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【摘要】 目的 探讨慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者血清肿瘤坏死因子α的变化及意义。 方法 ELISA法检测30例正常对照、31例慢性乙型肝炎患者和30例慢性重型乙型肝炎患者外周血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平，荧光定量PCR法检测血清HBV DNA并取对数作为复制水平的指标，总胆红素(TB)和凝血酶原时间(PT)的检测按照常规检测。均数间的比较采用Student-t检验：两组数据间的相关性分析采用线性相关分析： P<0．05为有统计学意义。 结果 自正常对照组到慢性乙型肝炎组及慢性重型乙型肝炎组外周血清TNF-α水平均依次升高，且各组间比较均具有显著性差异，慢性重型乙型肝炎组与慢性乙型肝炎组比较TB、PT显著升高，但血清HBVDNA对数值间无显著差异；外周血清TNF-α水平与TB及PT呈显著的正相关，但与血清HBVDNA对数值间无显著的相关性。 结论 TNF-α可以参与慢性乙型肝炎及慢性重型乙型肝炎的发病。
【关键词】 乙型肝炎 肿瘤坏死因子α 荧光定量PCR
Significance of elevated serum tumor necrosis factor α in patients with chronic and chronic severe hepatitis B patiens.
WEI Xiu-qing, WEN Zhuo-fu, ZHENG Feng-ping, et al.
(The Third Affiliated Hospital of Sun Yatsen Univsersity, Guangzhou 510630, Guangdong, P. R. China)
Abstract：Objective To study the changes and significance of serum tumor necrosis factor α (TNF-α) in the pathogenesis of chronic and chronic severe hepatitis B. Methods The levels of TNF-α in 30 healthy controls and 31 patients with chronic hepatitis B and another 30 patients with chronic severe hepatitis B were determined by ELISA. The levels of serum HBV DNA WAS determined by fluorescence PCR and presented as Ig (HBV DNA). The results were statistically analyzed. Results The levels of serum TNF-α in the controls and those with chronic hepatitis B as well as those with chronic severe hepatitis B were,in turn, increases gradually and significantly. The levels of TB, PT in those with chronic severe hepatitis B were significantly increased as compared with that of cases with chronic hepatitis B. The level of peripheral TNF-αwas positively correlated with that of levels of TB and PT. Bur there no correlation between the logarithmic values of serum HBVDNA was ovserved. Conclusion There TNF-αmay participate in the pathogenesis of chronic hepatitis B and chronic severe hepatitis B.
Key words：Hepatitis B; Tumor necrosis factors; FQ-PCR
乙型肝炎的发病机制非常复杂，与肝细胞内HBV数量无明显相关性，而主要取决于机体的免疫应答［1］。肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor α，TNF-α)是一种具有多种重要作用的细胞因子，它是否参与乙型肝炎的发病是一个值得探讨的问题，本文对此进行了初步的探讨。
1 资料和方法
1．1 临床资料 选取2005年1月～2005年12月于感染科住院的病例，慢性重型乙型肝炎患者30例，其中男27例，女3例，年龄25～66(44±12)岁；慢性乙型肝炎31例，其中，轻度3例，中度10例，重度18例，男25例，女6例，年龄27～57(39±9)岁。对慢性乙型肝炎的临床诊断根据2000年修订的病毒性肝炎防治方案中有关慢性病毒性肝炎的分度及慢性重型病毒性肝炎的临床诊断标准进行［2］。以上病例均为HBsAg及HBV DNA阳性，且排除有合并其它病毒、细菌等感染或其它重大疾病，亦无酗酒情况。健康自愿者对照30例，男25例，女5例，年龄25～68(42±11)岁，均为HBsAg及HBV DNA阴性，其余要求同病例组。
1．2 血清TNF-α检测 采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测，试剂为加拿大YES BIOTECH Laboratories LTD的Human TNF-α ELISA试剂盒。
1．3 血清HBV DNA检测 采用荧光定量PCR法检测，试剂盒为广州中山大学达安基因股份有限公司产品，敏感度为 1×103拷贝／ml，本研究纳入对象均高于此。以血清HBV DNA对数值［lg(HBV DNA)］记录数据，作为病毒复制的指标。
1．4 常规临床指标的检测 血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TB)、凝血酶原时间(PT)、胆碱脂酶、乙肝两对半等常规临床项目的检测均严格按照本院的正规要求操作、检测。
1．5 统计学分析 采用SPSS11．0统计软件进行分析，结果以均数±标准差表示。两组均数间的比较采用 Student-t检验;两组数据间的相关性分析采用线性相关分析；P<0．05为有统计学意义。
2 结果
2．1 血清TNF-α血清总胆红素、凝血酶原时间和血清HBV DNA水平测定 结果见表1。
表1 各组病例TLR2，TNFα，Lg(HBV DNA)，TB and PT水平（略）
NA，未检测；*P<0．05 VSnormal control；▲P<0．05 VS chronic hepatitis B。
2．2 外周血清TNF-α水平与TB、PT和HBV DNA对数值水平间的相关性 经线性相关分析研究发现，外周血清TNF-α水平与TB呈现显著的正相关，相关系数γ=0.826，P<0．05；与PT水平间呈现显著的正相关，相关系数γ=0．363，P<0．05；与血清 lg(HBV DNA)间无显著的相关性,相关系数γ=-0.126，P>0．05。
3 讨论
研究结果显示自正常对照组到慢性乙型肝炎组、慢性重型乙型肝炎组外周血清TNF-α水平均依次升高，且各组间比较均具有显著性差异；在慢性乙型肝炎组及慢性重型乙型肝炎组外周血清TNF-α水平和血清TB水平及PT间均呈现显著的正相关，但与血清lg(HBV DNA)间无显著的相关性。由于本研究所纳入的病例往往已经接受过降酶药物治疗，因而血清AST和ALT水平受到了干扰，不能准确的反应肝脏炎症程度，因而本研究未对外周血单核细胞 TLR2与AST和ALT水平进行相关性研究。
血清TB水平及PT时间是反映肝脏功能的常用指标，其水平越高，时间越长，肝脏功能越差，在慢性乙型肝炎组及慢性重型乙型肝炎组外周血清TNF-α水平和血清TB水平及PT间均呈现显著的正相关，表明血清TNF-α水平与肝功能水平密切相关，血清TNF-α水平升高能够间接反映肝功能的恶化。慢性乙型肝炎组与慢性重型乙型肝炎组比较血清lg(HBVDNA)无差异，说明慢性乙型肝炎的病情与HBV数量无明显相关性：血清TNF-α水平与血清lg(耶VDNA)间无显著的相关性，表明HBV本身可能不能直接影响血清TNF-α水平。TNF-α可以通过多种信号通路导致肝细胞的凋亡和坏死，因而它在病毒性肝炎的发病机理当中具有重要的作用［3］；在乙型肝炎TNF-α的水平与肝脏炎症程度和疾病的严重程度相关，TNF-α的过度升高与预后不良有关［4,5］。
总之，TNF-α可以参与慢性乙型肝炎及慢性重型乙型肝炎的发病。
【参考文献】
［1］ Ichiki Y, He XS, Shimoda S, et al. Tcell immunity in hepatitis B and hepatitis C virus infection: implications for autoimmunity［J］. Autoimmun Rev, 2005, 4(2):82～95.
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［4］ Wang JY, Wang XL, Liu P. Detection of serum TNF-alpha, IFN-beta, IL-6 and IL-8 in patients with hepatitis B［J］. World J Gastroenterol, 1999,5 (2) :38～40.
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作者单位：中山大学附属第三医院，广东 广州 510630.