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The application and evaluation of Beckman biochemical analyzer in detection of saccharified hemoglobin by gel agglutination.
ZHENG Jian-bin，WANG Cui-xia，MAI Qi.
（Laboratory Department of Affiliated Hospital of Guangdong Medical College，Zhanjiang524001，Guangdong，P.R.China）
摘要:目的 探讨胶乳凝集法测定糖化血红蛋白在Beckman生化分析仪的应用以及临床应用价值。 方法 与HPLC进行方法学对比，并进行精密度、回收试验、干扰试验及参考范围的分析。 结果 对比试验:y=1.007x+0.142，r=0.995，P<0.001;精密度:CV<2%:平均回收率为102.2%;干扰试验，CV<2%;参考范围为3.8～5.8%。 结论 胶乳凝集法测定HbA1c在生化分析仪上的应用，简单而快速，结果准确，能适应临床的需要。
关键词:糖化血红蛋白;胶乳凝集;全自动生化分析仪
糖化血红蛋白（HbA1c）是血红蛋白的成分之一，生成缓慢，与血液中葡萄糖浓度持续升高成正比，能够准确反映糖尿病患者在过去2～3个月中的血糖平均浓度，是目前临床用于糖尿病（DM）的药物疗效观察及控制程度的指标。测定HbA1c的方法有很多，而胶乳凝集法快速灵敏、操作简便，已被广泛使用。本文主要探讨该法在Beckman生化分析仪上的使用。
1 材料和方法
1.1 试剂与仪器 试剂为上海申索佑福医学诊断用品有限公司提供的胶乳凝集反应双试剂，仪器为BeckmanLX-20全自动生化分析仪，以及Bio-Rad全自动血红蛋白检测仪（DiaSTAT），以及相配套的试剂。
1.2 标本 来自本院门诊病人，其中20位为非糖尿病者，20位为糖尿病患者，标本用EDTAK2抗凝。
1.3 方法 标本经2000rpm2min离心分离后，取血细胞层10μl，加入1ml溶血液，溶血后直接上机测定。仪器参数设定为:反应类型:2点终点法;反应方向:正反应;主波长:600nm;副波长:700nm;试剂A为225μl;试剂B为75μl;样品为6μl;空白起始读数为336秒，终止读数为352秒;反应起始读数为608秒，终止读数为624秒。
2 结果
2.1 对比试验 取20份标本在BeckmanLX-20全自动生化分析仪上用胶乳凝集法，在BiO-Rad糖化血红蛋白仪上用高效液相离子交换层析法（HPLC）进行测定并做比较。
表1 两种方法对比统计结果（略）
2.2 精密度分析 20份标本在24h内和3d内重复测定，结果见表2。
表2 日内变异和日间变异的结果（略）
2.3 回收试验 用已知含量的标本加入不同浓度的标准液，结果见表3。
表3 回收试验结果（略）
平均回收率为102.2%。
2.4 干扰试验 分别在血液标本中加入抗坏血酸50mg/dl，葡萄糖1000mg/dl，胆红素50mg/dl，乙酰化血红蛋白10mg/dl，氨基甲酰化血红蛋白10mg/dl，均分别取初始浓度为1/4，2/4，3/4，4/4，加入样品进行测试，见表4。
表4 各干扰物不同浓度下所测定HbA1c值（略）
以上各组数据CV值均在2%以下，可以认为干扰物对结果无影响。
3 讨论
HbA1c是血红蛋白生成后与糖类物质经非酶促化而结合形成的，其合成过程较缓慢，相对不可逆，持续于红细胞的120d生命期。合成速率与红细胞所处环境中的糖浓度成正比。故HbA1c的测定可反应测定前6周～10周内的平均血糖水平 ［1］ 。HbA1c的作用机制是影响细胞外信息传导途径，改变细胞内活性因子的浓度及正常血红蛋白的结构和功能 ［2］ ，因此，HbA1c的测定可作为糖尿病控制病情及药物疗效观察的指标，如能定期有规律的检测则能更有利于血糖的控制，提高病人血糖的长期稳定性 ［3］ 。
HbA1c的测定方法主要有4种:色谱法、电泳法、免疫法和化学法 ［4］ 。HPLC一直作为HbA1c检测的金标准，而得到人们的普遍认同 ［5］ ，但检测成本高，需要专用仪器，电泳法和化学法，操作繁琐，时间长，外界影响因素多。本文使用的方法把胶乳凝集法和自动生化分析仪很好的结合在一起，具有特异性强，重复性好，检测灵敏度高，精密度高，抗干扰等优点，以及能进行全自动大批量测定，速度快，检测方便等优点。
本文HbA1c的参考范围为3.8%～5.8%，与文献 ［6］ 报导的3.8%～6.2%接近。据Frank报道 ［7］ HbA1c百分含量与年龄有关，每长10岁，HbA1c百分值将增加约0.11%～0.15%。随着我国人民生活水平的提高以及人口老龄化的进程，我国每年约增加100万新的糖尿病患者，可以说糖尿病已严重地威胁着人类的健康和生活质量。有关糖尿病的控制和并发症的研究表明HbA1c水平增加会加大并发症的发病风险;反之，如果HbA1c水平降低将预示并发症的风险大大降低 ［7］ 。刘玉泉等将HbA1c≥6.0%作为筛选指标 ［8］ ，在欧美等国家，认为对于糖尿病患者，HbA1c的水平最好控制在7.5%以下 ［9］ 。
从以上的结果分析可以看出，胶乳凝集法检测HbA1c有较好的检测重复性（CV<2%），完全可以满足临床的需要，而且与经典的HPLC法相关良好。另外，相对于HPLC需要特定仪器，操作比较麻烦等问题，胶乳凝集法的应用更为简单，而且结果的精密度十分良好，为临床医生调整糖尿病治疗方案提供确实可靠的依据，而且可以在使用自动生化分析仪的单位推广使用。
参考文献:
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［3］伍贻新，顾燕云，方佩明，等.HLC-723G7糖化血红蛋白定量分析仪评估报告［J］.临床检验及实验室设备，2003，上:86～88.
［4］张秀明，李健斋，魏明竟，等.现代临床生化检验学［M］.北京:人民军医出版社，2001，104～107.
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［6］郑彤，刘洪斌，戴友良，等.胶乳凝集透射终点法测定糖化血红蛋白［J］.上海医学检验杂志，2001，16（4）:231～234.
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［8］刘玉泉，赵斌，荆成宝，等.乳胶凝集法HbA1c测定及其临床应用［J］.实用医技杂志，2004，11（4）:444～445.
［9］Gremmels HD，Richter A，Watzke I.Evaluation of the hemoglobin Alc-am-alyzer TOSOH HLC-723G7［J］.Clin Lab，2003，49:243.