部分，界限清晰。细胞内可见着色不一的细颗粒（图1-G）。
23 吉氏染色法 可见空泡型和颗粒型，虫体呈椭圆形、不规则形，大小不一，内部有似核及其他实质性物质，可见少数三角形及条形深染区。染色粪便标本中亦存在阿米巴型，虫体表现为伸出似伪足的形态（图1-H）。
图1 人芽囊原虫滋养体期和包囊期光镜形态 (×1000) (略)
A-E 生理盐水涂片,F、G 碘染色，H 吉氏染色
A空泡型(Vacuolated form )
B大空泡型(Big vacuolated form)
C颗粒型(Granuar form) D阿米巴型(Ameba form)
E多分裂Bhominis (Mutiple divided Bhominis)
F滋养体(Iodine stained Bhominis trophozoite)
G包囊(Iodine stained cyst)
H滋养体(Giemsa stained Bhominis)
3 讨论
人芽囊原虫是一种广泛寄生于人体和动物肠道内的寄生原虫,呈世界性分布，我国有22个省、市查到感染者，平均感染率为147%(1988～1992), 目前仍在上升［4］。人芽囊原虫的生活史尚不十分明了，最近的研究发现其生活史有两个形态期，即滋养体期和包囊期［5］。该虫滋养体主要寄生于人体回盲部，以肠腔内容物为营养来源，不断随粪便排出包囊，感染者可无明显的临床症状，当机体免疫力降低或肠道正常菌丛失调时，虫体可大量繁殖并侵入肠粘膜，引起粘膜损伤和肠道功能紊乱，出现腹痛、腹胀和腹泻，甚至粘液血便等症状，称为人芽囊原虫病。
本实验人芽囊原虫感染率为1084%，受检者为来自广西地区的各科就诊病人，感染率高于全国平均水平，表明广西人芽囊原虫的感染较重，其流行因素有待进一步研究。
新鲜标本用生理盐水涂片和碘液染色，固定标本用吉氏染色，光镜观察粪便中的该虫形态，发现低倍镜下的虫体很小，极易被忽略而漏诊。高倍镜下为圆形或卵圆形，不易辨认核及其结构，与其它肠道原虫包囊难以区别。在油镜下,虫体结构较易辨认, 空泡型虫体有大空泡（中心体）和“月牙”状胞质等明显的形态特征，颗粒型虫体可见圆形或椭圆形闪亮小体，两种类型均可出现二分裂和多分裂，虫体大小差异大，这是与其它肠道内寄生原虫相区别的一个重要特征。因此，在临床粪便检查中发现疑似虫体时，须经油镜下观察加以鉴别。吉氏染色后的人芽囊原虫其形态多样性，空泡型的细胞核被染成深蓝色，而颗粒型和包囊虫体较小，结构不清晰，这可能与虫体细胞经固定染色后，形态有所皱缩或变化有关。本研究显示用生理盐水涂片和碘液染色方法进行人芽囊原虫粪便检查，具有操作简便、快速和容易观察等优点，较适用于临床检验。本文所提供的人芽囊原虫光镜形态照片，可为临床实验室检验提供参考。
本研究发现，在成形的人粪中多为空泡型和颗粒型虫体，而在稀便中可见阿米巴型虫体。本虫是否存在包囊期一直是一个谜，进入20世纪90年代后才被证实，包囊被认为是感染期，有薄壁和厚壁之分，薄壁包囊可在肠腔内增殖，造成自体感染，而厚壁包囊则与肛-口传播的肠外途径有关。包囊较滋养体小,形态较单一, 圆形或卵圆形,大小为378～774μm。我们用蒸馏水处理人芽囊原虫阳性粪便，2周后光镜下仍可查到圆球形小型虫体，应为包囊，但这类包囊与颗粒型滋养体在光镜下较难区别,两者并无明显的特征性结构差异，仅发现包囊囊壁较厚，在内膜与外膜之间为无色透明的中间层。苏水莲等［6］曾对不同环境中人芽囊原虫包囊的结构经观察发现有颗粒型和空泡型包囊。本实验未见空泡型包囊。研究发现人芽囊原虫的致病性不强,半数以上的感染者为无症状带虫,仅于普查时发现，发病常与机体免疫力下降及感染数量有关。当免疫功能正常时，患者多数症状呈自限性，或表现出间歇性腹泻。本虫常与其它肠道寄生虫合并感染，因此，在粪检中，发现圆球形虫体时须注意与其它肠道寄生原虫区别。
参考文献：
［1］ Zierdt CH, Rude WS, Bull BSPratozoan characteristics of Blastacystis hominis［J］Am J Clin Pathol,1976,48(3):495～501
［2］ Windsor JJ, Macfarlane L, Whiteside TM,et al Blastocystis hominis: A common yet neglected human parasite/Reply［J］British Journal of Biomedical Science,2001,58(2):129～130
［3］ 苏庆平，苏经华，谢曼凌，等．人芽囊原虫病的流调、临床观察和致病机制初探［J］．中国人兽共患病杂志，1994,10(3):41～42
［4］ 李雍龙人体寄生虫学［M］第6版北京：人民卫生出版社,2004，92
［5］ 吴国宏,曹镐禄,苏水莲,等 人芽囊原虫滋养体和包囊的形态学观察［J］赣南医学院学报,2000,20(3):203～205
［6］ 苏水莲,陈桂凤,李娟,等不同环境中人芽囊原虫包囊的结构观察［J］中国寄生虫病防治杂志,2003,16(5):287～289
作者单位：广西医科大学寄生虫学教研室，广西 南宁 530021
作者简介：田春林（1963～），男，广西人，副教授，硕士生导师，主要从事医学原虫与免疫学研究