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【摘要】 目的 建立鸭胆子油乳注射液的细菌内毒素检查方法。方法 参照 《中国药典》2005年版二部附录 “细菌内毒素检查法”进行干扰试验和结果判断。结果 鸭胆子油乳注射液对细菌内毒素检查有抑制作用，当将鸭胆子油乳注射液通过稀释的方法将浓度稀释至0.006ml/ml时，可消除干扰作用。结论 本品可采用细菌内毒素检查方法替代家兔热源检查法。
【关键词】 鸭胆油乳注射液;细菌内毒素;干扰试验
鸭胆子油乳注射液作为抗癌药，广泛用于肺癌、肺癌脑转移及消化道癌的治疗。常用家兔热原法检测其热原，该方法操作繁琐且费时。本文采用鲎试验凝胶法，通过对不同批号的鸭胆子油乳注射液进行干扰试验，建立鸭胆子油乳注射液细菌内毒检查方法，现介绍如下。
1 材料
1.1 药品与试剂
鸭胆子油乳注射液：规格10ml/支，批号分别是070606，070410，070428（沈阳药大药业有限责任公司生产）；细菌内毒素国家标准品：效价为每支100EU，批号2002-12（中国药品生物制品检定所）；鲎试剂：灵敏度为0.06EU/ml，批号为0708280（湛江博康海洋生物有限公司生产）；细菌内毒素检查用水：规格为5ml/支，批号为070705（湛江博康海洋生物有限公司生产）。
1.2 仪器
旋涡振荡器，型号XH-85型，江苏省宝应县水泗抿华电器厂培养箱，HH11500型，广东医疗设备厂生产。标准型净化工作台SW-GJ-IB型，苏州净化设备厂生产。
2 方法和结果
2.1 鲎试剂灵敏度复核
参照 《中国药典》2005年版二部附录 “细菌内毒素检查法”，将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15min，然后稀释成2.0λ，1.0λ，0.5λ，0.25λ4个浓度梯度的内毒素标准溶液，每稀释一步均在旋涡混合器上混合30s，每一浓度平行做4支，每管加入待复核的鲎试剂0.1ml和内毒素标准液0.1ml，同时用细菌内毒素检查用水作2支阴性对照管，共18管，轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入（37±1℃）培养箱中，保温（60±2min）。结果见表1。表1 鲎试剂灵敏度复核试验λEU/mlTAL（略）
计算该鲎试剂反应终点浓度几何平均值,即该批鲎试剂灵敏度的测定值。λc=lg-1(ΣX/4)即λc=0.1EU/ml。X为反应终点浓度的对数值（lg）。当λc在0.5～2λ（包括0.5～2λ）时，可用于细菌内毒素检查，并以标示灵敏度λ为该批鲎试剂灵敏度。因此从表1结果看，鲎试剂的灵敏度复核试验符合规定。
2.2 样品细菌内毒素限值（L）的确定
L=K/M，式中K为按规定的给药途径，人用每千克体重每小时可接受的内毒素最大剂量，静脉注射剂的致热阈值（K）为5EU/(kg·h)；M为人用每千克体重每小时给药的最大剂量，鸭胆油乳注射液临床每次最大用量为30ml，加于0.9%氯化钠注射液250ml中，1h内注射完毕。故M=30/60=0.5ml/kg.h，人平均体重按60kg算，因此L=K/M=5/0.5=10.0Eu/ml。
2.3 供试品最小有效稀释浓度
供试品为注射用油乳，可将其视为液体原料药，其最大有效稀释倍数（MVD）取1，即可计算出供试品最小有效稀释浓度：MVD=CL/λ，所以C=λ/L=0.06/10=0.006ml/ml，L为供试品的细菌内毒素限值，λ为鲎试剂的灵敏度，因此0.006ml/ml为供试品最小有效稀释浓度。
2.4 鸭胆子油乳注射液干扰试验
在制备内毒素标准液的同时，用细菌内毒素检查用水，将样品稀释至浓度为0.006ml/ml，将细菌内毒素工作标准品以相同方法制备成所需浓度的含供试品细菌内毒素溶液（2.0λ，1.0λ，0.5λ，0.25λ）。取鲎试剂36支，18支操作同鲎试剂灵敏度复核试验，另18支排成5列其中4管4列分别加入2.0λ，1.0λ，0.5λ，0.25λ的含供试品的细菌内毒溶液，2支1列加入供试品溶液，后操作同前，结果见表2。表2 鸭胆子油乳注射液干扰试验批号供试品内毒素浓度（略）注：Es为用细菌内毒素检查用水制成的内毒素标准液的反应终点浓度几何平均值，Et为用样品稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度几何平均值。2.5 结果 当Es在0.5～2λ（包括0.5λ和2λ）及Et在0.5～2λ（包括0.5λ和2λ）时，可认为供试品在该浓度下无干扰作用，符合《中国药典》对细菌内毒素检查的有效性。结果表明，当将鸭胆油乳注射液浓度稀释至0.006ml/ml时，对内毒素检查无干扰作用。
3 讨论
从实验结果可看出，供试品对鲎试剂无干扰的最小有效稀释浓度为0.006ml/ml，在此浓度以下，可以选择灵敏度为0.006EU/ml的鲎试剂对相应的供试品稀释后进行试验。本文采用3个批号的供试品进行干扰试验，结果对细菌内毒素检查均无干扰作用，说明可建立鲎试剂对鸭胆油乳注射液的细菌内毒素检查方法，以替代家兔热原法，查该方法灵敏度高，重现性好，简便省时，节约资金。
【参考文献】
［1］中国药典［M］.2005.
［2］中国药品检验标准操作规范［M］.2005M287.
作者单位：海南省农垦总局医院药剂科, 海南 海口 570311.