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【摘要】 目的 初步了解广东省水产品中香港海鸥型菌（Laribacter hongkongensis）污染及分离株的耐药情况。 方法 采用改良头孢哌酮麦康凯琼脂（CMA）作为分离培养基，以API 20NE鉴定系统鉴定结果作为确认依据；采用K-B法进行药物敏感试验。 结果 222份水产样本检出15株目标菌，阳性率6.76%。其中14株分离自草鱼肠脏，1株来自鲤鱼肠脏。分离株及香港海鸥型菌模式株HKU1的药敏结果，对β－内酰胺类抗生素如氨苄西林、头孢噻酚、头孢他啶、头孢曲松等均出现耐药株，未见耐庆大霉素和阿米卡星株。 结论 结果表明香港海鸥型菌在广东省的草鱼污染率最高，为17.3%（14/81），分离株对β－内酰胺类抗生素耐药情况较严重。
【关键词】 香港海鸥型菌 水产品 草鱼 耐药性
Survey of contamination of aquatic products with Laribacter hongkongensis and drug resistance in Guangdong Province.
SONG Man-dan, YAN Ji-wen, ZHU Hai-ming, et al.
（Guangdong Provincial Center for Disease Control and Prevention, Guangzhou 510300, Guangdong, P. R. China）
Abstract：Objective To understand the contamination of aquatic product by Laribacter hongkongensis （LH）in Guangdong Province and the sensitivity of the isolates to antibiotics. Methods Cefoperazone MacConkey （CMA） agar was used as selective medium the isolates were confirmed bases on API 20NE. K-B methods was used in drug sensitivity tests. Results There 15 isolates were obtained from 222 aquatic product samples and 14 isolates were from grass fish, the rest was from carp fish. All the isolates and LH type （HKU1） were resistant to 19 β－lactam antibiotics, such as AMP, KF CXM,CAZ,CRO, but they were sensitive to CN and AK. Conclusion The isolation rate of Laribacter hongkongensis in grass fish is as high as 17.3% （14/81）. The resistance of the isolates to β－lactam antibiotics is serious than expected.
Key words：Laribacter hongkongensis; Aquatic product; Grass fish; Antibiotics; Drug resistance
香港海鸥型菌（Laribacter hongkongensis,gen.nov., sp. nov.）于2001年在香港1名54岁肝硬化病人的血液和胸腔脓汁中首先分离得，属于新发现的菌种［1］。目前发现香港海鸥菌与社区性肠胃炎和旅行者腹泻相关［1～4］，该菌在香港、中国大陆、瑞士、日本、非洲等地均已分离出［1］。广东省尚无该菌在水产品中的污染及其耐药情况调查资料，为应对食源性疾病突发事件和水产品安全食用问题做好技术储备，我们按照中国疾病预防控制中心下发的《2005年全国水产品香港海鸥型菌污染状况调查方案》的指引内容，分别在广州、佛山、惠州、肇庆地区共34间食店、大型超市和菜市场采集不同鱼种的全鱼进行香港海鸥型菌污染状况及耐药性调查检测，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 样品的采集 调查样品采集于本省的广州市、佛山市、惠州市和肇庆市的16个零售市场、6个超市和12个饭店，共采集样品222份，其中草鱼81份，鲤鱼41份，海水鱼（青斑、黄鱼、海鲈等）46份和其它淡水鱼（鲫鱼、大头鱼、鲈鱼等）54份。所有样品采集后立即送实验室检测。
1. 2 试剂与培养基 改良头孢哌酮麦康凯琼脂（CMA）、三糖铁、MH药敏试验琼脂均由北京陆桥技术责任有限公司提供，本中心培养基室配制;API 20E、氧化酶试剂由法国生物梅里埃公司提供;K-B法用药物敏感纸片由英国Oxiod公司提供;香港海鸥型菌HKU1模式株由中山大学生命科学学院提供。
1. 3 检验及鉴定方法 无菌剪开检样腹腔，剪断其中肠和后肠，用棉拭子反复涂搽内肠壁后，直接涂布接种于CMA平板，置37℃温箱培养48h。香港海鸥菌在CMA平板上为浅灰色、半透明圆形、光滑菌落，直径1～1.5mm,不利用糖类产酸，菌落湿润略粘，不易挑取。将可疑菌落穿刺接种三糖铁琼脂于37℃培养24h, 香港海鸥菌的菌苔薄而半透明，培养基颜色无明显变化。革兰氏染色镜检为革兰氏阴性、无芽孢、无荚膜、形状呈“海鸥展翅”状或螺旋杆状。对菌落特征明显、镜检形态可疑的菌株，进行精氨酸双水解酶、脲酶、氧化酶试验和过氧化氢试验，上述试验均为阳性的菌株再进行API 20NE生化试验确认。香港海鸥菌在API 20NE上的生化表现见表1。
表1 香港海鸥菌在API 20NE上的生化表现（略）
注：“+”为阳性；“-”为阴性。
1.4 药敏试验 采用K-B纸片法,按照美国临床实验标准化委员会（NCCLS）相关文件判定结果。
2 结果
2.1 香港海鸥型菌的检出结果 在222份样品中，有15份分离出香港海鸥型菌,其中14份是草鱼，1份是鲤鱼。检出情况见表2。
表2 222份水产品中香港海鸥型菌的检出情况（略）
2.2 香港海鸥型菌的药敏试验结果 15株香港海鸥型菌分离株及HKU1模式株对15种抗生素的药敏试验结果见表3。
表3 香港海鸥型菌HKU1模式株及分离株的药敏试验结果（略）
注:表中括弧外数字为株数,“R”为耐药，“I”为中介，“S”表示敏感。
3 讨论
本次调查结果表明，在广东省的淡水水产品中存在香港海鸥型菌污染。其中草鱼中的检出率最高，为17.3%（14/81），鲤鱼为2.4%（1/41），在海水鱼中未检出香港海鸥型菌，与香港的报道结果基本一致。提示该菌主要污染淡水鱼类，尤其是草鱼和鲤鱼。广东省珠三角地区历来有吃“鱼生”和鱼肠的习惯，虽然此次调查均为活全鱼，未对加工过的生鱼、鱼肠进行调查，但有研究者推测香港海鸥型菌引起人群腹泻的途径是通过食入未经煮熟的水产品或在加工过程中交叉污染食物而引起的感染，由于香港海鸥型菌通常依附在鱼类的肠道，因此食用鱼肠的人群更容易受到感染，因此香港海鸥型菌有引发食源性疾病的潜在危险。目前国内还未制定生吃水产品的卫生标准，因此应尽快制定出相关卫生标准。对阳性标本的空间分布情况进行分析显示，16份来自超市的检样中分离出4株、127份来自菜市场的检样中分离出7株、77份来自食店的检样中分离出4株香港海鸥菌。值得注意的是，肇庆地区草鱼中香港海鸥菌的检出率为24％；广州地区的分离株均为采自超市的检样；而在广州某超市同一养殖池的3份草鱼中均检出香港海鸥型菌，提示香港海鸥型菌通过污染养殖水并在不同载体中定植的可能性；而肇庆某菜市场检出3株香港海鸥型菌的样本为来自不同的鱼档，因此亦存在多个独立的鱼档被同一香港海鸥型菌污染的可能性，需要利用流行病学调查结合实验室分子分型PFGE等技术进行验证［2,5］。目前，发展中国家抗生素滥用情况十分普遍，抗生素作为促生长剂和动物疾病防治被广泛加于动物饲料中，在抗生素选择的压力下，可能导致食源性细菌耐药性增加。我们的药敏试验结果与Lau［5］等结论基本一致，水产分离株对β－内酰胺类抗生素中的氨苄西林、头孢噻酚、头孢他啶、头孢曲松均出现耐药，且有较高的耐药率，水产分离株与临床分离株的耐药情况接近，所有分离株对万古霉素、克林霉素、甲硝唑均耐药。由于β－内酰胺酶的产生是致革兰阴性病原菌耐药的突出问题［6］，而香港海鸥型菌对β－内酰胺类抗生素耐药机制尚有待进行深入研究［7］。
【参考文献】
［1］ Kwok-Yung Yuen,Patrick C. Y. Woo, Jade L. L. TENG, et al. Laribacter hongkongensis gen. nov., sp. nov., a Novel Gram-Negative Bacterium Isolated from a Cirrhotic Patient with Bateremia and Empyema［J］. Journal of clinical microbiology, Dec. 2001,39（12）:4227～4232.
［2］ Jade L. L. Teng, Patrick C. Y. Woo, Shirley S. L. Ma， et al. Ecoepidemiology of Laribacter hongkongensis, a Novel Bacterium Associated with Gastroenteritis［J］. Journal of clinical microbiology, Feb. 2005, 43（2）:919～922.
［3］ 岑剑伟,李来好,郝淑贤,等.香港海鸥型菌（Laribacter hongkongensis）的鉴定方法研究现状［J］. 中国食品卫生杂志, 2005,17（4）：341～343.
［4］ Patrick C.Y. Woo, Susanna K.P. Lau, Jade L.L. Teng, et al. Current status and future directions for Laribacter hongkongensis, a novel bacterium associated with gastroenteritis and traveller’s diarrhea［J］. Current Opinion in Infectious Diseases, 2005, 18:413～419.
［5］ Susanna K. P. Lau, Patrick C. Y. Woo, Wai-ting Hui, et al. Use of Cefoperazone MacConkey Agar for Selective Isolation of Laribacter hongkongensis［J］. Journal of clinical microbiology, Oct. 2003,41（10）:4839～4841.
［6］ 于守氵凡.病原菌对β－内酰胺类抗生素的耐药性［J］.国外医药抗生素分册,2000,21（1）:33～34.
［7］ Susanna K.P.Lau, Pak-leung Ho, Maria W.S.Li ,et al. Cloning and Characterization of Chromosomal Class C β-Lactamase and Its Regulatory Cene in Laribacter hongkongensis［J］. Antimicrobial agents and chemotherapy, May 2005,49（5）:1957～1964
作者单位：广东省疾病预防控制中心微生物检验所，广东 广州 510300.