从养殖蛙及池水中检出51株O1群霍乱弧菌非流行株报告

　    摘要：目的  通过对人工养殖蛙及其池水中O1群霍乱弧菌检测，了解霍乱弧菌在其中的存活及菌型分布情况，为制定防治措施提供依据。  方法  采集人工养殖蛙及养蛙池水进行霍乱弧菌分离培养，血清学诊断符合O1群霍乱弧菌者，按国标法进行系统菌株鉴定。  结果  从624份标本中检出51株O1群E1-Tor霍乱弧菌，总检出率为8．17％，其中稻叶型42株，占82．4％，小川型9株，占17．6％；噬菌体—生物分型：5K29株，占56．9％，其次为9L8株、5L5株、13K5株、9K2株、12K2株。  结论  检出51株O1群 E1-Tor霍乱弧菌均属非流行株。池水检出率高于蛙的检出率。总检出率较高，提示在今后霍乱监测中，这些环境应作为重点之一。

    关键词：群霍乱弧菌；非流行株；噬菌体生物分型

    中图分类号：R378.3    文献标识码：B    文章编号：1009-9727（2005）02-375-02

    Report of 51 non-epidemic strains of Vibrio chloerae O1 group detected from frogs and cultivating pool  HUANG Chang-he, Wu Jie, WANG Jia-hao, et al  (Hainan Provincial Center for Disease Control and Prevention, Haikou 570203, Hainan, P RChina)

    Abstract  Objective  To understand the survival and distribution of types of V cholerae to provide basis for drawing out control and prevention measures through testing V cholerae O1 from farmed frogs and pool water  Methods  Collecting samples of farmed frogs and the pool water to isolate V cholerae If the strains were V cholerae O1 through diagnosis of serology they would be identified systematically according to the national standard  Results  51 strains of V cholerae of El-Tor biotype were tested from 624 samples The rate was 817% In that 42 strains were Inaba type (824%) 9 strains were Ogawa type (176%) The results of bacteriophage-biotype were that 569% of them was 5K (29 strains) and others were 9L (8 strains), 5L (5 strains), 13K (5 strains), 9K (2 strains) and 12K (2 strains)  Conclusions  All the 51 strains of V cholerae of El-Tot biotype were non-epidemic strains The rate of samples from pool water was higher than that of frogs In general the rate was rather high It prompted that the aquatic farm was one of the focal points for surveillance of V cholerae

    Key wards:V cholerae O1;Non-epidemic strain;Bacteriophage-biotype

    为了解霍乱弧菌在人工养殖蛙及其池水中存活及其菌型分布情况，我们在2004年6月～7月期间，在海南省H市、W市、Q市23个养蛙场采集人工养殖的蛙及其池水，采集标本624份(其中蛙标本551份，养蛙池水73份)进行霍乱弧菌检测，共检出O1群霍乱弧菌51株。现将鉴定结果报告如下。

    　1  材料与方法

   　 1．1  材料

    　1．1．1  标本  采自W市养蛙场的蛙标本486份、养蛙池水47份，Q市养蛙场的蛙标本52份、养蛙池水14份，H市养蛙场的蛙标本12份、养蛙池水13份。

    　1．1．2  霍乱弧菌诊断血清购自卫生部兰州生物制品研究所和中国药品生物制品检定所，在有效期内使用。

    　1．1．3  溶原性检测指示菌  16141SM6原购自中国药品生物制品检定所，本实验室保存。

    　1．1．4  鉴定和分型用噬菌体  溶原噬菌体(919)、第Ⅳ组霍乱噬菌体和VP1～VP5由广东省疾病预防控制中心实验室提供。

    　115  CT(霍乱肠毒素)基因检测用仪器及试剂  主要仪器为2400基因扩增仪(美国PE公司产品)； PCR试剂盒购于中国预防医学科学院疾病预防控制中心传控所。

    　1．2  方法

    　1．2．1  分离培养按《霍乱防治手册》第46页～第51页进行［1］。

    　1．2．2  鉴定方法按《霍乱防治手册》第51页～第64页进行［1］。

    　1．2．3  CT检测方法按PCR试剂盒使用说明进行。

  　  2  结果

   　 2．1  总检出结果  从624份标本中检出51株O1群E1-Tor霍乱弧菌，总检出率为8．17％，其中蛙检出率为7％(39／551)，养殖池水检出率为16．4％(12／73)。

   　 2．2  检出菌株的生物学特性  51株菌均为革兰染色阴性弧菌，动力活泼，氧化酶试验阳性，在4号琼脂平皿上菌落中心呈灰黑色，光滑湿润，边缘整齐。全部菌株发酵甘露糖、蔗糖，不发酵阿拉伯胶糖。

  　  2．3  血清分型  51株菌与霍乱O1群的“O”多价血清凝集良好，属稻叶型42株，占82．4％，小川型9株，占17．6％  结果见表1。

   　 表1  51株霍乱弧菌血清型略)Table 1  Serologic type of 51 strains of Vcholerae               

    　2．4  两个生物型与噬菌体-生物分型  51株菌均被Ⅳ组霍乱弧菌噬菌体原液(109PFU／ml)裂解，不被常规稀释液(106PFU／m1)裂解，均属霍乱弧菌E1-Tor生物型。噬菌体-生物分型分布于6个型，其中5K29株，占56．9％，其次为9L8株，结果详见表2。

  　  表2  51株霍乱弧菌噬菌体—生物分型结果略)Table 2  Results of Bacteriophage-biotype of 51 strains of Vcholerae    

  　  2．5  霍乱弧菌CT基因检测  从51株菌中选取不同型别代表株(稻叶型10株，小川型 9株)进行CT基因检测，结果全部阴性。

    3  讨论

    本次从人工养殖的蛙及水中检出51株O1群霍乱弧菌，经血清学分型属稻叶型42株，占82．4％，小川型9株，占17．6％；噬菌体-生物分型为5K、5L、9K、9L、12K与13K  6个型别，选取不同血清型别的代表株进行霍乱弧菌CT基因检测均为阴性，确定本次检出的51株［1］O1群E1—Tor霍乱弧菌为非流行株。

    近年来，对两类菌株的研究表明,O1群E1—Tor霍乱弧菌流行株和非流行株在致病性、传染性和引起霍乱的流行病学特点上明显不同［1～4］，两者主要区别于是否产生霍乱肠毒素及携带CT基因［3～5］，前者产生霍乱肠毒素、带有CT基因，可引起霍乱流行或大流行，而后者为非产毒株或不携带CT基因，也很可能有少数产毒株，但这些菌株不引起霍乱流行，特别是大流行［4］，只致散发性腹泻。本次选取19株不同型别代表株进行 CT基因检测，结果全部阴性，与国内有关报道［3～6］基本一致。

     有关菌型的变迁、分布、构成与对流行因素影响的报道甚多［9～11］。海南省自1961年以来，经历了5次霍乱流行［9～11］，流行菌型自20世纪六十年代的小川型，到七十、八十年代稻叶型至九十年代小川型、稻叶型、O139并存。流行的O1群菌株的噬菌体-生物分型主要菌型为1b、1d、3b、1f。在历年的外环境标本检测中很少检出非流行株，而本次从养殖蛙及其池水中检出51株O1群霍乱弧菌非流行株，且噬菌体-生物分型菌型较多种。这对进一步了解海南省O1群霍乱弧菌在外环境中的生存状况及其菌型的分布，提供了有价值的参考资料。本次检出率较高的结果提示，可能养殖蛙的水环境适宜于弧菌生存繁殖，故于今后的霍乱监测中，应将其列为重点对象。

   　 参考文献：

    ［1］ 卫生部疾控司霍乱防治手册［M］第五版 1999

    ［2］ 高守一埃尔托型霍乱弧菌流行株和非流行株两类菌株的研究及应用［J］中华流行病学杂志，1988，9(特刊3号)：10

    ［3］ 杨永民，高守一，刘延清埃尔托霍乱弧菌两类菌株CT基因的研究［J］中华流行病学杂志，1988，9(特刊3号)：283

    ［4］ 高守一，吴顺娥，刘延清，等美洲埃尔托型霍乱弧菌的噬菌体-生物分型［J］中华流行病学杂志，1992，13(特刊7号)：203

    ［5］ 王建辉，刘延清，祁国明，等霍乱弧菌CT基因的转移［J］中华流行病学杂志，1992，13(特刊7号)：238

    ［6］ 于永茂，刘延清，祁国明，等霍乱弧菌几种肠毒素基因检测［J］中华流行病学杂志，1993，14(特刊15号)：141

    ［7］ 张贤良，崔恒山南通市1975～1997埃尔托型霍乱弧菌两类菌株型特征及其与流行关系的控讨［J］中华流行病学杂志，1992，13(特别7号)：206

    ［8］ 孙国祥埃尔托型霍乱弧菌菌型的变迁与浙江省霍乱流行的态势［J］中华流行病学杂志，1994，15(5—A)：259

    ［9］ 潘先海海南省1998年霍乱流行病学分析［J］中国公共卫生，1999，15(6)：559

    ［10］ 许声椿海南省1989年霍乱流行病学分折［J］中华流行病学杂志，1989，10(特刊10号)：29

    ［11］ 许声椿，陈言海南岛第三次霍乱流行概况回顾［J］中华流行病学杂志，1992，13(特刊7号)：48

　　作者单位：1海南省疾病预防控制中心，海南 海口  570203；

　　2文昌市疾病预防控制中心，海南 文昌  571300；

　　3琼海市疾病预防控制中心，海南 琼海  571400