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【摘要】 目的 用HPLC法测定交沙霉素的含量。 方法 以交沙霉素标准品作对照，采用HPLC法测定交沙霉素片中的交沙霉素含量。色谱柱：CAPCELL PAK C8； TYPE：DD 5μm； SIZE： 4.6mm.I.D.×150㎜；检测波长：231nm；流动相：乙酸铵（0.01mol/L）、甲醇：乙腈（55：5），采用外标法。 结果 在优化色谱条件下，交沙霉素线性范围10～80μg ，r=0.99995 ,回归方程为：A=7.4872C+1551.2522。含量测定的回收率为：97.24% RSD=1.22%。 结论 该方法专属性强，操作简便，结果准确，重现性好，适用于对交沙霉素片中交沙霉素含量的测定。
【关键词】 高效液相色谱法 交沙霉素 片剂 含量测定
交沙霉素为链霉菌产生的一种大环内脂类抗生素，抗菌谱与红霉素相仿，但对诱导型耐药菌株仍具有抗菌活性；脑膜炎双球菌、百日咳杆菌、消化球菌、消化链球菌、丙酸杆菌及真杆菌等厌氧菌具良好抗菌作用；胞内病原体如支原体属、衣原体属、军团菌亦对本品敏感。本品不诱导葡萄球菌对大环内脂类药物的耐药性，为非诱导型抗生素。交沙霉素在法定质量标准中原料及制剂均采用生物法测定含量，本文采用HPLC法测定交沙霉素含量,未见报导。该方法较生物法简便快速，结果准确可靠。
1 仪器及试药
1.1 仪器 高效液相色谱仪：Agilent 1100 - DAD检测器）;天平：Sartorius Bp211D型电子天平;酸度计：PB-10酸度计;超声仪：KQ-400KDB超声清洗器
1.2 试剂、试药 乙腈为色谱纯（美国Baker公司）、甲醇为色谱纯（美国Baker公司）、氨水（分析纯 天津市科密欧化学试剂开发中心 批号：20040505）、乙酸铵（分析纯 莱阳市双双化工有限公司 批号：20042192）、冰醋酸（分析纯 北京化工厂精细化学品有限责任公司 批号：20021024）、重蒸馏水。
1.3 标准品、样品 交沙霉素标准品：中国药品生物制品检定所 批号：T24004（1006单位/mg），交沙霉素片：广州光华药业股份有限公司 规格0.2g/片 批号：050210 、 050304 ， 桂林南药股份有限公司 规格0.2g/片 批号 040402。
2 色谱条件及系统适用性条件及检测波长
2.1 色谱条件及系统适用性条件 色谱柱：CAPCELL PAK C8 DD5μm 150mm×4.6mm 流动相：0.01mol/L乙酸铵溶液（冰醋酸调pH4.0）、甲醇-乙腈（55：5）；柱温：60℃,流速：1.0ml/min,进样量20μl；检测波长：231nm;精密称取交沙霉素标准品0.02025g，置10ml容量瓶中，先加少量甲醇溶解，再加流动相至刻度，使成为2mg/ml的溶液，过滤（滤膜），自动进样20μl，色谱图见图1。
图1 交沙霉素对照品色谱图（略）
2.2 检测波长的确定 精密称取标准品0.02025mg，用甲醇稀释至浓度为2mg/ml的溶液，用紫外分光光度计测定，发现在231nm 处有最大吸收，交沙霉素的其他制剂的水溶液在280nm处有最大吸收，因此用三个波长（231nm、235nm、280nm）进行检测，在231nm的峰面积最大，故选择231nm作为高效液相色谱法检测交沙霉素片中交沙霉素含量的检测波长。
3 方法和结果
3.1 样品溶液的制备 取交沙霉素片10片，去包衣，研细，按该批的平均片重含药量称出三份，分别置500ml的容量瓶中，加缓冲液［pH4.0的乙酸铵（0.01mol/L）和（甲醇：乙腈-55：5）1：1混匀］适量，超声处理30min，再加入缓冲液至刻度。静置，放冷至室温，滤过，滤液作为样品溶液。
3.2 标准品溶液的制备 精密称定交沙霉素标准品0.02025g，用缓冲液稀释制成浓度为2mg/ml的溶液，作为标准品溶液。
3.3 标准曲线绘制 分别量取上述交沙霉素标准品溶液适量，精密称定，用缓冲液分别配置成浓度为2mg/ml的溶液，再设置Agilent 1100高效液相色谱仪自动精密量取上述溶液各5μl、10μl、20μl、30μl、40μl注入色谱仪中，记录峰面积，并以交沙霉素标准品的峰面积为纵坐标，以其进样浓度为横坐标，进行线性回归。（r=0.99995）结果表明：交沙霉素标准品溶液在10～80μg范围内线性关系良好,回归方程A=7.49C+1551.25。结果见表1。
表1 标准曲线的实验结果（略）
Table 1 Results of criteria curve
3.4 精密度试验 取“3.2”项中浓度为2mg/ml的交沙霉素标准品溶液适量，照标准曲线绘制中含量测定方法，重复进样5次，记录峰面积，计算RSD=1.22%。结果见表2。
表2 精密度的实验结果（略）
Table 2 Results of sample determination of precisium
3.5 稳定性试验 分别精密量取“3.1”项下的样品溶液，按样品溶液制备中的稀释方法制成供试品溶液，分别于1、3、6、12、24h自动进样，记录峰面积，结果表明：供试品溶液在24h内稳定。
3.6 回收率试验 取交沙霉素标准品，分别精密称取定5份，并按处方比例添加交沙霉素和辅料，同置于500ml容量瓶中，加缓冲液约100ml超声处理30min，使其充分溶再加入缓冲液［pH4.0的乙酸铵（0.01mol/L）和（甲醇：乙腈-55：5）1：1混匀］加至刻度线，静置，滤过，滤液作为样品溶液，按色谱条件依法测定，回收率结果见表3。结果表明,本法平均回收率为98.12%，RSD为0.83%，表明本法准确度较好，方法可行。
表3 回收率实验结果（略）
3.7 重现性实验 取同一批号（批号为050210）的交沙霉素片5份，按“3.1”项下方法配制供试品溶液，依法独立重复测定5次，结果见表4。
表4 重现性实验的实验结果（略）
4 样品测定
取标准品溶液和样品溶液各20μl，依法测定按外标法计算含量结果见表5～6。
表5 标准品测定结果（略）
表6 样品测定结果（略）
5 讨论
5.1 实验过程中片剂要研磨充分，在溶解时先加少量甲醇，超声30min，使之充分溶解，再加缓冲液至刻度。
5.2 由于样品交沙霉素具有水解性质，在进样过程中含量逐渐下降，但6h内较稳定。
作者单位：北华大学附属医院,吉林 吉林 132001