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【摘要】 目的 探讨气相色谱法检测疑似毒鼠强中毒样品的可行性。 方法 采用有机溶剂萃取,气相色谱(带NPD)测定中毒样品的毒鼠强。 结果 3例疑似毒鼠强中毒样品,经气-质联用仪确证2例为毒鼠强中毒,1例排除。 结论 气相色谱(带NPD)法存在一定的假阳性,可用于毒鼠强检测的初筛实验,确证需经气-质联用仪鉴定。
【关键词】 气相色谱 毒鼠强 中毒样品 探讨
目前,毒鼠强检测没有国标法,常用气-质联用仪检测,但仪器法较昂贵。为探讨气相色谱法检测疑似毒鼠强中毒样品的可行性,我们先后用气相色谱法(带NPD)对邹城市3、6、7月3例疑似毒鼠强中毒样品进行了检测,现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 检材 呕吐物、剩余食物(枣卷、白糖、剩菜)、鼠药袋、洗胃液。
1.2 试剂 苯、乙酸乙脂、二氯甲烷、无水硫酸钠(以上试剂均为分析纯)、二氧化二铝、活性炭。毒鼠强标准液由山东省疾控中心提供(浓度为1ug/mL)。
1.3 仪器 气相色谱法 (岛津GC—14C,附氮磷检测器,N—2000色谱工作站)
1.4 方法
1.4.1 色谱条件 色谱柱:3%OV-17 2m*3mm玻璃填充柱;载气:高纯氮99.999%;柱前压:氮气150KPa、空气45KPa、氢气55KPa;温度:柱温215℃、进样口和检测器分别为240℃;进样量:3ul;保留时间定性,外标法定量。
1.4.2 样品处理 鼠药袋、枣卷、白糖等含水少的样品直接加苯(或二氯甲烷)提取,呕吐物、剩菜等含水多的样品,加无水硫酸钠研干,分别加适量苯(或二氯甲烷)提取3次,(呕吐物等成分复杂的样品,经中型氧化铝或活性炭过滤,苯洗脱),合并提取液,经90℃水浴挥发浓缩至2.00ml,气相色谱分析[1]。
1.4.3 样品分析 与标准液相同的条件下进样,以保留时间定性,以峰面积定量。
2 结果与讨论
3例中毒样品的测定结果出现的样品峰与标准峰相对保留时间相同。采用加标进样,样品峰与标准峰叠加[2]。但根据临床表现和中毒原因调查[1,4],前2例(即3、6月)中毒事件证实为毒鼠强污染食物造成中毒,而第3例(即7月)出现的中毒案例临床表现与结果不符,起病慢而症状不典型,没有找到污染原因,经过对症治疗病人恢复很快。因此,我们怀疑第三例中毒事件非毒鼠强所致,此样品峰可能是假峰。
为排除假峰,我们随即改变色谱条件,将柱温由215℃降至180℃,载气柱前压为130KPa,则出现7月份样品峰仍为单峰,将7月份样品加标后进样出现相邻的两峰,前峰峰形对称,后峰拖尾。因分离度不佳,两峰均确定为毒鼠强。见表1。
图1 柱温180℃、N2柱前压130KPA时7月呕吐物谱图(略)
色谱图(07条件改变向呕吐物中加标后毒鼠强测定.org)
再次将柱温降至1 60℃,载气柱前压为120KPa。进7月份的加标样时,则两峰中前面的峰的保留时间与标准峰相同被自动定义为毒鼠强峰,后面的峰则不被定义而排除;对7月份加标样再次加标进样,则前锋的峰面积相应增大,后面的峰面积并未增加,见图2。
图2 柱温160℃、N2柱前压120KPA时7月呕吐物谱图(略)
作为对照将3、6月的中毒样在同条件下分别进样,其样品峰仍与标准峰相同。见图3。因此判断3、6月的中毒样品中含有毒鼠强,而7月份中毒样品中不含毒鼠强。
图3 柱温160℃、N2柱前压120KPA时3、6月样品与标准的谱图(略)
为进一步证实结果的可靠性,我们将3次中毒样品送至山东省疾控中心,用气-质联用仪分别进行选择离子、总离子的扫描,同样鉴定出3、6月两次的中毒样品中含毒鼠强,而7月中毒样品中不含毒鼠强。疑似毒鼠强的假峰在数据库中未查出是何种物质。
以上说明7月的中毒样品在不改变原色谱条件时会出现干扰峰而呈假阳性结果。但在改变色谱条件的情况下可以排除假阳性。
因此,我们认为原方法中测定毒鼠强的色谱条件不是可靠的,我们通过本次试验已证实这一点。原色谱条件可以作为过筛试验[5],确证结果必须在排除假阳性或经过气-质联用仪进一步鉴定方能定论。
【参考文献】
[1] 耿果霞,余永涛,李蓉,等.毒鼠强检测方法研究进展[J].西北农林科技大学学报(自然科学版),2006,34(7):41~44.
[2] 梁斌,董强,谭承建,等.毒鼠强中毒的研究进展[J]. 动物医学进展,2004,2:40~42.
[3] 朱传红,刘良,刘艳,等.毒鼠强中毒现状及研究进展[J].法医学杂志,2004,1:38~40.
[4] 杜云波.毒鼠强中毒的诊断与治疗进展[J].临床药物治疗杂志,2005,3(3):59~62.
[5] 杜利敏,刘建华,杜瑞玲.毒鼠强气相色谱法快速检测与分析[J].河南科技大学学报(农学版),2004,24(4):60~62.
作者单位:邹城市卫生防疫站,山东 邹城 273500.