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【摘要】 目的 探讨抑酶肽对失血性休克兔再灌注肺损伤的保护作用。 方法 36只白兔随机分为对照组、休克组和抑酶肽组，每组12只,分别于休克2h、复苏后2h取静脉血测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、磷脂酶A2(PLA2)的含量及肺组织的湿/干重比值。 结果 抑酶肽组的MDA含量明显低于休克组(P<0.05);SOD含量明显高于休克组(P<0.05);磷脂酶A2和肿瘤坏死因子α的含量明显低于休克组(P<0.05);肺组织的湿/干重比值也明显小于休克组(P<0.05)。 结论 早期持续小剂量运用抑酶肽可通过抑制氧自由基的产生,参与炎症反应的多个环节,从而减轻创伤失血性休克兔再灌注肺组织损伤。
【关键词】 抑酶肽 失血性休克 急性肺损伤 丙二醛 超氧化物歧化酶 肿瘤坏死因子α 磷脂酶A2
失血性休克是导致多器官功能障碍综合征(MODS)发生发展的重要原因之一,急性肺损伤(ALI)是休克后全身炎性反应综合征的严重阶段。研究表明,抑酶肽能减轻炎症反应和肺的形态学及功能变化,具有肺保护作用［1］。本研究拟通过观察抑酶肽对家兔失血性休克再灌注复苏过程MDA、SOD、肿瘤坏死因子α、磷脂酶A2的影响及肺组织的湿/干重比值,探讨抑酶肽对失血性休克及复苏过程中肺的保护作用及其机制。
1 材料与方法
1.1 实验分组 取健康白兔36只,体重2.2～2.6kg,随机分为3组:对照组、休克组和抑酶肽组,每组12只。
1.2 实验方法 用氯胺酮肌注麻醉,首次剂量4mg/kg,以后每隔1h肌注氯胺酮4mg/kg,分离右股动、静脉并插管,对照组只进行以上操作,上述操作完成后观察10min待循环稳定后,抑酶肽组静注抑酶肽30 000kIU/kg,随后1 000kIU/kg-1·h-1维持至实验结束,休克组和抑酶肽组均在15min后经右肥肉动脉放血至平均动脉压40mm±5mmHg 60min制成失血性休克模型,并间断回输或放血维持此血压,2h后快速回输全部自体抗凝血并追加输入等量的乳酸林格式液,三组分别于放血前(TO)、失血性休克2h(T1)、复苏2h(T2)各从股静脉取血备用,并于复苏2h后处死动物取左上肺。
1.3 观察指标
1.3.1 丙二醛(MDA) 用比色法检测(BT224型比色仪:北京德尔曼生物科技有限责任公司)。
1.3.2 超氧化物歧化酶(SOD) 用发光法检测(BPCL微弱发光测量仪:中科院生物物理研究所)。
1.3.3 用底物酶促反应法测定血清磷脂酶A2(PLA2)水平。
1.3.4 血清肿瘤坏死因子α用放射免疫法检测,按试剂盒说明书进行操作。
1.3.5 复苏2h后处死动物,取左上肺称重,然后将湿肺组织放入烤箱内烤24h(60℃),计算肺湿干重比值以估计肺组织的水肿程度。
1.4 统计学处理 采用SPSS13.0统计软件进行处理,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有显著意义。
2 结果
2.1 3组动物一般情况差异无统计学意义,抑酶肽组与休克组在放血量、回输的自体血及液体量、放血时间、回输时间差异无统计学意义。见表1。
表1 三动物一般情况（略）
2.2 休克组及抑酶肽组分别在休克2h、复苏后2h血清中SOD含量明显下降,MDA的含量明显上升,与放血前及正常对照组在各时间点上比较差异有显著性(P<0.05);同时抑酶肽组与休克组在休克2h、复苏后2h血清中SOD、MDA含量相比较差异有显著性(P<0.05)。见表2。
2.3 抑酶肽组血清PLA2含量在T1时高于对照组(P<0.05),在T2时明显低于休克组(P<0.05),休克组血清PLA2含量在T1和T2时值明显高于对照组(P<0.05),抑酶肽组血清TNFα水平在T1和T2时比对照组略有升高,但差异无显著意义,但明显低于休克组(P<0.05),休克组血清TNFα水平在T2时比对照组明显升高(P<0.05)。见表3。
2.4 休克组动物肺组织湿干重比值为9.48±1.20,抑酶肽组为5.87±1.17,对照组为3.65±1.24。休克组与抑酶肽组相比差异有显著性(P<0.05);同时与对照组比较差异也有统计学意义(P<0.05)。
表2 血清中丙二醛和超氧化物歧化酶的变化（略）
注:与T0时比,P<0.05,与B组相比,▲P<0.05。
表3 血清中血清磷脂酶A2和肿瘤坏死因子α的变化（略）
注:与A组比,P<0.05,与B组相比,★P<0.05,与T0比,▲P<0.05。
3 讨论
失血性休克时产生的大量的氧自由基是一种具有组织毒性的中性粒细胞产物,在复苏过程中,组织产生的大量氧自由基随着血流进入循环,通过膜脂质过氧化反应而破坏细胞膜的结构,使细胞发生不可逆损伤。肺脏是唯一接受全身回流血液的器官,是最常见受损的靶器官,首先受到循环中炎性细胞及介质的损害,急性肺损伤(ALI)是休克后全身炎性反应综合征的严重阶段［2］。
丙二醛(MDA)是脂质过氧化作用的最终产物,它的含量反映了机体脂质过氧化的速率和强度,间接反映体内自由基的水平,测其含量可间接了解肺组织缺血再灌注损伤程度。本研究显示,抑酶肽组在休克后2h及复苏后2h MDA与对照组明显减少,表明抑酶肽能抑制体内氧自由基的产生,使脂质过氧化反应减弱,从而使MDA产生减少。测定SOD的活力可反映组织内自由基水平及脂质过氧化的程度［3］,本研究结果表明抑酶肽具有抗脂质过氧能能力,使体内SOD含量增加,从而清除休克及再灌注时体内产生的氧自由基,保护细胞免受氧自由基的损伤。SOD、MDA联合检测,可更好地反映体内氧自由基的产生和清除水平。
另外本研究中休克组动物肺组织的湿重/干重明显大于抑酶肽组,表明休克组肺组织的含水量较抑酶肽组多,提示早期使用抑酶肽治疗能减轻脂质过氧化反应和炎症介质的释放,降低肺血管通透性,减轻肺水肿,从而对休克再灌注肺损伤有治疗作用。
PLA2是花生四烯酸(AA)、前列腺素(PE)、血小板活化因子(PAF)等诸多生物活性物质的限速酶,这些物质都具有强烈的生物活性作用［4］。研究显示PLA2调控着多种炎性细胞的活化,肺组织中存在着PLA2的多种靶细胞,如肺泡上皮细胞、血管内皮细胞、肺泡巨噬细胞、肺间质巨噬细胞、多彩核白细胞(PMN)等,这些细胞在PLA2的激活下,大量产生多种细胞因子TNFα能诱导PMN在组织聚集、粘附、释放IL-6和IL-8等炎症介质［5］。实验中抑酶肽组血清TNFα明显降低，休克组明显升高，表明抑肽酶通过降低TNFα等细胞因子的表达，减轻肺结构和功能损害。TNFα等细胞因子的表达又是PLA2调节的，PLA2的激活可使TNFα等细胞因子表达增强［6］，肺缺血-再灌注损伤期间PLA2能被迅速激活。在本实验中，抑酶肽组血清PLA2在T1时比休克组明显降低，而休克组血清PLA2较对照组明显升高，这一结果表明在肺缺血-再灌注损伤中休克组已有大量的PLA2激活，直接或间接造成肺细胞结构和功能损害。抑制PLA2的激活可减少TNFα的产生［7］。因此，降低PLA2活化和抑制TNFα产生或许是抑肽酶减轻组织损害的又一重要机制。
本实验研究表明，抑肽酶在肺缺血-再灌注损伤中的运用，可提高SOD的活性，减轻脂质过氧化反应，减少MDA的产生，同时还可抑制TNFα和PLA2的产生和释放，减轻炎症因子对肺组织的侵害。失血性休克早期持续小剂量运用抑酶肽可通过抑制氧自由基及一些促炎细胞因子的产生，是可以减轻休克再灌注时肺组织损伤。
【参考文献】
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作者单位：广东医学院第二附属医院，广东 湛江 524000.