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【摘要】 目的 了解中华按蚊对DDT和溴氰菊酯的抗药性，为制定防制策略提供科学依据。 方法 采用WHO成蚊滤纸接触法，以区分剂量判定抗性级别，以LD50确定抗性程度。 结果 中华按蚊对DDT和溴氰菊酯区分剂量击倒率均＜20%，死亡率均＜50%，具有很高的抗药性。DDT的LC50＞4%，与1996年调查一致；溴氰菊酯LT50 684.12min，比1998年提高306倍。 结论 DDT停用多年后抗药性未明显下降，溴氰菊酯的抗药性则呈上百倍的速度发展，对DDT和溴氰菊酯的击倒抗性（kdr）应予高度重视。
【关键词】 中华按蚊；DDT；溴氰菊酯；抗药性；kdr因子
中华按蚊（Anopheles sinensis）为湖北省按蚊的优势种，也是间日疟的主要传播媒介。采用DDT滞留喷洒和溴氰菊酯浸泡蚊帐作为灭蚊的主要措施，在控制疟疾发病上发挥了巨大的作用。但随着DDT抗药性的增高，以及其对高等动物的残留毒性和对环境的污染，在全球范围内已停止使用DDT，而溴氰菊酯抗药性近年来也有增高的趋势［1］。在逐渐停止使用DDT等杀虫剂控制疟疾近30年后，WHO再次提倡室内使用DDT用于控制疟疾［2］，并就使用长效杀虫剂浸帐灭蚊防止感染疟疾发布了新的全球指导［3］。为此，我们对湖北省部分地区中华按蚊抗药性进行了现场调查，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 杀虫剂及药膜滤纸 98.2%P-P′DDT和99%溴氰菊酯纯品由美国SUPERLCO公司提供，按WHO标准制作药膜滤纸［4］。DDT浓度为0.25%（0.089g/m2）、0.5%（0.178g/m2）、1%（0.357g/m2）、2%（0.714g/m2）和4%（1.428g/m2）;溴氰菊酯浓度为0.05%（0.0178g/m2）。
1.2 供试蚊虫 于试验前夜在牛栏采集刚吸血的谢拉氏Ⅱ期中华按蚊带回实验室，饲养至次日上午供测定用，此时胃血消化至谢拉氏Ⅲ～Ⅳ期。
1.3 方法
1.3.1 区分剂量法 按照WHO制定区分剂量标准，蚊虫分别接触4%（1.428g/m2） DDT和0.05%（0.0178g/m2）溴氰菊酯60min，恢复饲养24h，观察死亡数，计算死亡率，根据死亡率判定抗性级别。死亡率＞98%为敏感群体（S）；死亡率80%～98%为初步抗性群体（M）；死亡率＜80%为抗性群体（R）。同时观察蚊虫接触药纸10、15、20、30、40、50和60min的击倒数，计算击倒率。实验设空白对照，每实验蚊数不少于100只。
1.3.2 半数致死量(LD50)法 蚊虫分别接触0.25%、0.5%、1%、2%和4% DDT 60min，和0.05%溴氰菊酯60、120、240、480和960min，恢复饲养24h，观察死亡数，计算死亡率。实验设空白对照，若对照组死亡率＞20%试验重做，每实验至少重复2次。
1.3.3 数据处理与分析 若对照组死亡率（击倒率）＜20%，用Abbott公式校正处理组死亡率（击倒率）。所得结果以Finney机率分析法进行对数-机率分析，计算半数击倒时间（KT50）、半数致死浓度（LC50）、半数致死时间（LT50）及95%可信限，并进行显著性检验［4］。
2 结果
2.1 区分剂量死亡率与击倒率 按照WHO制定的区分剂量标准，用DDT和溴氰菊酯分别对京山、仙桃和恩施等地中华按蚊进行测定，其接触药物60min击倒率均<20%，死亡率均<50%，表明其具有很高的抗药性,见表1。其中仙桃和恩施地区中华按蚊对DDT击倒率>死亡率，表明蚊虫被击倒后有部分复苏，而溴氰菊酯的击倒率均<死亡率，表明蚊虫被击倒后没有复苏，虽然都有很高的抗药性但溴氰菊酯的毒效要高于DDT。
表1 不同地区中华按蚊成虫对DDT和溴氰菊酯抗药性级别（略）
Table 1 Grade of resistance of Anopheles sinensis imago to DDT and deltamethrin in different areas
2.2 半数击倒时间（KT50） 京山、仙桃和恩施等地中华按蚊对DDT的KT50分别为1 718.63、515.42和176.86min，表明具有很强的抗击倒力。对溴氰菊酯(17.8mg/m2)KT50分别为227.78、6 234.72和1 575.88min，与1996年调查 (溴氰菊酯15mg/m2)相比［5］，其KT50实际分别提高了34、631和251倍（图1）。
2.3 半数致死浓度（LC50）和半数致死时间（LT50） 京山、仙桃和恩施等地中华按蚊对4% DDT的死亡率均小于50%，其LC50均大于4%，与1996年调查相比，抗药性程度没有明显下降，仍具有很高的抗药性。中华按蚊对溴氰菊酯的抗药性则上升很快，从京山县的调查来看，其LT50从1998年［6］的11.17min，增长至2007年的684.12min。由于1998年测定用的药纸浓度为0.01%，而2007年为0.05%，为便于比较，根据T×D=常数的原理［4］，通过换算，其抗性实际增长了306倍,见表2。
图1 不同年代中华按蚊成虫对溴氰菊酯的抗药性比较（略）
Fig 1 Comparision of KT50 of Anopheles sinensis imago to Deltamethrin in different areas
3 讨论
在疟疾的防制方法中，DDT室内滞留喷洒、溴氰菊酯浸帐灭蚊等化学防制方法始终扮演着难以取代的重要作用。而在化学防制过程中，长期而广泛使用杀虫剂所引起的蚊虫抗药性问题，一直以来是影响疟疾化学防制效果的重大障碍。
京山县是湖北省中华按蚊、嗜人按蚊复媒区之一，为控制疟疾发病，曾应用DDT滞留喷洒和溴氰菊酯浸帐灭蚊。仙桃市历史上是湖北省疟疾高发区，70年代曾应用DDT滞留喷洒灭蚊，但未采用溴氰菊酯浸帐灭蚊。恩施市是湖北省疟疾低发区，未采用DDT滞留喷洒和溴氰菊酯浸帐灭蚊，只是零星的采用喷雾剂及蚊香等灭蚊，并未形成覆盖面。
表2 不同年代中华按蚊成虫对溴氰菊酯的抗药性比较（略）
Table 2 Comparision of resistance of Anopheles sinensis imago to deltamethrin in different years
本次调查采用WHO推荐的区分剂量进行测定，结果显示京山、仙桃和恩施等地中华按蚊对DDT和溴氰菊酯区分剂量击倒率均＜20%，死亡率均＜50%，表明其抗药性均很高。其中DDT的LC50均＞4%，与1996年调查的结果相一致，表明DDT在湖北省停用多年后，抗药性并未明显下降，对于其是否可以重新用作室内滞留喷洒，还需要进一步的研究和探讨。而京山、仙桃和恩施等地中华按蚊对溴氰菊酯KT50则从1996年的7.84、11.72和7.45min，上升到现在的227.78、6 234.72和1 575.88min，分别上升了29、532和212倍。京山县LT50从1998年的11.17min上升到现在的684.12min，上升了306倍。但是中华按蚊对溴氰菊酯的击倒率均小于死亡率，表明蚊虫被击倒后没有复苏，而中华按蚊被DDT击倒后则有部分复苏，表明溴氰菊酯的毒效要高于DDT。
溴氰菊酯是湖北省用于浸帐灭蚊的主要品种，对媒介按蚊的防制和疟疾爆发点的控制起到了重要作用，本次调查中华按蚊野外群体对溴氰菊酯抗性以惊人的速度上升，具有千倍以上的抗性亦有可能［1］，这不得不引起我们的高度重视。
有研究表明溴氰菊酯等光稳定性拟除虫菊酯和DDT的击倒抗性（kdr）机理是一致的，因而与DDT抗性交互［7］，同时，由一种拟除虫菊酯化合物选择媒介产生的抗药性，对其它菊酯类或类似物同样也有抗性作用［5］。因此kdr因子的聚集，可能将成为拟除虫菊酯和DDT应用的最大障碍，拟除虫菊酯类杀虫剂用于浸帐灭蚊的前景亦将会受到严重威胁。对于嗜人按蚊抗药性以及溴氰菊酯的现场防制效果，应进行持续系统监测，以便及时采取有效措施。
【参考文献】
［1］ 刘维德. 我国蚊类抗药性发展动向［J］. 中国媒介及生物学控制杂志，1990，1（1）:41～44.
［2］ WHO. 世卫组织发布关于经杀虫剂处理的蚊帐的新指导［OL］. WHO网站，2007.
［3］ WHO. 世卫组织批准将室内使用滴滴涕用于控制疟疾［OL］. WHO网站，2006.
［4］ 刘维德. 蚊类抗药性及其测定［M］. 北京：科学出版社，1979, 1～101.
［5］ 余品红，张华勋，明桂珍，等. 溴氰菊酯浸帐灭蚊6年后媒介按蚊抗药性的现场调查［J］. 寄生虫与医学昆虫学报，1997，4（1）:33～38.
［6］ 余品红，张华勋，张绍清，等. 湖北省疟疾高发区媒介按蚊对杀虫剂敏感性的监测［J］. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2000，18（3）:149～151.
［7］ 李显春，王荫长. 昆虫抗药性靶标不敏感机制的研究进展［J］. 昆虫学报，1998，41（4）:417～422.
作者单位：京山县疾病预防控制中心,湖北 京山 431800； 湖北省疾病预防控制中心传染病所,湖北 武汉 430079； 仙桃市疾病预防控制中心,湖北 仙桃 433000；恩施市疾病预防控制中心,湖北 恩施 445000.