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【摘要】 目的 研究NK/T细胞在肺腺癌组织中的浸润程度及对患者生存与预后的影响。方法 将CD8作为细胞毒T淋巴细胞（CTL）的标记物，CD56作为自然杀伤细胞（NK）的特异性标记物，应用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中NK/T细胞的分布和浸润情况。结果 48例肺癌中，CTL无～轻度浸润的29例，5年生存率为20％；显著浸润的19例，5年生存率为57％； NK细胞无～轻度浸润的34例，5年生存率为23％，显著浸润的 14例，5年生存率为64％； NK/T均显无～轻度浸润的36例，5年生存率为25％，显著浸润的12例，5年生存率为66％。经Log-rank检验，NK/T显著浸润组和无～轻度浸润组二者的5年生存率之间存在显著性差异（P＜0.05），有统计学意义。结论 肺腺癌组织中NK/T细胞显著浸润组的预后和生存时间明显好于轻度浸润组。其机理与机体细胞免疫有关。
【关键词】 肺腺癌;NK/T细胞;预后
Impact of NK/T cell on the survival and prognosis of primary adenocarcinoma patients.
LI Mei, GONG Xuan-ju.
Hainan Provincial People’s Hospital, Haikou 570311, Hainan, P. R. China
Abstract：Objective To investigate the degree of infiltration of NK and T cell in primary pulmonary adenocarcinoma and the impact on the survival and prognosis of the patients. Methods CD8 was used as the markers of cytoxic T lymphocyte(CTL) and CD56 as the markers of natural killer(NK) for detection of distribution and infiltration of NK/T cells in tumor tissue after stained immunohistochemically. Results Out of the 48 pulmonary adenocarcinoma patients there no infiltration in tissue by CTL was observed in 29 patients with a five-year survival rate of 20%; while in 19 with marked CTL infiltration, the five-year survival rate was 57%；of the 34 patients without infiltration by NK cells with a five-year survival rate of 23% and the five-year survival rate was 64% in another 14 ptients with marked infiltration in the tissue by NK cells; The five-year survivl rate of 36 patients without infiltration in the tissue either by NK and T cells was 25%, and tthat in another 12 patients with marked infiltration was 66%. Significant statistical diffeences were observed between the NK/T infiltration group and without infiltration group (P<0.05). Conclusion The survival and prognosis of adenocarcinoma patients with marked infiltrtion in tissues is appraently better than that of without or light infiltration group. The degree of NK and T infiltration is positively correlated with the prognosis and survival time of pulmonary adenocarcinoma patients, the mechanism might be associated with cellular immunity.
Key words：Ppulmonary adenocarcinoma; NK/T cell; Prognosis
研究肺腺癌实体瘤组织中自然杀伤细胞（Natural killer,NK）和细胞毒T淋巴细胞（Cytoxic T lymphocyte,CTL）浸润情况，通过对肺腺癌组织中NK/T细胞浸润程度的研究，找出影响肺癌病人生存与预后的内在因素，并探索NK/T细胞的抗肿瘤机制，为肺腺癌的治疗和临床判断预后提供一项有说服力的指数，为肺癌的免疫治疗提供免疫学基础。
1 材料和方法
1.1 材料
研究材料来源于海南省人民医院和湖北省肿瘤医院1995～2002年间手术切除的肺癌病例，共48例。全部组织切片均为原发肿瘤病理组织蜡块和切片。为便于分析比较，选择的病例在治疗方式及临床分期上基本一致。全部病例均获得随访及生存时间的统计。
1.2 方法
肿瘤组织中NK/T细胞的标记采用免疫组化链霉生物素过氧化物酶连接法（SABC）的方法，用CD8抗体标记肺癌实体瘤组织中T淋巴细胞（CTL）的浸润情况，用CD56标记瘤组织中NK细胞的浸润情况。所用试剂采用北京中杉公司提供的即用型试剂盒。CD8阳性标记CTL和CD56标记的NK细胞在肿瘤组织中的反应程度依据。
1.3 Wakabayashi等［1,2］提出的分级标准
癌组织中CD8+CTL＞44个/HP为显著浸润;癌巢中＞13.5个/HP为显著浸润，≤中位数者归入无～轻度浸润；CD56+NK＞5个/HP为显著浸润，≤5个/HP归入无～轻度浸润。统计学方法采用Log-rank法，风险分析采用COX生存分析，生存曲线通过Kaplan-Meier方法获得。
2 结果
2．1 基本情况
全部48例肺腺癌中，高分化腺癌21例，低分化腺癌27例。年龄从34～76岁，男性27例，女性21例。手术后存活时间最长的8年，最短的不足1年，平均存活3.2年,5年生存率为38%。
2．2 NK/T细胞的分布
CD8阳性标记CTL和CD56标记的NK细胞在肿瘤组织中的分布主要位于肿瘤组织内和癌性间质中，散在分布，很少见于周围肺组织。
2．3 肺癌组织中NK/T细胞的浸润情况
全部48例肺腺癌中，CTL显著浸润的19例，占39%，无～轻度浸润的29例，占61%，其中高分化腺癌20例，显著浸润的8例；低分化腺癌28例，显著浸润的11例；NK细胞的浸润情况为：显著浸润的14例，占29%，无～轻度浸润的34例，占71%，其中高分化腺癌20例，显著浸润的6例；低分化腺癌28例，显著浸润的8例；NK/T同时显著浸润的12例，占25%，无～轻度浸润的36例，占75%。
2．4 NK/T细胞浸润与生存的关系
分成显著浸润组（A组）和无～轻度浸润组（B组）。48例肺腺癌中，CTL-A组19例，5年生存率为57％；Ｂ组29例，5年生存率为20％（χ2=19.22，P＝0.00）；NK -A组14例，5年生存率为64％；Ｂ组34例，5年生存率为23％（χ2=18.56，P＝0.00）。NK/T同时浸润A组12例，5年生存率为66％；Ｂ组36例，5年生存率为25％（χ2=16.1 2，P＝0.00）。
3 讨论
细胞免疫在机体的抗肿瘤反应中一直倍受关注，成为肿瘤免疫研究的焦点和国际免疫学及相关学科关注的热点和前沿课题［3～5］。许多研究多集中在实验室研究，而对于实体瘤组织中细胞免疫研究较少。有些学者［6］从瘤组织中分离出抗原特异性CTL，认为肿瘤组织局部具有由CTL介导的抗肿瘤免疫。
Schumacher等［7］研究了70例食管癌组织中CD8+CTL的浸润情况，发现食管癌组织中CD8+CTL的浸润是肿瘤预后良好的指标，Nakakubo等［8］研究的45例胆囊癌得出类似的结论。Villegas等［2］以CD57为NK细胞标志物，观查了50例肺鳞癌组织中NK细胞浸润情况，发现瘤组织中NK细胞浸润＞5个的患者其生存期明显长于＜5个的患者，作者认为，肺鳞癌组织中NK细胞的浸润对患者生存有明显影响。但也有少数学者的研究得出相反的结论，Johnson等［9］通过对肺非小细胞癌组织的研究未发现癌组织或癌巢中CD8+CTL的显著浸润与患者的良好预后有关。我们应用CD8单克隆抗体作为CTL的标记物，应用CD56作为NK细胞的标记物，检测了48例肺腺癌患者的组织标本，其结果显示，CTL显著浸润的19例，5年生存率为57％； CTL无～轻度浸润的29例，5年生存率为20％，二者存在统计学差异（P=0.00）；NK显著浸润的14例，5年生存率为64％；无～轻度浸润的 34例，5年生存率为23％，二者同样存在统计学差异（P=0.00）； 而且本研究还对癌组织中NK/T同时有浸润的情况作了研究，发现二者都显著浸润的12例，5年生存率为66％；无～轻度浸润的36例，5年生存率为25％，二者存在明显统计学差异（P＝0.000）。从以上结果可以看出，无论是CTL显著浸润的病例，还是NK细胞显著浸润的病例，都具有良好的生存预后，在癌组织中NK/T同时显著浸润的病例尤为明显。本研究还对不同分化程度的肺腺癌组织中NK/T细胞浸润程度对生存的影响作了比较，结果显示在48例腺癌的高分化腺癌21例和低分化腺癌27例中，无论是CTL浸润，或是NK细胞的浸润，还是NK/T细胞的同时浸润，都对其患者的良好生存无相关性（P=0.08）。通过COX生存风险分析显示，NK/T细胞无一轻度浸润的生存风险明显大于显著浸润的病例（RR=0.402，P=0.00）。我们的研究结果与大多数学者报道的相一致。
关于细胞免疫参入机体局部组织的抗肿瘤机制，目前的研究认为［3～5,10］，机体可特异性激活T细胞介导的抗肿瘤免疫反应，直接抑制肿瘤细胞系的生长，在肿瘤免疫中，起主要作用的是CD8+T淋巴细胞和CD56/CD57标记的NK细胞。CD8+T细胞代表细胞毒T淋巴细胞，CTL可特异性直接杀伤靶细胞。有时CD8+T细胞的发育需CD4+T细胞的参与及其它因子如树突状细胞、杀伤抑制性受体（Killer inhibitory receptor,KIP）的诱导和调控，产生杀伤效应［11］。CD56/CD57标记的NK细胞是细胞免疫中非特异性成份，不依赖抗体和补体，不需预先活化即可直接杀伤肿瘤细胞，是一类在早期抗肿瘤免疫机制中起重要作用的效应细胞，处于机体抗肿瘤体系的第一道防线，在机体抗肿瘤免疫反应中具有积极意义。从我们的研究和其它学者的研究结果为上述机制提供了有力的佐证。当然，机体的抗肿瘤机制十分复杂，目前有关实体瘤组织局部细胞免疫抗肿瘤机制的研究还较少，更深入的研究必然揭开其神秘的面纱。
【参考文献】
［1］Wakabayashi O,Yamazaki K,Oizumi S,et al. CD4(+)T cells in cancer stroma,not CD8(+) T cells in cancer cell nests,are associated with favorable prognosis in human non-small cell lung［J］. Cancer sci,2003, 94(11):1003～1009.
［2］Villegas FR，Coca S，Villarrubia VG，et al. Prognostic significance of tumor infiltrating natural killer cells subset CD57 in patients with squamous cell lung cancer［J］. Lung Cancer, 2002,35(1):23～28.
［3］ 吴长有.记忆CD8+T细胞亚群在感染和肿瘤免疫应答中的作用［J］.细胞与分子免疫学杂志，2006，22（3）：273～275.
［4］Klebanoff CA,Gattinoni L,Torabi-Parizi p,et al.Central memory felf/tumor-reactive CD8+T cells effector memory cells［J］. Proc Natl Acad Sci USA,2005，102（27）：9571～9576.
［5］Gattinoni L,Klebanoff CA,Palmer DC,et al.Acquisition of full effector function in Vitroparadoxically impairs the in vivo antitumor effeacy of adoptively transferred CD8+T cells［J］. J clin invest,2005，115（6）：1616～1626..
［6］Mami-Chouaib F,Ech chakir H,Dorothee G,et al.Antitumor cytotoxic T-lymphocyte response in human lung carcinoma:identification of a tumor-associated antigen［J］. Immunol Rev,2002,188:114～121.
［7］Schumacher,K;Haensch,W;Roefzaad,C;et al.Prognostic significance of activated CD8(+)T cell infiltrations within esophageal carcinoma［J］.Cancer Res, 2001,61(10):3932～3936.
［8］Nakakubo Y,Miyamoto M,Cho Y,et al.Clinical significance of immune cell infiltration within gallbladder cance［J］.Br J Cancer,2003,89(9):1736～1742.
［9］Johnson SK,Kerr KM,Chapman AD,et al.Immune cell infiltrates and prognosis in primary carcinoma of the lung［J］.Lung Cancer,2000,27(1):27～35.
［10］Dercamp C,Chemin K,Caux,C,et al.Distinct and overlapping roles of interleukin-10 and CD25+ regulatory T cell in the inhibition of antitumor CD8 T-cell responses［J］.Cancer Res, 2005,65(18):8479～8486.
［11］Abe R,Peng T,Sailors J,et al.Regulation of the CTL response by macrophage migration inhibitory factor［J］.J Immunol,2001,166(2):747～753.
作者单位：海南省人民医院,海南 海口 570311.