见血封喉树叶化学成分研究

【摘要】  目的 对见血封喉Antiaris toxicaria Lesch.树叶的化学成分进行研究。 方法 见血封喉树叶采用80%乙醇回流提取，石油醚脱叶绿素，再经氯仿、正丁醇等溶剂萃取，萃取物经多次柱色谱分离，纯化。根据化合物的理化常数，波谱学特征鉴定化合物的结构。 结果 分离得到4个化合物，分别鉴定为硝酸钾（1），β-谷甾醇（2），胡萝卜苷（3）和槲皮素（4）。 结论 首次从血封喉树叶中分离得到化合物2、3、4,为进一步开发开发研究提供依据。

【关键词】  见血封喉树叶 槲皮素 β-谷甾醇 胡萝卜苷 硝酸钾

　　Study on the chemical elements of leaves of Antiaris toxicaria Lesch.

　　KANG Sheng-li, LIU Ming-sheng, ZHANG Jun-qing, et al.

　　(Department of Pharmacology of Hainan Medical College, Haikou 571101, Hainan, P. R. China)
   
　　Abstract：Objective  To study the chemical constituents in the leaves of Antiaris toxicaria Lesch.  Methods  The dried leaves of Antiaris toxicaria Lesch were extracted with 80% EtOH, and the extracts was partitioned with chloroform, n-butanol, respectively. Chromatographic techniques were used to separate the chemical components. The chemical and physical properties and spectra.of chemical compounds obtained were identified.  Results  Four compounds were identified as potassium nitrate (1), β-sitosterol (2), daucosterol (3), and quercetin.  Conclusion  Compound 2, 3, 4 were isolated from this plant for the first time.
   
　　Key words：Antiaris toxicaril; Quercetin;  β-sitosterol;  Daucosterol;  Potassium nitrate

　　见血封喉(Antiaris toxicaria Lesch.)，又名箭毒木，是桑科见血封喉属植物，共有4种生长在亚洲和非洲的热带地区,我国仅分布见血封喉一种［1］，为国家三级珍稀保护植物。在海南省北部的许多村庄、庭院中多有栽培，常为百年古树。当地居民认为见血封喉树是一种风水树，称该树为“加布”。
   
　　虽然从见血封喉割破树皮后流出的树汁中分离得到许多强心苷类物质，如α-弩箭子苷(α-antiarin)、见血封喉苷(Antioside)、马来亚苷(Malayoside)等［2］。但迄今，有关见血封喉树叶化学成分的研究尚未见报道。本研究在对树叶水提取物和醇提取物的急性毒性研究基础上， 对其化学成分进行研究，从醇提取液的不同萃取部位经多次柱色谱，分离得到多个单体物质，经过理化性质和波谱分析，鉴定了4个化合物，分别为硝酸钾（1），β-谷甾醇（2）、胡萝卜苷（3）、和槲皮素（4），现将工作报道如下。

　　1  材料与方法

　　1.1  仪器与材料  XT-5显微熔点测定仪（温度计未校正，北京科仪光电仪器厂）;JASCO-FT-IR-4100型红外分光光度计;核磁共振谱用BRUKER AV-400型核磁共振仪测定;EYELA低压色谱泵（日本）;薄层色谱及柱色谱用硅胶（青岛海洋化工厂）;Sephadex LH-20（Pharmacia Biotech）;聚酰胺颗粒（80-100目，浙江，台州四甲生化塑料厂）;甲醇，氯仿，正丁醇，石油醚等均为分析纯（上海化学试剂公司）;见血封喉树叶于2007年6月采自海口市云龙镇美坦村见血封喉古树（海口市政府：国家三级古树，No.1274，1275）。

　　1.2  方法

　　1.2.1  提取  见血封喉树叶3kg，分3次用80%乙醇回流提取，每次回流2h。所得醇提取液经适当浓缩后，用石油醚萃取2次，除去叶绿素。继续减压浓缩至小体积。所得浓缩液经离心处理后分别用氯仿，正丁醇萃取，回收溶剂后得氯仿萃取物和正丁醇萃取物。

　　1.2.2  分离  氯仿萃取物经硅胶柱色谱分离，石油醚:乙酸乙酯梯度洗脱（100:0→90:10），收集95:5流份，反复硅胶柱色谱，环己烷:丙酮（8:1）洗脱，得化合物2（～100mg）。氯仿萃取物色谱柱改用乙酸乙酯，95%乙醇洗脱，分别收集洗脱液，回收溶剂成膏状，室温下放置。95%乙醇洗脱物用乙醇重新溶解时出现较多不溶物，离心收集不溶物，反复硅胶色谱，得化合物3（17mg）。正丁醇萃取物蒸去溶剂后，其膏状物中析出大量醇不溶物，离心收集沉淀，甲醇洗涤得针状粉末（～1000mg）；取部分粉末，50%乙醇加热溶解后长期低温放置，得化合物1（棱柱状晶体）。正丁醇溶解部分经聚酰胺等柱色谱分离得化合物4（黄色粉末，10mg）。

　　2  结果

　　2.1  化合物1  低温长期放置得无色棱柱状结晶（50％EtOH），300℃以上不熔融，灼烧不碳化，极易溶于水，不溶于乙醇，氯仿和乙酸乙酯等有机溶剂。ICP-MS测定为钾盐（及微量铷），棕色环试验阳性［3］，显示具有硝酸根离子，并用硝酸钾（分析醇）做对照试验； IR( KBr,cm-1)νmax:1 760(弱尖)，1 380(强宽)，830(尖)，700(弱) ，符合无机离子硝酸根的特征峰，与对照品硝酸钾（分析醇）的红外光谱一致，故化合物1 鉴定为硝酸钾。

　　2.2  化合物2  白色片状晶体，mp 131～133℃，Liebermann-Burchard反应阳性(蓝色→污绿色)。IR(KBr,cm-1)νmax: 3431，2936，2866(C-H)，1464，1381(CH3)，1061；1H-NMR(CDCl3，400MHz)δppm：5.37（1H，d，J=5.24Hz，H-6），3.55(1H，m，H-3)，1.03(3H，s，C19-Me)，0.94(3H，d，J=6.5Hz，C21-Me)，0.9-0.8(9H，m，C26，27，29-Me)，0.70(3H，s，C18-Me)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δppm：37.3(C-1)，31.7(C-2)，71.8(C-3)，42.3(C-4)，140.8(C-5)，121.7(C-6)，31.9(C-7)，31.9(C-8)，50.2(C-9)，36.5(C-10)，21.1(C-11)，39.8(C-12)，42.3(C-13)，56.8(C-14)，24.3(C-15)，28.2(C-16)，56.1(C-17)，12.0(C-18)，19.4(C-19)，36.2(C-20)，18.8(C-21)，34.0(C-22)，26.1(C-23)，45.9(C-24)，29.2(C-25)，19.8(C-26)，19.0(C-27)，23.1(C-28)，11.9(C-29)。与β-谷甾醇对照品共薄层为同一斑点，与文献［4,5］对照，数据一致，故确定化合物2为β-谷甾醇(β-sitosterol)。

　　2.3  化合物3  白色固体，mp 272～274℃，Liebermann-Burchard反应阳性(蓝色→污绿色)。IR( KBr,cm-1)νmax: 3398，2959，2868(C-H)，1463，1380(CH3)，1074，1025；13C-NMR(C5D5N，100MHz)δppm：38.0（C-1)，29.0(C-2)，78.9(C-3)，39.9(C-4)，141. 5(C-5)，122.4(C-6)，32.7(C-7)，32.6(C-8)，50.9(C-9)，37.4(C-10)，21.8(C-11)，40.5(C-12)，43.0(C-13)，57.4(C-14)，25.0(C-15)，30.8(C-16)，56.8(C-17)，12.5(C-18)，19.9(C-19)，36.9(C-20)，19.5(C-21)，34.7(C-22)，27.0(C-23)，46.6(C-24)，30.0(C-25)，20.4(C-26)，19.7(C-27)，23.9(C-28)，12.6(C-29)，103.1(C-1')，75.8(C-2')，79.1(C-3')，72.3(C-4')，78.7(C-5')，63.4(C-6')。与胡萝卜苷标准品共薄层为同一斑点，与文献［6］比较，数据基本一致，确认化合物3为胡萝卜苷(Daucosterol)。见图1。

　　图1  胡萝苷的化学结构式（略）

　　2.4  化合物4  黄色粉末，mp>300。薄层上用AlCl3显色呈现亮黄色，盐酸-镁粉反应阳性。1H-NMR(DMSO-d6，300MHz)δppm ：12.50（s, -OH），10.70（brs，-OH），9.30（brs，-OH），7.68（1H，d，J=2.0Hz，H-2’），7.54（1H，dd，J=2.0，8.4Hz, H-6’），6.88（1H，d，J=8.4Hz, H-5’），6.41（1H，d，J=2.0Hz，H-8），6.19（1H，d，J=2.0Hz，H-6）；13C-NMR(DMSO-d6，150MHz)δppm：146.8（C-2），135.7（C-3），175.9（C-4），103.1（C-4a），156.2（C-5），98.2（C-6），163.9（C-7），93.4（C-8），160.8（C-8a），122.0（C-1’），115.1（C-2’），145.1（C-3’），147.7（C-4’），115.6（C-5’），120.0（C-6’）；与槲皮素对照品共薄层，Rf值一致，与文献［7］记载数据一致，故鉴定为槲皮素（Quercetin）。见图2。

　　图2  槲皮素的化学结构式（略）

　　3  讨论

　　3.1  对见血封喉树汁的研究中曾分离得到多种强心苷物质，对其根皮化学成分的研究中分离得到多种查尔酮型黄酮类物质，但未见到对其树叶化学成分的研究报道。本研究首次报道从该植物中分离得到了槲皮素、β-谷甾醇和胡萝卜苷等成分。

　　3.2  在对树叶化学成分的研究中，未分离得到强心苷类成分，预试验结果也未发现树叶中存在强心苷类物质，而且通过见血封喉树叶水煎煮液和醇提取液对小鼠口服急性毒性的观察（前期工作），两种提取物均未发现口服中毒现象，表明树叶可能不具口服毒性，与一些报道中所讲树叶也能引起中毒不符。

　　3.3  研究过程中发现提取物进行盐酸-镁粉反应呈阳性，TLC检查及分离过程中也发现其树叶提取物中除槲皮素外还存在有相当量的黄酮类物质，预示着见血封喉树叶或许在心脑血管疾病治疗方面具有潜在价值。
   
　　(致谢:海南大学测试中心代测ICP-MS，1H-NMR，13C-NMR等波谱。)

【参考文献】
  　　［1］ 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志［M］.北京: 科学出版社, 1998, 23(1):64～66.

　　［2］ 国家医药管理局中草药情报中心站. 植物有效成分手册［M］. 北京：人民卫生出版社，1986，62～65.

　　［3］ 南京药学院主编.无机化学［M］.上海：上海科学技术出版社，1978，242.

　　［4］ 申向荣，张德志.枳椇子石油醚部位的化学成分研究［J］. 广东药学院学报，2006,22(6):594～595.

　　［5］ 黄琴，陈茂彬. β-谷甾醇烟酸酯的制备［J］.化学与生物工程，2007，24(9):62.

　　［6］ 王彩方，潘成学，程茜，等. 离舌橐吾叶化学成分分析［J］. 郑州大学学报（医学版），2007，42(6):173～1174.

　　［7］ 于德泉，杨峻山. 分析化学手册（第2版，第7分册）［M］ . 北京：化学工业出版社，1999，820.

作者单位：海南医学院药学系,海南省热带药用植物研究开发重点实验室，海南 海口 571101; 海南医学院药学系本科04级毕业生.