OptiMAL疟疾快速诊断试纸条的现场应用评价

　　摘要:目的 评价检测疟原虫乳酸脱氢酶快速诊断试纸条产品OptiMAL现场应用效果。 方法 以疟原虫镜检诊断为标准，用OptiMAL试纸条检测疟区门诊发热病人中的疟疾病人。 结果 检测间日疟的敏感度为59%（95%CI:0.4754～0.6983），特异度为95%（95%CI:0.9268～0.97）;检测恶性疟的敏感度为60%（95%CI:0.2307～0.8824），特异度为99%（95%CI:0.9803～0.9985）。出现1例间日疟交叉反应。 结论 快速诊断试纸条能够在基层简易、快捷的用来诊断间日疟和恶性疟。
   
　　关键词:OptiMAL;间日疟;恶性疟
   
　　Assessement of OptiMAL assay for rapid diagnosis of malaria in the field.

　　ZHOUSheng，ZHANG Zai-xing，LI Li，et al.

　　（Yunan Provinical Institute of Parasitic Diseases，Simao665000，Yunnan，P.R.China）
   
　　Abstract:Objective To evaluate the effectiveness of OptiMAL assay in rapid detection of plasmodium lactate dehydrogenase in the field. Methods OptiMAL assay was used for detection of malaria cases from feverish outpatient and the results were compared with that of microscopy. Results The sensitivity and specificity of OptiMAL assay for detection of Plasmodium vivaxmalaria were59%（95%CI:0.4754～0.6983）and95%（95%CI:0.9268～0.9700）;the sensitivity and specificity of OptiMAL assay for detec-tion of Plasmodium falciparummalaria were60%（95%CI:0.2307～0.8824）and99%（95%CI:0.9803～0.9985）.Cross re-action was observed in a patientwith Plasmodiumvivax. Conclusion OptiMAL assay can be used at grassroots level for rapid de-tection of Plasmodium vivaxmalaria and Plasmodium falciparummalaria.
   
　　Key words:OptiAMAL assay;Plasmodium vivax;Plasmodium falciparum
      
　　疟疾诊断是疟疾防治的关键，一直以来疟疾诊断的研究和新方法的应用是相关研究的热点，但疟疾诊断至今仍然采用传统的显微镜检查作为金标准。显微镜检查需要有专业的镜检人员，完成一次检查还需要一定的时间。同时，缺乏显微镜设备则是另一个制约边远农村地区疟疾病人得到快速诊断和及时治疗的因素。由于疟疾发病率的波动、镜检人员的频繁更替和大量流动人口的存在，使得提供一种快速、灵敏、简便的疟疾快速诊断成为满足现阶段疟疾快速诊断和及时治疗的控制策略的需要。
   
　　随着分子生物学和免疫学等学科领域的发展，有性期和无性期的疟原虫产生的乳酸脱氢酶（pLDH）由于其自身特殊的特性成为疟疾诊断技术的一种选择。疟疾快速诊断卡已经在世界各地的不同流行和非流行地区进行了应用评估。并且获得了不同的结果 ［1～5］ 。在疟疾中度和低度流行区，采用快速诊断卡可协助确诊，并可达到迅速治疗病人的目的，这对疟疾控制有重要的意义。美国生产的OptiMAL，就是运用该特性检查血液中pLDH来特异性诊断疟疾的一种快速抗原检查。本文就该诊断试纸条在云南进行现场应用研究，旨在为快速诊断卡在中国疟疾流行区的应用提供科学的依据。
   
　　1 材料和方法
    
　　1.1 诊断试纸条 本研究使用的OptiMAL疟疾快速试纸条为美国Flow Incorporated公司生产。批号为:Lot BC112700。有效期至12/1/01。产品贮藏在8～30℃。
   
　　1.2 受检对象 于2001～2002年就诊于元江县防疫站门诊和勐腊县勐仑乡卫生院的发热病人。
   
　　1.3 操作方法 严格按照OptiMAL产品使用说明进行操作，具体如下:①在试验井中滴入1滴缓冲液，然后加入10μl全血并混匀。②将快速诊断试纸条薄的一端放入试验井中，待井中血样全部吸至试纸条。③移置诊断试纸条至另一个已滴入4滴缓冲液的试验井中，试纸条吸取缓冲液并洗脱完试纸条上的血色后，即可读出试纸条上显示的反应色带结果。
   
　　1.4 结果判断 阳性为在试纸条白色中央区显示两条或三条色带，其中二条色带为间日疟，三条色带为恶性疟。阴性为在试纸条白色中央区显示一条色带。无效试纸条:无任何色带显示。
   
　　1.5 显微镜检查 调查点专业人员用发热病人外周血涂取厚血膜和薄血膜血片。用甲醇固定后，Giemsa染色，由有经验的云南省寄生虫病防治所专业人员用Olympus双筒显微镜盲法进行镜检。使用计数器计数厚血膜200个白细胞对应视野的疟原虫无性体和有性体数。如果疟原虫无性体数已达500个而白细胞数尚不足200时，则计数完该视野的白细胞和原虫数后停止。如果白细胞计数达200个，而疟原虫无性体数不足10个时，则继续计数白细胞至500个及其所在视野对应的无性体和有性体原虫数。薄血膜血片则用来判断疟原虫类型。
   
　　原虫密度的计算，根据Greenwood和Armstrong的方法，采用公式计算:原虫密度（个/μl）=原虫数×8000/白细胞数
   
　　1.6 资料的收集与分析 使用统一的问卷表询问病人的性别、年龄及疟史等情况。所有发热病人的厚血膜和薄血膜由固定的有经验的专业人员检查，各种资料用Epi Info2000建数据库、输入并分析。
   
　　2 结果
   
　　本项研究共调查了493名发热病人，其中2001年完成206名，2002年调查287名。被调查者中年龄为1～80岁，男性为296例女性为197例，其中16%（79例）为疟疾病人（72例间日疟，5例恶性疟，2例混合感染）。检测间日疟的敏感度为，59%（95%CI:0.4754～0.6983），特异度为95%（95%CI:0.9268～0.97）;检测恶性疟的敏感度为60%（95%CI:0.2307～0.8824），特异度为99%（95%CI:0.9803～0.9985）。出现1例间日疟交叉反应。
   
　　表1 OptiMAL检测和厚血膜镜检疟疾的结果（略）
   
　　表2 OptiMAL检测不同原虫密度疟疾的结果（略）
   
　　3 讨论
   
　　研究中发现，OptiMAL试纸条诊断疟疾有假阳性和假阴性现象，这不仅可能与OptiMAL试纸条自身的诊断能力有关，也可能同其他因素有关。研究中使用的OptiMAL试纸条为同一批产品，该批次产品于2001年12月超过保质期。在保质期前使用的206例试纸条中，诊断间日疟的敏感度为88%，特异度为91%，这远远高于超过保质期后使用的试纸条诊断间日疟的敏感度52%，特异度99%。因此，受保质期的影响，本项研究的结果可能低估了OptiMAL试纸条的各项检验指标。
   
　　由于开展研究时，未能获得足够的恶性疟患者，从仅有的 几例恶性疟病例诊断的结果尚不能就本项调查作出OptiMAL对恶性疟诊断能力的判断，更深入的分析有待进一步的研究。本次研究中，OptiMAL试纸条未能诊断出一例密度较低的单纯的恶性疟配子体患者，这例漏诊的出现可能与OptiMAL试纸条的诊断能力存在一定原虫密度的检测阈值有关，该现象与现有报道一致 ［2，3，5，6］ 。
   
　　研究中还发现，OptiMAL试纸条无法诊断混合感染。试纸条的显示色带上仅能提示为恶性疟。尽管这样可以防止因恶性疟产生的严重的病程进展，但是对于混合感染者治疗方案的选择使用上有一定的欠缺。
   
　　疟原虫乳酸脱氢酶是疟原虫的一种具有特异性酶活性的功能蛋白，其酶的特异性与人的乳酸脱氢酶有明显差异。疟原虫的无性期和配子体均可产生乳酸脱氢酶，利用pLDH不同于人体红细胞产生的乳酸脱氢酶的特性，OptiMAL试剂条诊断疟疾应该有广阔的应用前景。同时OptiMAL试纸条操作简便，快速，结果容易判断。操作者容易掌握，一个完整的诊断过程通常仅需10min左右。在缺少镜检设备或镜检人员的卫生院和私人诊所，使用OptiMAL试纸条会带来很大的方便。另外，OptiMAL试纸条可以在常温下保存，这特别适合于基层的使用。

　　（致谢:本研究的现场工作得到了元江县疾控中心的马信文，杨太专，李艺花和勐腊县疾控中心的肖育江等医生的大力协助，特此致谢!）

　　参考文献:
    
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　　［3］Palmer CJ，Lindo JF，Klashala WI，Quesada JA，Kaminsky R，BaumMK，Ager AL.Evaluation of the OptiMAL test for rapid diagnosis of Plasmodium vivax and Plasmodium falciparummalaria［J］.Journal of Clinical Microbiol-ogy，1998，36（1）:203～206.
   
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　　［5］ Fryauff DJ，Purnomo，Sutamihardja MA，Elyazar IR，Susanti I，Krisin，Subianto B，Marwoto H.Performance of the OptiMAL assay for detection and identification of malaria infections in asymptomatic residents of Irian Jaya，Indonesia［J］.The American Journal of Tropical Medicine and Hy-giene，2000，63（3-4）:139～45.
   
　　［6］Murray CK，Bell D，Gasser RA，Wongsrichanalai C.Rapid diagnostic test-ing for malaria［J］.Tropical Medicine and international health，2003，8:876～883.