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【摘要】 目的 探讨沙眼衣原体(CT)感染输卵管性不孕(TFI)患者输卵管液中γ-干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6、8(IL-6、IL-8)的水平及其意义。 方法 用酶联免疫吸附试验法测定42例CT感染输卵管性不孕(TFI组) 、35 例已生育输卵管正常妇女(对照组) 输卵管液中IFN-γ、TNF-α和IL-6 、IL-8的水平。 结果 实验组输卵管液中IFN–γ、TNF-α、IL-6、IL-8的含量分别为(228±50)ng/L、(170±48)ng/L、(693±482)ng/L、(781±395)ng/L,均明显高于对照组(190±60)ng/L、(132±35)ng/L、(218±150)ng/L、(224±89)ng/L (P均< 0.05) 。 结论 生殖道CT感染的输卵管性不孕可能与IFN–γ、TNF-α、IL-6、IL-8等多种因素参与的免疫反应有关。
【关键词】 沙眼衣原体 输卵管疾病 不孕 γ-干扰 肿瘤坏死因子α 白细胞介素6 白细胞介素8
Determination of cytokines levels of the tubal fluids in infertility patients due to Chlamydia Trachomatis infection.
ZHANG Qun-feng， LUO Zhi-gang， HUANG Yu-Liang.
(Second Affiliated Hospital of Nanhua University, Hengyang, 421001, Hunan, P. R. China)
Abstract：Objective To determine the levels of interferon（IFN-γ）、tumor necrosis factor-alpha (TNF-α)、interleukin-6 (IL-6) and interleukin-8(IL-8) in tubal fluids of tubal factor infertile (TFI) women due to Chlamydia trachomatis (CT) infection and its implication. Methods Forty-two TFI women with CT infection (group TFI) and thirty-five fertile women with normal tubes without CT infection (group control) were enrolled for study. Levels of IFN-γ、TNF-α、IL-6 and IL-8 in tubal fluids were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Results The mean values of IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-8 were (228＋50)ng/L、(170±48)ng/L、(693±482)ng/L、(781±395)ng/L respectively in group TFI, all higher than those in infertile group control (P<0.05). Conclusion Tubal factor infertile (TFI) caused by chlamydia trachomatis (CT) infection connects with the immune reaction which is associated with multi-factor participated. including IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-8.
Key words：Chlamydia trachomatis; Fallopian tube diseases; Infertility; IFN-γ; TNF-α;IL-6; IL-8
沙眼衣原体(CT)感染是近年来主要的性传播疾病之一，与输卵管性不孕密切相关。有研究显示，不孕妇女生殖道沙眼衣原体感染约为24～31%, 输卵管梗阻局部CT感染高达75%～80%［1］。CT引起的输卵管损伤的机制目前主要偏向于免疫病理损伤，并认为与干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α (TNF-α)和白细胞介素有关。本研究通过检测输卵管液中干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6，8(IL-6、IL-8)的水平,探讨上述细胞因子在沙眼衣原体感染导致输卵管损伤中的作用。
1 资料与方法
1.1 研究对象 2006年2月～2007年7月在南华大学附属第二医院妇产科经手术和病理检查确诊为输卵管性不孕且宫颈分泌物CT-DNA阳性患者42例,平均年龄为32.5岁。同期选择宫颈分泌物CT-DNA阴性且行输卵管结扎术的已生育妇女35例为对照组,平均年龄36.2 岁。
1.2 材料与标本采集
1.2.1 材料 γ-干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)ELISA试剂盒购自深圳晶美生物工程公司。
1.2.2 标本采集及保存 输卵管液采用国产定量滤纸(2.5mm×0.6mm)取输卵管液。吸液量为(23.2±0.3)μl,此滤纸片血清蛋白回收率为99.2%～101.8%［2］。术中分别将3张滤纸片置入输卵管腔中浸透,然后放入1.5ml EP管中,加入800μl生理盐水。所有标本均作好记录,冻存在-70℃待测。
1.3 实验方法 输卵管液IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-8的测定采用ELISA 法,分别取各稀释度的标准品23.23μl加入800μl生理盐水中,与待测标本一起,按试剂盒说明书操作。
1.4 统计学方法 用SPSS12.0统计软件进行统计分析，数据用(x±s)表示，两组间比较采用t检验。P<0.05认为差异有显著性。
2 结果
输卵管液中IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-8的检测结果见表1。实验组IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-8水平明显高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。
3 讨论
CT感染与输卵管性不孕密切相关,但致病机制尚不完全清楚，目前主要偏向于免疫病理损伤。本研究结果显示CT 相关性不孕患者输卵管液中的IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-8水平明显高于对照组(P均<0.05),提示细胞因子在CT感染输卵管性不孕的发病机制中起重要作用。生殖道感染沙眼衣原体后IFN-γmRNA及IFN-γ均升高，并伴有上生殖道的损伤和纤维化［3］，机制可能是IFN-γ抑制沙眼衣原体增殖，激发免疫反应引起组织损伤。Morrison RP研究显示，不同浓度的IFN-γ可以抑制被感染宿主细胞的凋亡，使沙眼衣原体逃逸宿主的免疫清除作用，在宿主细胞内长期存在［4］。
表1 沙眼衣原体感染输卵管性不孕输卵管液细胞因子含量的比较（略）
TNF-α是一种主要由激活的巨细胞产生的具有多种生物学活性的细胞因子，CT 感染时输卵管上皮细胞首先释放TNF-α,再激活局部单核、巨噬细胞产生更多的TNF-α。Manimtim等研究发现，TNF-α以剂量依赖方式损伤输卵管粘膜细胞［5］。机制可能为TNF-α的细胞毒作用及诱导炎性细胞释放毒性物质，刺激成纤维细胞增生，促进胶原酶释放等作用参与组织损伤过程。Jendro MC等研究表明，被衣原体感染的巨噬细胞可以通过细胞间接触或者体液因子来诱导T细胞的凋亡，从而逃逸T细胞的杀伤作用，有利于沙眼衣原体在细胞内生存关建立持续性感染［6］。
IL-6是一种具有广泛生物学效应的细胞因子，具有双向免疫调节作用，也是机体炎症反应的重要介质。但IL-6在CT感染中所起的作用仍未明确且有争议。有报道显示，IL-6水平与沙眼衣原体的亚临床感染和持续性感染状态密切相关［7］。Van Voorhis等在猴沙眼衣原体感染输卵管炎模型中发现，炎症损伤的输卵管组织中IL-6表达增加，促进炎症损伤和纤维化，导致输卵管的慢性损伤［8］。
IL-8是中性、噬碱性细胞、T细胞的趋化因子，并能激活它们参与局部炎症和免疫反应。IL-8是沙眼衣原体感染后机体免疫应答的重要炎症介质，参与了感染后机体的病理、生理反应，并且可能与沙眼衣原体突破细胞屏障并在细胞内长期繁殖有密切关系。
本研究结果显示CT感染输卵管性不孕患者输卵管液中的IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-8水平均升高，说明生殖道CT感染导致的输卵管性不孕可能与IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-8等多种因素参与的免疫反应有关。CT感染能刺激单核细胞、巨噬细胞和内皮细胞分泌IL-6、IL-8和TNF-α,继而活化T细胞,产生IFN-γ和TNF-α,进一步诱导、IL-6、IL-8合成。它们相互作用,相互促进,从而引起输卵管的损伤，导致CT感染输卵管性不孕症的发生。
【参考文献】
［1］ Shibahara H, Takamizawa S, Hirano Y, et al. Relationships between Chlamydia trachomatis antibody titers and tubal pathology assessed using transvaginal hydrolaparoscopy in infertile women［J］. Am J Reprod Immunol,2003,50(1):7212.
［2］ 苏琼,张莉,王文达. 纸片血清标本检测乙型肝炎病毒标志物及丙型肝炎抗体的应用［J］. 临床肝胆病杂志,1998,11:228～229.
［3］ Manimtim WM,Hasday JD,Hester L, et al. Ureaplasma urelyticum modulates endotoxin-induced cytokine release by human monocytes derived from preterm and term new borns and adults［J］.Infect Immun,2001,69(6):3906.
［4］ Jendro MC, Fingerle F, Deutsch T, et al. Chlamydia trachomatis-infected macrophages induce apoptosis of activated T cells by secretion of tumor necrosis factor-alpha in vitro［J］.Med Microbiol Immunol (Berl),2004,193:45～52.
［5］ Reddy BS, Ratogi S, DasＢ，et al.Cytokine expression pattern in the geninal tract of Chlamydia trachomatis plsitive infertile women-implication for T-cell reponses［J］.clin Exp Immunol,2004,137(3):552～558.
［6］ Morrison RP. Differential sensitivities of Chiamydia trachomatis strains to inhibitory effects of gamma interferon［J］. Infect Immun,2000,68:6038～6040.
［7］ 李海燕，粱占光.沙眼衣原体感染输卵管不孕患者输卵管液中肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的测定［J］.中华妇产科杂志，2000,35（7）：411.
［8］ Li Haiyan.Mechanism of sterility caused by Chlamydia trachomatis Infect oviduct［J］.Foreign Medical Sciences-Family Planning Fascicle,2000,19,(4):226.
作者单位：南华大学附二医院,湖南 衡阳 421001.