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【摘要】 目的 评价rk39试纸条（Dipstick）对临床黑热病现症患者的诊断效果，为现场应用提供依据。 方法 以病原学检查结果或特效药物治疗效果为依据，判断rk39试纸条检测黑热病的敏感性和特异性。 结果 接受rk39试纸条与病原学2种方法检查的83人中，均为阳性者56例，阴性4人，两者符合率为100%（56/56）；单一显示rk39试纸条阳性23例；病原学与rk39试纸条阳性率分别为70.89%（56/79）、100%（79/79）。而未做病原学检查的51人中，rk39试纸条阳性12例。对单一显示rk39试纸条阳性35例，用锑剂治疗有效或治愈，证实都是黑热病。 结论 采用rk39试纸条诊断黑热病现症患者的阳性检出率达100%。与病原学相比，rk39试纸条法快速、简便、敏感和特异性高，适于在基层推广使用。
【关键词】 rk39免疫层析试纸条；Dipstick；黑热病；检测；效果
Burns等［1］（1993）从恰氏利什曼原虫的类Kinesin基因中获得了基因片段K39，并证实其存在于所有引起内脏利什曼病的利什曼原虫虫种（株）中。以此基因片段的重组抗原（rk39）制备的免疫层析试纸条（Dipstick）是一种简便、不需任何仪器和设备，适于基层使用的快速检测黑热病的方法。李国茹等［2］报道用rk39免疫层析试纸条（以下简称rk39试纸条）诊断临床黑热病患者的阳性率达到96.07%。2005～2007年期间，我们对有黑热病流行病学史和临床表现的现症患者，进一步应用rk39试纸条进行检测，取得了满意的效果，现将观察结果报告如下。
1 材料和方法
1.1 材料 rk39试纸条为美国InBios International. Inc.公司产品；血样为收集有黑热病流行病学史和不规则发热、贫血或全血细胞减少，肝脾肿大、消瘦等症状与体征的患者血液。
1.2 方法
1.2.1 rK39试纸条测试法 在患者手指或耳垂采集全血2滴（约40μl）或亦可用刻度吸管吸血清20μl，滴于rk39试纸条的加样端（样品垫上），再加PBS缓冲剂1～2滴，平放5～10min后，通过目测试纸条观察结果。在阳性对照带和样品带的位置分别出现1条深红色条带为阳性，仅显现阳性对照带而样品带未出现为阴性反应。样品带隐约可见浅红色条带则为弱阳性，亦判为阳性结果。
1.2.2 病原学检查 对接受过病原学检查的患者，进行检查结果报告的复核或标本复查，核实其病原学检查结果。
1.3 黑热病特效治疗效果观察 对rk39试纸条检测阳性或弱阳性而缺乏病原学结果支持的患者，进行诊断性治疗，观察治疗效果。连续用药3针后退烧、病情缓解者视为治疗有效，并继续完成全疗程。反之则视为治疗无效，排除黑热病诊断，停止治疗。
2 结果
2.1 rk39试纸条在各流行区检测 共对134例有流行病学史的检查对象进行了检测（见表1.），其中进行过病原学检查的83人。对流行区居民共检测55人，黑热病抗体阳性共31例，阴性24人。具有白蛉季节在流行区居留史的79人检测发现，黑热病抗体阳性共60例，阴性19人。
表1 rk39试纸条在各流行区检测结果检测（略）
2.2 rk39试纸条与病原学方法的检查结果比较 rk39试纸条检查134人，检出阳性91例，其中接受了rk39试纸条和病原学2种检查的83人，2种方法均检出阳性56例，阴性4人，符合率为100%（56/56）；单一显示rk39试纸条阳性23例。病原学阳性、rk39试纸条的阳性率分别为70.89%（56/79）、100.00%（79/79）；rk39试纸条的阳性检出率明显高于病原学检查，2种方法的检出率有明显的统计学意义（P＜0.01）。仅接受了rk39试纸条检测的51人，阳性12例，见表2。
表2 rk39试纸条与病原学检查结果的比较（略）
2.3 rk39试纸条与患者治疗效果的符合情况 对病原学检查阴性而单一显示rk39试纸条阳性或弱阳性和仅接受了rk39试纸条检测阳性或弱阳性的35例患者，采用葡萄糖酸锑钠治疗的效果进行追踪观察，均治愈或有效（表3），表明都是黑热病。
表3 rk39试纸条阳性或弱阳性患者的特效治疗效果（略）
3 讨论
采用rk39试纸条对具有流行病学史的四川省和外省分别检测116人和18人，各检出黑热病抗体阳性77、14例，检出率为66.38%、77.78%。结果表明rk39试纸条检测黑热病特异性和敏感性高，在我国西北部无明显的地区差异（P＞0.01）。
通过3年rk39试纸条检测结果与病原学检查和疗效追踪观察的结果对比，对具有流行病学史和临床表现的134人受检者中共确诊黑热病91例，分别为rk39试纸条阳性91例，rk39试纸条的总阳性检出率达100%。rk39试纸条阳性91例患者经病原学检查与特效治疗证实为黑热病的分别为56例和35例，与病原学检查符合率为100%，证实rk39试纸条阳性者都是黑热病，表明rk39试纸条阳性辅助诊断黑热病具有很高的价值。特效药物锑剂治疗观察显示，rk39试纸条检测可较早发现病人，对查不到利什曼原虫的可疑病人，检测结果可作为辅助诊断的重要依据。
虽然病原学检查发现利什曼原虫作为确诊黑热病依据，但由于病原学检查受到患者感染时间、利什曼原虫密度和镜检人员技术等因素的影响，而且操作较繁琐、费时和受条件限制。与病原学方法相比，rk39试纸条阳性检出率高，并有简便、快速，无痛苦等优点。
综上所述，rk39试纸条检测黑热病具有较高的特异性和敏感性，在临床上用于现症患者的诊断明显优于病原学方法。此外现场应用rk39试纸条无需任何仪器、设备，完全达到快速、简便和敏感特异的要求，为其他诊断方法所不及［3］。是一种经济、快速、操作简便，不受场地和人员等条件限制，试纸条的保质期长，不论是用于临床诊断或是现场调查，rk39试纸条能及时、准确地检测现症患者，是目前适用于在基层推广应用的一种快捷检测黑热病的首选免疫学诊断方法。
【参考文献】
［1］ Burns JM, Shreffler WC, Benson DR, et al. Molecular characterization of a kinesin-related antigen of leishmania chagasi that detects specific antibody in frican and american visceral leishmaniasis［J］. Proc Natl Acad Sci, USA, 1993,90:775～779.
［2］ 李国茹，段明， 蒋朝东，等. 重组抗原（rk39）试纸条诊断黑热病［J］.寄生虫病与感染性疾病杂志，2005，3（1）：14～15.
［3］ 王雅静，刘佩娜. 犬利什曼病的流行、诊断和防制［J］.实用寄生虫病杂志，2000，8（2）：72～74.
作者单位：四川省疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所,四川 成都 610041.