点击显示 收起
【摘要】 目的 建立紫草软胶囊中左旋紫草素的含量测定方法。 方法 采用HPLC法，考证于不同流动相组合、流速及柱温等条件下测定紫草软胶囊中左旋紫草素的效果。 结果 以DIKMAODS C18(250mm×4.6mm，5μm) 色谱柱，以甲醇-水-甲酸（85：15：0.5）为流动相，流速1.0 ml·min-1，波长516nm，柱温25℃，进样量100μl。检测紫草软胶囊中左旋紫草素在10.2～35.3μg·ml-1浓度范围内线形关系良好（r=0.9997）；平均回收率为100.6 %，RSD=1.83%（n=5）。 结论 所建立的HPLC实验方法简便、检测结果准确，可用于紫草软胶囊的质量控制和评价。
【关键词】 紫草软胶囊 左旋紫草素 HPLC 含量测定
紫草为紫草科多年生草本植物新疆紫草(软紫草)Arnebiaeuchroma、紫草(硬紫草)Lithospermumerythrorhizon.或内蒙紫草Arnebiaguttata.的干燥根。始载于《神农本草经》,味苦,性寒,功效以凉血活血、解毒透疹见长,乃愈创要药,对疮疡、水火烫伤［1］等创面有独特疗效。紫草主要成分为紫草素,具有抗炎［2］、促进肉芽组织生成［3］、抗肿瘤等药理作用。本实验采用HPLC法对紫草软胶囊中左旋紫草素进行含量测定,经多种流动相系统筛选,最终确定本实验规定的色谱条件,左旋紫草素与其他萘酚类成分色谱峰得以完全分离,方法简单、快速、准确,为控制紫草的内在质量提供了可靠的方法。
1 材料与方法
1.1 仪器与试药 Waters600高效液相色谱仪,2487可见紫外检测器,EC2003色谱数据处理系统。AL204万分之一电子天平（梅特勒公司）。左旋紫草素对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号：110769－200405）。紫草软胶囊由北京东方慧能公司提供。甲醇为色谱纯,甲酸、氢氧化钠等均为分析醇。
1.2 试样溶液的制备
1.2.1 对照品溶液 精密称取紫草素对照品0.00889g,于25ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得对照品贮备液。
1.2.2 供试品溶液 取10粒软胶囊的内容物，置分液漏斗中,加1%氢氧化钠溶液提取3次,每次100ml,合并碱液,加10%盐酸调pH值至酸性,加氯仿提取4次,每次30ml，合并氯仿液,水浴蒸干,残渣加甲醇溶解并定量转移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度。以20ml甲醇萃取，共萃取三次，合并甲醇液，蒸干得到0.7012g，精密称取供试品15.6mg置10ml容量瓶中，加甲醇定容，得到浓度为1.56mg·ml-1的溶液。
2 结果
2.1 色谱条件 采用DIKMAODS C18(250mm×4.6mm，5μm) 色谱柱,以甲醇-水-甲酸（85：15：0.5）为流动相；流速1.0 ml·min-1；检测波长516nm；柱温25℃；进样量100μl。各测试物显示结果见图1。
图1 各测试品HPLC测定图（略）
2.2 线性范围 分别精密吸取对照品贮备液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.6ml置10ml量瓶中,加甲醇定容,得浓度分别为0.0071、0.0142、0.0213、0.0284、0.0356mg·ml-1的对照品溶液，在上述色谱条件下分别进样100μl,记录峰面积。以进样量为横坐标,3次测定峰面积的均值为纵坐标作图,得回归方程Y=26278x-4546，r=0.9997。在8.5～35.3μg·ml-1浓度范围内线形关系良好。
2.3 精密度试验 取同一浓度的紫草素对照品溶液,在上述色谱条件下测定,重复进样6次,测定结果RSD为1.56%(n=6)。结果表明进样精密度良好。
2.4 稳定性试验 取供试品溶液,分别于配制0、4、8、16、24h依法测定,结果RSD为0.7947%(n=5)。
2.5 回收率的测定 取紫草软胶囊10粒按2.2.2项下方法测定。左旋紫草平均回收率为100.6%,RSD=1.97%(n=5)。
2.6 空白实验 取去除紫草的大豆油软胶囊阴性制剂,按制备项下方法制得阴性对照液,以上述色谱条件测定。结果阴性对照液与紫草素相同保留时间处,无色谱峰出现。
2.7 样品含量测定 取紫草软胶囊三批种各10粒,依法制成供试品在上述色谱条件下测定，计算峰面积，外表法计算左旋紫草素的含量，测定紫草素含量见表1。
表1 紫金软胶囊中左旋紫草素的含量测定（略）
3 讨论
3.1 提取方法的选择 紫草软胶囊主要含有紫草的有效成分为紫草素及其衍生物，而紫草素的主要药用成分是左旋紫草素。据文献记载［4,5］，由于左旋紫草素属于萘醌色素类化合物，且醌类分子中具有酚羟基，具有酸性，能溶于碱性溶液中，加酸酸化后又可析出。利用此性质，将左旋紫草素与油性基质进行初步分离，加酸酸化后，使左旋紫草素析出，可将左旋紫草素提取并纯化。本实验证明，加 1%氢氧化钠溶液提取，加碱后，溶液变蓝，可根据溶液颜色深浅的变化，判断是否提取完全；加盐酸酸化后，溶液变红，加氯仿提取时，也可根据溶液的颜色判断是否提取完全。另，采用1%氢氧化钠溶液提取时，易发生乳化，不利于提取，因此不宜剧烈振摇。
3.2 测定方法的选择 左旋紫草素的主要测定方法有紫外法、薄层扫描法［6］、HPLC法，本实验采用高效液相色谱法测定左旋紫草素的含量，经多种流动相系统筛选,最终确定本实验规定的色谱条件,左旋紫草素与其他萘酚类成分色谱峰得以完全分离, 方法简单、快速、结果准确，重现性好，可用于本品的质量控制。
【参考文献】
［1］ 叶碧波,胡明.紫草的研究概况［J］.中国中医药科技,1997,(5):320～321.
［2］ 周灵珊,王风华.紫草的临床应用［J］.内蒙古中医药,1998,4:39～40.
［3］ 熊晓刚.紫草在皮肤病临床应用举隅［J］.甘肃中医,2000,5:55.
［4］ 孟宪生，沙明，曹爱民，等.HPLC法测定紫草及其制剂紫金油中左旋紫草素的含量［J］.中草药,2003,34(7):615～616.
［5］ 姚水宝，黄小华，杨水新.紫草油膏中左旋紫草素的含量测定［J］.中国医院药学杂志,2006,26(7):902～903.
［6］ 刘芳，王小平，伍伟祯.薄层扫描法测定烧伤膏中左旋紫草素的含量［J］.2001,15(2):21～22.
作者单位：海南省药品检验所，海南 海口 570216； 北京联合大学生物化学工程学院，北京 100023