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摘要:目的 研究普鲁兰多糖的潜在致突变性。 方法 采用小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠骨髓细胞染色体畸变试验、小鼠精子畸形试验进行观察。 结果 骨髓细胞微核试验、骨髓细胞染色体畸变、精子畸形试验均为阴性结果。 结论 普鲁兰多糖在所试条件下无潜在的致突变作用。
关键词:普鲁兰多糖;染色体;微核;精子
Study on the impact of pullulan on chromosome aberration and micronucleus in bone marrow cells and sperm abnor-mality of mice.
WANG Jing-Bin，TAN Jian-Bin，LI Xin，et al.
（Institute of Toxicology of Guangdong Provincial Center for Dis-ease Control and Prevention，Guangzhou510300，Guangdong，P.R.China）
Abstract:Objective To explore the potential mutagenic action of pullulan on mice. Methods The micronucleus test of bone marrow cells，chromosome aberration test of bone marrow cells，sperm shape abnormality test in mice were carried out and the results were analyzed. Results The results of micronucleus test of bone marrow cells，chromosome aberration test of bone marrow cells，sperm shape abnormality test in mice were negative. Conclusion Pullulan does not induce potential mutation in animal test.
Key words:Pullulan;Chromosome;Micronuclei;Sperm
普鲁兰多糖（Pullulan）是由出芽短梗霉利用糖发酵产生的一种胞外多糖，该糖无色无味，具有优良的水溶性、成膜性、氧气不渗透性、成纤性、可塑性、粘结性和自然降解性等许多独特的物理化学和生物特性，可被广泛应用于医药、食品、化妆品、烟草和农业等领域，是一种具有极大经济价值和开发潜力的多功能新型生物材料 ［1］ 。国外学者应用慢性毒性试验和鼠伤寒沙门氏菌试验证明普鲁兰多糖没有毒性 ［2］ 。普鲁兰多糖对小鼠骨髓细胞染色体畸变率、小鼠骨髓微核率及小鼠精子畸变率的影响至今未见报道。我们观察了普鲁兰多糖对小鼠骨髓细胞染色体畸变率、小鼠骨髓微核率及小鼠精子畸变率的影响，结果报告如下。
1 材料和方法
1.1 试验材料 普鲁兰多糖为非结晶性白色粉末，某公司送检样品。设2.50、5.00、10.0g/kg BW三个剂量组，称取普鲁兰多糖2.50、5.00、10.0g分别用纯净水稀释至40ml供试。
1.2 动物 第一军医大学实验动物中心提供的SPF级NIH种小鼠，饲养温度为（22±2）℃，湿度60%～80%。
1.3 仪器 电子天平、欧林巴斯显微镜。
1.4 方法 ［3，4］
1.4.1 小鼠骨髓细胞微核试验 选NIH种小鼠50只，体重25～30g，雌雄各半，随机分为5组，设10.0、5.00、2.50g/kg·BW3个剂量组及阴性对照组（蒸馏水）和阳性对照组（环磷酰胺0.05g/kg·BW）。用30h给受试物方法试验:分两次灌胃，灌胃量0.4ml/10g·BW，于第二次灌胃6h后，处死小鼠取胸骨骨髓材料制片、染色、镜检，油镜下每组计数10000个嗜多染红细胞数（PCE），求出各组微核率，同时计数每鼠200个PCE中的成熟RBC数，按泊松分布方法作统计学处理。
1.4.2 小鼠骨髓染色体畸变试验 采用72h法进行试验。选择NIH种小白鼠50只，体重25～30g，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，根据急性毒性试验结果，设最高剂量为10.0g/kg·BW，该剂量以下设5.00、2.50g/kg·BW两个剂量，阴性对照组灌胃给予等量的纯净水，阳性对照组用0.05g/kg·BW环磷酰胺经口染毒。将受试物分两次灌胃，灌胃量0.4ml/10g·BW，每次间隔24h，处死动物前2～4h，按4mg/kg·BW腹腔注入秋水仙素，于第二次灌胃24h后，处死小鼠，取股骨骨髓材料制片、染色、镜检，每组观察1000个分散良好、着色清晰的中期分裂相细胞，观察染色体畸变，求出染色体畸变率，按χ 2 检验作统计学处理。
1.4.3 小鼠精子畸形试验 选用NIH种雄小鼠25只，体重25～35g，随机分成5组，设10.0、5.00、2.50g/kg·BW3个剂量组及阴性对照组（蒸馏水）和阳性对照组（环磷酰胺0.05g/kg·BW），连续灌胃5d，灌胃量0.4ml/10g·BW，经35d后处死动物取双侧副睾按常规制片、染色，油镜下每组检查完整精子5000条，求出精子畸形率，按Wilcoson秩和检验方法作统计学处理。
2 结果
2.1 小鼠骨髓细胞微核试验 各剂量组的微核率与阴性对照组比较，差异在统计学上均无显著性意义（P>0.05），其微核率均在小鼠自然畸变正常范围内（1‰～3‰），而阳性组与阴性组比较差异有显著性意义（P<0.01），受试物普鲁兰多糖对体细胞无诱变作用。
表1 普鲁兰多糖小鼠骨髓微核试验（略）
2.2 小鼠骨髓细胞染色体畸变试验 各剂量组的染色体畸变率与阴性对照组比较，差异在统计学上均无显著性意义（P>0.05），而阳性组与阴性组比较差异有显著性意义（P<0.01），普鲁兰多糖对小鼠骨髓细胞无诱变作用。
2.3 小鼠精子畸形试验 各剂量组的精子畸形率与阴性对照组比较，差异在统计学上无显著性意义（P>0.05），而阳性组与阴性组比较差异有显著性意义（P<0.01），普鲁兰多糖对生殖细胞无诱变作用。
表2 普鲁兰多糖对小鼠骨髓细胞染色体畸变率的影响（略）
表3 普鲁兰多糖小鼠精子畸形分析结果（略）
注:※※与阴性对照组比较，P<0.01。
3 结论
通过小鼠骨髓细胞染色体畸变试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验对普鲁兰多糖进行致突变性评价，小鼠骨髓细胞微核试验、骨髓细胞染色体畸变试验、小鼠精子畸形试验结果均为阴性，本实验研究结果表明，普鲁兰多糖未显示有致突变性，可以作为食品添加剂使用。
参考文献:
［1］许勤虎，徐勇虎，闫雪冰，等.普鲁兰多糖及应用进展研究［J］.山西食品工业，2003，2.
［2］Kimoto T，Shibuya T，Shiobara S.Safety studies of a novel starch，pullulan:chronic toxicity in rats and bacterial mutagenicity［J］.Food Chem Toxicol，1997，35（3-4）:323～329.
［3］中华人民共和国卫生部.GB15193-2003《食品安全性毒理学评价程序和方法》［M］.北京:中国标准出版社出版，2004，17～45
［4］中华人民共和国卫生部.《保健食品检验与评价技术规范》［S］.2003年版.