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【摘要】 目的 探讨浅表淋巴结细针穿刺活检(FNAB)标本中端粒酶活性检测在浅表淋巴结转移癌诊断中的应用价值。 方法 在超声引导下穿刺抽取浅表淋巴结组织FNAB标本,分别进行细胞学病理检查和端粒酶活性检测，以术后石蜡病理切片结果为最终标准,对以上两者结果进行对照分析。 结果 在40例浅表淋巴结转移癌中,FNAB的正确诊断率为45%(18/40),端粒酶活性阳性率为77.5%(31/40),两者相比差异有显著性(P<0.05)，在22例浅表淋巴结转移癌被FNAB诊断为“可疑阳性”、“取材不够”及“淋巴结炎”者中17例显示端粒酶活性,阳性率为77.3%(17/22)，两者联合诊断率可提高至87.5%。 结论 端粒酶活性检测是FNAB很好的辅助诊断方法,两者联合应用可有效提高FNAB标本的阳性诊断率。
【关键词】 淋巴结转移癌 针吸 端粒酶
Detection of telomerase activity by needle aspiration biopsy in diagnosis of duperfial lymph node metastasis carcinoma.
ZHANG Yin-long, WANG Fei-hai, LI Ji, et al.
(Second Affiliated Hospital of Wenzhou Meidcal College, Wenzhou 325027, Zhejiang, P. R. China)
Abstract：Objective To investigate the value of detection of telomerase activity by fine needle aspiration biospy (FNBA) of superficial lymph node metastasis carcinomas. Methods The biospy of the of samples of superficial lymph node metastasis carcinomas with fine needle guided by B-us were performed and the telomerase activity was determined. The results were compared. Results Of the 40 cases of superficial lymph node metastasis carcinoma, the correct diagnostic rate of FNBA was 45％, while the positive rate of telomerase activity was 77.5％, the difference between the two examinations was significant （P<0.05）. In 22 FNBA samles diagnosed as “suspicious”, “idadequate” and “lymphadenitis”, expression of telomerase activity was observed in 17（77.3％）of the cases. The diagnostic rate of combination of the two methods was 87.5%. Conclusion The detection of telomerase activity is a good subscidiary method to FNBA. Combined detection of telomerase activify and FNBA can enhance the rate of correct diagnosis of superficial lymph node metastasis carcinomas in the FNBA samples.
Key words：Lymph node metastasis carcinoma; Needle; Telomerase
端粒酶是近年来受到国际医学生物学界高度重视的研究热点之一,研究表明,端粒酶是当今已知最具广谱和肿瘤特异性的一种肿瘤标志物［1］，它在肿瘤发生、诊断、治疗及预后判断等研究中具有重要地位。为了探讨淋巴结肿大病因，提高淋巴结肿大准确诊断水平，我们对浅表淋巴结转移癌细针穿刺标本中端粒酶活性进行了研究,旨在探讨端粒酶活性检测在浅表淋巴结转移癌中的临床意义。
1 材料与方法
1.1 标本来源 取自2003年8月以来我院外科住院和门诊恶性肿瘤患者40例,男21例,女19例,21～76岁，平均47.3岁；取同时期淋巴结良性病变20例作对照，男12例，女8例，20～66岁，平均40.3岁；两组之间性别、年龄具有可比性，无显著性差异。穿刺标本常规作细胞涂片（将吸取物于载玻片上涂匀，1：1乙醚酒精固定10min，每例作HE染色，显微镜观察有无肿瘤细胞及淋巴细胞浸润），将穿刺针管内残留的吸取物洗脱并注入装有0.5ml pbs液的EP管中，置于－20℃保存，标本不够时再行穿刺。
1.2 主要试剂及方法 TRAP-ezeTM kit 端粒酶活性试剂盒（Gene公司），阳性对照物为肿瘤细胞293细胞株（端粒酶试剂盒提供），提取液蛋白含量为1μg/μl，用银染定性法进行测定。端粒酶活性强度判断采用半定量方法：强阳性为提取液100倍稀释（0.01μg蛋白）仍能检测到酶活性；中度阳性为提取液10倍稀释（0.1μg蛋白）能检测到酶活性；弱阳性为提取液在1μg蛋白时才能检测到酶活性；阴性为任何浓度均检测不到酶活性。
1.3 细胞学诊断 采用HE染色对细针穿刺组织涂片进行检测。
1.4 统计学处理 用spss10.0统计软件进行有关率的χ2检验。
2 结果
40例浅表淋巴结转移癌者中，端粒酶活性阳性者31例，阴性9例，阳性率为77.5％；FNAB正确诊断者18例，其余诊断“可疑阳性”12例，“取材不够”5例及“淋巴结炎”7例，正确诊断率为45％，两者的比较差异有显著性（P< 0.05）。在22例浅表淋巴结转移癌被FNBA诊断为“可疑阳性”、“取材不够”及“淋巴结炎”中17例显示端粒酶活性，阳性率为77.3％（17/22）在9例端粒酶阴性患者中，FNBA阳性者4例，两者联合诊断率可达87.5％。在5例FNBA诊断“取材不够”者中，端粒酶活性阳性4例。在20例淋巴结炎者中，有2例端粒酶活性提示阳性，但此2例FNBA诊断为阴性，组织学检查均诊断为淋巴结炎。
3 讨论
端粒酶能以自身RNA为模版，在染色体末端合成端粒序列，维持端粒长度，端粒酶激活与细胞永生化关系密切。目前资料显示，端粒酶几乎在各种人类肿瘤中均有不同程度的表达，总的表达率在85％，可能是目前已知的最为光谱的恶性肿瘤分子标记物［2］。Sugino［3］等报道15例乳腺癌针吸标本，有10例端粒酶阳性，而29例乳腺良性病变针吸标本仅有3例为弱阳性。Kind［4］等已于1994年建立了高灵敏度的结合PCR技术的TE检测方法—端粒重复片段扩增法（Telomeric repeat amplification protocol assay TRAP）法，使得检测微量组织TE活性成为可能。如今已经在乳腺癌针吸穿刺标本、支气管脱落细胞、鼻咽癌组织、尿液、胸水及宫颈脱落细胞等标本中成功进行了端粒酶活性测定［5］。
FNBA是临床常用的诊断浅表淋巴结疾病的方法，但因取材太少，阳性率不高，临床应用受到一定的限制。本研究选择超声引导穿刺，可以提高穿刺标本的质量。利用FNBA标本进行诊断时，端粒酶活性检测优于细胞学检查。尤其是在22例浅表淋巴结转移癌经FNBA诊断为“可疑阳性”、“取材不够”及“淋巴结炎”时，而其中端粒酶活性检测阳性17例，阳性率为77.3％（17/22），两者联合诊断率可达87.5％，这说明端粒酶活性检测可有效弥补FNBA诊断的不足。
本研究表明浅表淋巴结转移癌细针穿刺标本中端粒酶活性检测具有重要的临床意义。
【参考文献】
［1］ Kin NM. Clinical implication of telomerase in cancer［J］.Eur J Cancer, 1997,33: 781～786.
［2］ 周春晓，陆士新，孙建衡. 端粒酶在肿瘤研究中的意义［J］. 中华肿瘤杂志，1999,21(3):235～236.
［3］ Sugino T, Yoshida K, Bolodeoku J,et al. Telomerase activity in human breast cancer and benign breast lesions: diagnostic application in clinical specimens， including fine needle aspirates［J］. Int J Cancer, 1996, 69: 301～306.
［4］ Kin NW, Piatysezek MA, Prowse KR, et al. Specific association of human telomerase activity with immortal cells and cancer［J］.Science, 1994, 266:2011～2015.
［5］ 陈小君,陈巧伦, 黄奕俊, 等. 鼻咽癌组织端粒酶活性的研究［J］.癌症,1998,17(5):328～330.
作者单位：温州医学院附属二院，浙江 温州 325027； 温州医学院附属一院，浙江 温州 325000.