HPLC法测定头孢丙烯颗粒的有关物质

【摘要】  目的 采用反相高效液相色谱法测定头孢丙烯颗粒中的有关物质。 方法 采用反相高效液相色谱法，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，以0.1mol·L-1磷酸二氢铵溶液（pH值为4.4）—乙腈(9:1)为流动相，流速为1.0ml·min-1，检测波长为280nm。 结果 头孢丙烯与其有关物质能完全分离。 结论 该方法简便、准确、灵敏度高，可用于头孢丙烯颗粒有关物质的测定。

【关键词】  色谱法 液相 头孢丙烯 有关物质

　　头孢丙烯(cefprozil)属第二代高效、低毒、耐酶口服头孢菌素类抗生素，活性成分由头孢丙烯顺式和反式2种异构体组成，其抗菌活性略高于头孢氨苄、头孢拉定，与头孢克洛、头孢呋辛相近。临床用于敏感菌所致的轻、中度感染，包括上、下呼吸道感染，以及皮肤和皮肤软组织感染［1，2］。本文用HPLC法测定了头孢丙烯颗粒的有关物质，同时进行了方法学研究，结果表明本法简便、准确、灵敏度高，适用于头孢丙烯颗粒的质量控制。

　　1  材料与方法

　　1.1  仪器与试药  LC2010CHT 高效液相色谱仪(日本岛津公司)；头孢丙烯对照品海南先锋制药有限公司提供，批号040903；头孢丙烯颗粒样品由海南先锋制药有限公司提供，批号20051101，规格0.125g；乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。

　　1.2  方法  按HPLC方法对方法中的各种色谱条件进行考察。

　　2  结果

　　2.1  溶液的配制  精密取本品适量加流动相溶解，并稀释制成0.75mg·ml-1的溶液，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密取供试品溶液1.0ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

　　2.2  色谱条件的选择   选择以大连依利特十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)；流动相：0.1mol·L-1磷酸二氢铵溶液（pH值为4.4）—乙腈(9:1)；流速：1.0ml·min-1；检测波长：280nm；进样量:20μl；柱温:35℃。

　　2.3  专属性试验

　　2.3.1  分别取供试品溶液和对照液按上述色谱条件进样，记录色谱图，结果见图1。溶剂对测定无干扰，各峰之间均达基线分离，相邻杂质峰与主峰的分离度均大于1.5，理论塔板数以头孢丙烯顺式异构体计大于2 500。

　　2.3.2  酸破坏试验  精密取本品适量（约相当于头孢丙烯75mg）置50ml量瓶中，加流动相溶解，稀释至刻度，摇匀。取溶液5ml置10ml量瓶中，加0.1 mol·L-1的盐酸溶液1ml，100℃水浴加热26min,加氢氧化钠溶液中和至中性后，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取滤液按上述色谱条件进样,记录色谱图。

　　图1  头孢丙烯颗粒有关物质色谱图（略）

　　2.3.3  碱破坏试验  精密取本品适量（约相当于头孢丙烯75mg）置50ml量瓶中，加流动相溶解，稀释至刻度，摇匀。取溶液5ml置10ml量瓶中，加0.1 mol·L-1的氢氧化钠溶液1ml，100℃水浴加热7min,加盐酸溶液中和至中性后，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取滤液按上述色谱条件进样,记录色谱图。

　　2.3.4  高温破坏试验  精密取本品适量（约相当于头孢丙烯75mg）置50ml量瓶中，加流动相溶解，稀释至刻度，摇匀。取溶液5ml置10ml量瓶中，加流动相适量，100℃水浴加热20min,放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取滤液按上述色谱条件进样,记录色谱图。

　　2.3.5  氧化破坏试验  精密取本品适量（约相当于头孢丙烯75mg）置50ml量瓶中，加流动相溶解，稀释至刻度，摇匀。取溶液5ml置10ml量瓶中，加过氧化氢溶液1ml，100℃水浴加热9min，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取滤液按上述色谱条件进样,记录色谱图。
   
　　试验表明,样品经酸、碱、高温和氧化破坏后,均有部分降解产物产生，各降解产物峰对头孢丙烯主峰基本无干扰，分离效果良好，说明该色谱条件可用于有关物质检测，见图2。

　　2.4  最低检出限的测定  取头孢丙烯对照品适量,精密称定,加流动相溶解并稀释制成一系列浓度供试品溶液,按上述色谱条件进样，记录主峰高约为噪音峰高的3倍时的色谱图，得到头孢丙烯顺式异构体最低检测限为0.03ng，反式异构体最低检测限为0.01ng。

　　图2  头孢丙烯颗粒专属性试验色谱图（略）

　　2.5  精密度试验  取同一份供试品溶液，重复进样5次，每次20μl,测得顺式、反式异构体峰面积的RSD%分别为0.06%、0.11%，表明精密度良好。

　　2.6  样品有关物质的测定  取批号20051101的样品按上述色谱条件测定，计算有关物质,结果单个最大杂质为0.58%，杂质总量为1.45%。

　　3  讨论
   
　　在专属性试验色谱图中，样品经酸、碱、热、氧化破坏后，产生的大量杂质峰在本色谱条件下都能与头孢丙烯顺式、反式异构体峰有较好的分离，且样品主峰峰形良好，同时，实验结果表明本高效液相色谱方法测定误差小，重现性好，灵敏度高，操作简便快速，因此本方法可以作为头孢丙烯颗粒有关物质测定的方法。
   
　　实验过程中发现本样品易吸湿，因此在贮存和包装时，应注意防潮保存。

【参考文献】
  　　［1］ 乐健,洪战英.高效液相色谱法测定头孢丙烯中的有关物质［J］.药物分析杂志,2004,24(2):153～156.

　　［2］ 关倩明.梯度洗脱HPLC法测定头孢丙烯中的有关物质［J］.广东药学院学报, 2006,22(3):277～278.

作者单位：海南省药品检验所,海南 海口 570216.