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【摘要】 目的 研究加味小柴胡汤对酒精所致肝损伤的保护作用。 方法 以酒精致肝损伤动物为模型，观察小鼠丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）及肝组织的病理学检查，探讨加味小柴胡汤保护肝损伤的作用和机理。 结果 加味小柴胡汤能降低小鼠MDA，升高GSH水平，改善肝组织病变。 结论 加味小柴胡汤对酒精所致肝损伤有明显的保护作用，其机制可能与抗氧化及改善肝组织病变有关。
【关键词】 加味小柴胡汤 酒精 肝损伤 机制
Protective effect of Minor Radix Bupleui decoction on hepatic injury caused by alcohol.
XIE Bin, YU Da-jun, YAN Xiao-jun.
（Jiangxi Traditional Chinese Medicine College, Nanchang 330006, Jiangxi, P. R. China）
Abstract：Objective To observe the protective effect of Minor Radix Bupleuri Decoction on hepatic injury due to alcohol. Methods Hepatic injury animal model was established, pathological examination of MDA，GSH,liver histopathology of mice was conducted and the protective effect of modified minor Radix Bupleuri Decoction on hepatic injury was analyzed. Results The modified minor Radix Bupleuri decoction could reduce the level of MDA and enhance the level of GSH, ameliorate pathological changes of hepatic tissue. Conclusion Modified minor Radix Bupleuri decoction can protect the animal from hepatic injury due to alcohol. This mechanism might associated with antioxidation and improving the pathological changes of hepatic tissue.
Key words：Modified Minor Radix Bupleuri decoction；Alcohol；Hepatic injury；Mechanism
小柴胡汤属中医和解剂，动物实验研究已证实其对实验性肝损伤的保护作用，与祖国医学认为它具有“调肝散邪”的提法相符［1］。鉴于肝病中脾虚、阴虚及瘀血是常见的病理改变［2～4］,故在原方基础上加入茯苓、白术、白芍、当归、丹参等健脾、养阴及活血中药构成加味小柴胡汤，并用于酒精所致小鼠肝损伤模型，观察加味小柴胡汤对小鼠肝损伤的保护作用，并探讨其作用机制。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 NIH小鼠50只，体重20～22g，雌雄各半，购自广东省实验动物中心。合格证号：SCXK（粤）2003-0002粤监证字2005A011。
1.1.2 药物的准备 加味小柴胡汤由柴胡15g、人参6g、炙甘草6g、黄芩10g、半夏10g、生姜9g、大枣9g、茯苓15g、白术10g、白芍10g、当归10g、丹参10g组成，药材均购自广州中医药大学第一附属医院药房, 先加蒸馏水浸泡40min，一煎加药材量的8倍水，沸腾后煎40min，二煎加药材量的6倍水，沸腾后煎30min，过滤，两煎所得滤液混合后干燥浓缩至30ml，-20℃保存备用。
1.1.3 实验试剂 MDA检测试剂盒：南京建成生物工程研究所提供，批号：20051026；GSH检测试剂盒：南京建成生物工程研究所提供，批号：20050930。
1.2 实验方法
1.2.1 动物处理 小鼠50只随机分五组，每组10只，分别为正常对照组、模型组、加味小柴胡汤大剂量组、加味小柴胡汤中剂量组、加味小柴胡汤小剂量组。治疗组按40、20、10g/kg/d剂量，0.2ml/只经口灌胃，正常组、模型组以等体积生理盐水灌胃，连续30d。末次经口灌胃给药20min后，正常组给予生理盐水，其余各组小鼠均经口一次给予乙醇6.5g/kg,建立急性酒精性肝损伤模型。16h后剖杀小鼠,摘眼球取血,分离血清。小鼠处死后, 取肝组织中叶10%甲醛溶液固定,HE染色,光镜下观察病理变化。
1.2.2 血清MDA、GSH检测按试剂盒说明操作。
1.2.3 统计学方法 结果以均数±标准误（x±s）表示，用spss10.0软件分析。
2 结果
2.1 加味小柴胡汤对酒精致肝损伤小鼠血清中MDA、GSH含量的影响（见表1）。
表1 加味小柴胡汤对MDA、GSH含量的影响（略）
Table 1 Effect of MDA,GSH treated by modified Minor Radix Bupleuri Decoction
注:与正常组比较, P<0.01；与模型组比较,#P<0.01。
2.2 肝脏病理组织学观察（见图1） 光镜下显示，正常组肝小叶结构清晰，肝细胞索排列整齐，呈放射状，肝窦正常，胞核结构清晰。肝细胞、内皮细胞、肝小叶及血管形态或结构均正常。模型组可见典型的病理改变，病理改变以肝细胞脂肪变性为主,肝细胞肿胀，肝小叶界限不清，肝细胞索紊乱，肝窦变窄，肝细胞出现散在和片状气球样变，可见点状坏死和炎细胞浸润；肝细胞广泛浊肿，胞浆、胞核淡染，胞浆内出现弥漫脂滴，胞核模糊不清，肝细胞广泛的点状坏死，炎性细胞浸润明显。加味小柴胡汤大、中剂量组肝细胞基本正常，肝细胞索排列整齐，肝窦基本正常；肝细胞浊肿较轻，炎细胞浸润明显减轻，点状坏死较少；中央静脉周围部分肝细胞基本正常，周边肝细胞仍处于浊肿状态，个别肝细胞处于气球样变。加味小柴胡汤小剂量组肝小叶结构不甚清晰，炎细胞浸润和点状坏死，肝细胞胞浆内可见广泛浊肿和脂肪变，汇管区有大量炎细胞浸润和肝细胞坏死。
图1 各组肝组织病理检查结果比较（HE,×400）（略）
3 讨论
近十年来，饮酒过量已成为我国一个严重的公共卫生问题，肝脏作为酒精代谢的主要器官，受害最为常见，由酒精引起的肝脏损伤，统称为酒精性肝病（ALD ）。据统计，我国酒民中酒精性肝损伤（酒精肝、脂肪肝、肝硬化等）的发病率在20%左右，另外曾有资料报道食道癌、肝癌发病率的升高似乎也与饮酒有直接相关性［5］。因此寻找有效的解酒药物受到许多学者的关注。饮酒后，吸收入体内的乙醇95%在肝内代谢，酒精摄入导致脂质过氧化增加，主要是由于活性氧形成增加和抗氧化物的减少。由于活性氧积聚，使肝组织的抗氧化物质消耗增加，GSH水平下降。同时乙醛本身能与GSH的巯基以及抗氧化酶蛋白结合，使GSH水平下降，机体内源性抗氧化能力减弱，难以清除过多的自由基。当生成的活性氧量超过了超氧化物歧化酶或GSH等抗氧化因子的清除能力时，肝细胞膜脂质过氧化反应导致肝细胞损伤。MDA是脂质过氧化反应的终产物，它既能反映人体内氧化反应，也能作为人体损伤的损害因子，因而测定MDA的量常常反映机体脂质过氧化的程度［6］。本实验结果表明，摄入酒精后小鼠血清中MDA明显增加，GSH含量明显降低，而加味小柴胡汤对酒精性损伤有明显的保护作用，能显著降低MDA，升高GSH，具有抗脂质过氧化的能力，肝组织损伤程度减轻，其机制与抗氧化特性密切相关，它可能不仅是一个氧自由基的清除剂，还能够抑制氧自由基的产生，并且能有效地改善小鼠酒精性肝损伤的病理变化。
【参考文献】
［1］ 黄正良.小柴胡汤的药理研究［J］.中成药,1984,4（4）:30.
［2］ 金实,周珉.病毒性肝炎中医证治［M］.北京:人民卫生出版社,2001,91.
［3］ 连粤湘,龙晓英,吴婉芬,等.双草退黄冲剂1号治疗急性黄疸型肝炎深度黄疸的临床与实验研究［J］.中国中西医结合杂志,2001,21（9）:649.
［4］ 孙江桥,刘松林.肝泰灵合剂防治急性肝损伤的药理研究［J］.实用中医药杂志,2001,17（9）:4.
［5］ Chedid A, Mendenhall C L,Gardside P,et al. Prognostic factors in alcoholic liver disease［J］. Am J Gastroenterol,1991,82（3）:210～219.
［6］ 杨成峰,陈学敏,刘军,等.酒精对大鼠肝脏脂质过氧化的影响［J］.现代预防医学,1996,23（3）:141～143.
作者单位：江西中医学院, 江西 南昌 330006.