带绦虫妊娠节片孔雀绿染色标本制作

【关键词】  带绦虫；妊娠节片；孔雀绿染色

　　孔雀绿是一种弱碱性胞核染料，也是一种很好的指示剂［1］。纪伟华等曾用孔雀绿水溶液对带绦虫妊娠节片（孕节）标本进行染色，使孕节的内部结构清晰，便于观察［2］。但染色时间较长，且病人带来的标本多固定于75％乙醇中，更为形态上鉴别虫种的工作带来了负担，鉴于此，为更好采用该染色方法，本实验采用4％孔雀绿水溶液对固定于75％乙醇中的带绦虫孕节进行染色。

　　1  材料和方法

　　1.1  标本 

　　来自云南兰坪地区带绦虫病人，固定于75％乙醇半年，取其孕节，压片固定并分节。

　　1.2  方法

　　1.2.1  去乙醇 

　　50％乙醇，30％乙醇和蒸馏水，时间各为30min。

　　1.2.2  染色方法

　　将去乙醇的孕节节片放入染色皿中染色,2％和4%孔雀绿水溶液分别染色,室温(18～19℃),染色时间分别为30min,1h,2h,4h。取出染好的节片，蒸馏水洗去虫体表面的浮色，0.5%-30%盐酸乙醇进行分色,2min；不同浓度梯度的乙醇：30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，95％，100％逐级脱色脱水，每级20min；用1/2二甲苯＋1/2无水乙醇和纯二甲苯透明，每级20min；最后用加拿大树胶封片，镜下观察染色结果。

　　2  结果

　　2.1  2％孔雀绿水溶液染色效果 

　　染色时间30min，虫体着色浅，内部结构不着色；染色时间1h,虫体标本绿色，分色及脱水后无色；染色时间2h，孕节深绿色，经分色和脱水后，子宫部分为淡绿色；染色时间4h，虫体墨绿色，分 色和脱色后，孕节边缘为白色，子宫侧枝为深绿色。

　　2.2  4％孔雀绿水溶液染色效果 

　　经30min染色后，标本为绿色，分色,脱水后，孕节中央子宫部分着色较浅；经1h染色，孕节颜色为深绿色，中央子宫侧枝为绿色，周围组织无色；经2h染色，孕节颜色是墨绿色，经分色和脱色后，子宫侧枝为深绿色，周围组织无色；经4h染色，孕节颜色为深墨绿色，分色及经较久脱色后，虫体边缘才为白色，子宫侧枝为深绿色，周围组织无色。经对照，以4％孔雀绿水溶液染色1～2h为更佳染色方法，节省时间，且标本内部结构清晰，易于观察。

　　3 讨论
        
　　众所周知，猪带绦虫可引起囊虫病，远比牛带绦虫的危害大；目前新出现虫种亚洲带绦虫是否引起囊虫病尚无定论，其形态特征介于传统猪带绦虫和牛带绦虫之间。在寄生虫病学研究和临床诊断工作中，常需观察带绦虫成虫节片的形态，特别是孕节子宫侧枝分枝数及其排列，是带绦虫的鉴别要点之一，因此制备带绦虫孕节染色标本尤为重要。以往用盐酸卡红染色的标本，整个节片均是暗红色，内部结构不清晰，子宫部分和周围组织分界也不明显，难于观察和进行鉴别；墨汁注射法所使用的桃胶也难于购买，而不方便继续使用。相反，孔雀绿是一种具有光泽的绿色结晶，是弱碱性胞核染料，易溶于水、乙醇和甲醇等，对虫卵有很好的着色力，而其它组织部分对其缺乏吸附力，经分色，水洗，脱色等处理，被染成深绿色的子宫部分和无色的周围组织有明显的区别，且立体感强，内部结构清晰，方便观察和永久保存；孔雀绿染液化学性质稳定，可以长期在室温下放置和重复利用；孔雀绿染色方法操作简便又容易掌握，因此更适于临床诊断、科研以及教学，值得推广。

【参考文献】
  　　［1］陈佩惠.人体寄生虫学实验技术［M］.北京:科学出版社，1988.89.

　　［2］纪伟华,郭冀玲.带绦虫妊娠节片标本制作方法的研究［J］.中国人兽共患病杂志，2001，17（4）：73～74.