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【摘要】 目的 为判定沉香茶对人体健康是否产生危害，特进行了安全性毒理学评价。 方法 采用急性毒性试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验、Ames试验和30d喂养试验的结果进行评价。 结果 海南沉香茶属无毒级物质，致突变试验结果为阴性，初步估计最大无作用剂量大于18.0g/kg体重，相当于人体推荐摄入量的100倍。 结论 根据试验结果，判定其为安全性保健食品。
【关键词】 沉香 急性毒性 微核 精子畸形 Ames试验 30d喂养试验
海南沉香茶是以沉香叶与沉香末为主要原料，并辅以枸杞子、罗汉果研制而成，具有降气温中、暖肾纳气、清肺润肠等保健作用［1］。为评价其食用安全性，我们对其进行了急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验和30d喂养试验［2］。
1 材料和方法
1.1 样品 海南沉香茶，为袋泡茶，内容物为棕褐色固形物，由海南琼中昌业实业有限公司提供，推荐摄入量为每次1～2袋，每天2～3次，每袋可反复冲泡3～4次，1.8g/袋，即每日10.8g/60kg体重。受试物的提取方法：称取样品20.0g，加80℃蒸馏水200ml浸泡30min，用4层纱布过滤，提取4次，将过滤液合并在80℃恒温水浴箱中浓缩至10ml。浓缩液1ml相当于2.0g样品。实验时用蒸馏水将浓缩液配制成所需浓度供小鼠急性经口毒性试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验、Ames试验、30d喂养试验用。
1.2 实验动物 昆明种小鼠，由湖南省农业大学动物科技学院实验动物养殖场提供；合格证号：SCXK（湘）2003-0003号。SD大鼠，由广东省医学实验动物中心提供；合格证号：SCXK（粤）2003-0002号。
1.3 小鼠急性经口毒性试验 按最大耐受剂量法，选昆明种小鼠雌雄各10只（18.0～22.0g），实验前禁食16h，不限制饮水。样品设20.0g/kg体重一个剂量组，灌胃容量为20ml/kg体重，受试物浓度为1 000mg/ml，灌胃一次。给药后观察1周，记录中毒表现及死亡情况，判定其最大耐受量（MTD），按毒性分级标准评价其急性毒性强弱。
1.4 遗传毒性试验
1.4.1 小鼠骨髓微核试验 选昆明种小鼠50只（25.5～30.0g），随机分为5组，雌雄各半。设4.5、9.0、18.0g/kg体重3个剂量组、溶剂对照组（蒸馏水）及阳性对照组（环磷酰胺40mg/kg体重）。灌胃给药2次(灌胃容量20ml/kg体重)，间隔24h，各剂量组浓度分别为230mg/ml、450mg/ml、900mg/ml，于末次给药后6h处死动物，取股骨常规制片、镜检，每鼠计数1 000个骨髓嗜多染红细胞（PCE），观察含微核的细胞数并统计微核率（‰）。
1.4.2 小鼠精子畸形试验 选昆明种雄性小鼠25只（29.0～35.0g）,随机分为5组，每组5只。剂量设计、给药方法及灌胃容量同骨髓微核试验，连续给药5d，于第35d处死动物，取两侧附睾按常规制片、镜检。每鼠计数1 000个精子，记录精子畸形数并统计畸形率（%）。
1.4.3 Ames试验 采用平板掺入法，选鼠伤寒沙门菌突变型菌株TA97 、TA98、TA100和TA102，经基因型鉴定合格后进行实验。活化系统为多氯联苯诱导的 SD大鼠肝S9混合液。阳性物：-S9者为9-芴酮（TA97 、TA98）、 叠氮钠 （TA100）、丝裂霉素C（TA102）；+S9者TA102为1,8-二羟基蒽醌，TA97 、TA98、TA100均为2-氨基芴。设8、40、200、1 000和5 000μg/皿5个剂量组，在加与不加S9混合液的条件下进行实验，每剂量3个平皿。同时设未处理对照组和阳性对照组，阴性结果重复1次。
1.5 30d喂养试验 选SD大鼠80只，其中雄性40只，体重为(104.8±6.2)g；雌性40只，体重为(100.7±8.1)g。将实验动物随机分为4组，每组20只，雌雄各半。设3个剂量组，分别为4.5、9.0和18.0g/kg体重（相当于人体推荐摄入量的25、50和100倍），另设溶剂对照组（蒸馏水）。灌胃给药，灌胃容量为10ml/kg体重，每日1次，各剂量组浓度分别为460mg/ml、900mg/ml、1 800mg/ml。各剂量组均给予普通饲料，饲料损耗率按5%折算。自由进食和饮水，每周称一次体重和二次饲料量，实验时间为30d，每天观察动物的一般状况、有无中毒表现和死亡并观察以下指标：①体重、总增重、总进食量、总食物利用率。②常规及生化指标:实验末期采尾血用MEK-6318K血液分析仪测定血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数及分类；实验结束断头取血，分离血清用ALIZE全自动生化分析仪测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白、白蛋白。③脏器系数:取肝脏、肾脏、脾脏和睾丸或卵巢称量，并计算脏体比值。④病理组织学检查:解剖动物进行大体观察，取肝、肾、胃、十二指肠、脾、睾丸或卵巢固定保存，常规病理制片后进行病理组织学检查。
1.6 实验数据的分析与处理 试验结果均采用SPSS软件包进行统计处理。
2 结果
2.1 小鼠急性经口毒性试验 实验期间动物行动灵活，反应敏捷，被毛整洁，目光有神，眼鼻口无分泌物，进食饮水正常，生长发育良好，均未见明显中毒反应、无一死亡。雌雄小鼠经口MTD均大于20.0g/kg体重，属无毒级。
2.2 遗传毒性试验
2.2.1 小鼠骨髓微核试验 由表1可见，经双侧t检验，各剂量组雌雄小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率与溶剂对照组比较，差别无统计学意义(P>0.05)；而阳性对照组微核率与溶剂对照组比较差别具有高度显著性(P<0.01)。表明海南沉香茶对小鼠骨髓微核嗜多染红细胞染色体未显示损伤作用，骨髓微核试验结果为阴性。
表1 海南沉香茶小鼠骨髓微核试验结果（略）
注：a表示平均每鼠1 000个嗜多染红细胞所含微核数±标准差，*表示与溶剂对照组比较P＜0.01。
2.2.2 小鼠精子畸形试验 由表2可见，经Wilcoxon秩和检验，各剂量组精子畸形率与溶剂对照组比较，差别无统计学意义(P>0.05)；而阳性对照组微核率与溶剂对照组比较差别具有高度显著性(P<0.01)。海南沉香茶小鼠精子畸形试验结果为阴性，表明其对小鼠体内生殖细胞无致突变作用。
表2 海南沉香茶小鼠精子畸形试验结果（略）
注：b表示平均每鼠1 000个精子数±标准差，*表示与溶剂对照组比较P＜0.01。
2.2.3 Ames试验 各剂量组的回变菌落数均未超过未处理对照组的2倍,而阳性对照组的回变菌落数均超过未处理对照组的2倍。表明该样品的Ames试验结果为阴性。
2.3 30d喂养试验
2.3.1 一般表现 实验期间各组动物被毛整洁、反应灵活，进食饮水正常，生长发育良好，未见明显中毒反应、无一死亡。
2.3.2 对大鼠体重、总增重、总进食量、总食物利用率的影响 经方差分析，各剂量组雌雄鼠始重、第1周、第2周、第3周和第4周体重与对照组比较差别无显著性（P>0.05），雌雄鼠各剂量组体重总增重、总进食量和总食物利用率与对照组比较差别无显著性（P>0.05），且不同时间段动物的体重、总增重、总进食量和总食用利用率均在本实验室的正常参考值范围之内。表明该样品对大鼠体重、食物利用率无明显影响。
2.3.3 血常规 各剂量组雌雄大鼠血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数及其分类与对照组比较差别无显著性（P>0.05），表明该样品对大鼠血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数及其分类等无明显影响。
2.3.4 血液生化学指标 各剂量组雌雄大鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白和白蛋白等指标与对照组比较差别无显著性（P>0.05），表明该样品对大鼠生化指标均无明显影响。
2.3.5 对大鼠脏体比的影响 各剂量组雌雄鼠肝体比、肾体比、脾体比和睾丸体比与对照组比较差别无显著性（P>0.05）。表明该样品对大鼠脏体比无明显影响。
2.3.6 病理组织学检查 各剂量组动物解剖大体观察未见有异常变化，因此仅选高剂量组及对照组做病理组织学检查。镜下高剂量组及对照组个别动物肝脏出现空泡变、瘀血，其余肝脏浆膜完整，中央静脉、肝小叶、门管区结构清楚，肝细胞索围绕中央静脉呈放射状排列；肾脏被膜完整，皮质肾小球、肾小囊结构清楚，肾小管排列规则；胃肠浆膜、肌层、粘膜、粘膜下层结构清楚；脾被膜完整，红髓、白髓结构清楚；睾丸白膜完整，可见各级生精细胞；卵巢白膜完整，可见各级卵泡。说明样品对大鼠病理组织学无明显影响。
3 讨论
安全性毒理学评价的目的是通过快速、灵敏、经济、特异的方法对外来化合物的安全性作出评价，通常采用组合试验对受试物进行检测。急性毒性试验可了解受试物的毒性强度、性质和可能的靶器官。海南沉香茶急性毒性试验显示给药后实验动物无明显中毒反应，根据急性毒性分级标准，其属无毒级。遗传毒性试验中我们根据不同的遗传终点，按原核细胞与真核细胞、生殖细胞与体细胞、体内与体外试验相结合的原则，选择了反映基因突变的Ames试验，反映哺乳类动物体细胞染色体和生殖细胞损伤作用的小鼠骨髓微核试验和小鼠精子畸形试验。在对海南沉香茶进行检测中发现上述三项试验结果均为阴性，提示该样品对基因、哺乳类动物体细胞染色体及生殖细胞无损伤作用。30d喂养试验结果表明海南沉香茶无明显毒性作用，初步估计其最大无作用剂量大于18.0g/kg体重。综上所述，海南沉香茶属安全性保健食品。
【参考文献】
［1］ 江苏新医学院.中药大辞典,上下册［M］.第1版.上海:上海科学技术出版社,1985,5.
［2］ 中华人民共和国卫生部.食品安全性毒理学评价程序和方法GB15193.1～15193［S］.21-2003.
作者单位：海南省疾病预防控制中心,海南 海口 570203.