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【摘要】 目的 正确运用速率法消除胆红素对碱性苦味酸法测定肌酐的干扰。 方法 在日立7080全自动生化分析仪上，利用速率法测定胆红素对肌酐测定的影响程度，设计对肌酐测定的校正方案。同时使用碱性苦味酸法和酶法测定胆红素含量不同的92例临床标本，对该方法进行初步评价。 结果 使用速率法校正胆红素对碱性苦味酸法测定肌酐的干扰明显提高碱性苦味酸法测定黄疸血清标本的准确性。该方法回收率为92%~105%，批内变异系数为：2.6%~11.5%批间为13.6%线性范围宽。用校正速率法和酶法同时测定胆红素含量不同的20例标本。相关系数为0.9942说明该方法同酶法同时测定结果一致。 结论 本法操作简单，不需要特殊试剂，标本不需要人工预处理，只需测定用碱试剂测出胆红素影响值进行校正，是肌酐测定中消除胆红素干扰较理想的方法。
【关键词】 肌酐；胆红素；速率法
肌酐的化学速率法易受到多种物质的干扰如胆红素、丙酮酸、蛋白质、葡萄糖、丙酮等。其中快速反应假肌酐物质和慢反应假肌酐物质可通过二点速率法（自动分析）和两次读数法（手动分析）对“窗口期”检测加以消除。1980年对速率法进行严格评价后指出：速率法仍受到α-酮酸的正干扰和胆红素的负干扰[1]。其中在临床上受胆红素干扰最为常见。血清中的胆红素在505nm有较强的光吸收。在碱性条件下，胆红素转变成光吸收较弱的胆绿素形成一个向下的光吸收曲线，对肌酐测定产生负干扰，使肌酐值偏低。目前，关于排除干扰的方法主要是加入氧化物或氧化酶。先将胆红素氧化成胆绿素再测定肌酐，达到消除干扰的目的。操作步骤比较复杂，不利于自动分析。只能不同程度地减弱其干扰作用。李氏[2]在日立全自动生化分析仪上，利用碱性苦味酸试剂，速率B法双项目分析程序，建立了新的肌酐测定的方法，提供了新的思路。但其程序中未能考虑碱性试剂在JAFF反应时已被稀释，校正后结果偏高。本作者对此做了进一步实验，并考虑了不同浓度胆红素对肌酐测定影响特征，确定了新的校正方案。该方法较速率B法双项目分析的准确性有较大的提高。
1 材料与方法
1．1 材料 肌酐试剂（深圳迈瑞公司提供）；肌酐酶试剂（日本和光公司提供）；肌酐标准液:157μmol/L（深圳迈瑞公司提供）。血清标本取自本院门诊和住院病人。仪器为日立7080全自动生化分析仪。
1．2 分析原理 利用两点速率法的分析原理，设定肌酐测定程序，并使用肌酐标准液定标，得到校正系数K值。设定第二程序(碱试剂反应程序)，以K值的负数作为系数，蒸馏水代替苦味酸试剂，使用原肌酐测定相同的碱性液，用于测定胆红素对肌酐的干扰程度。测得的干扰值对肌酐测定结果进行补偿。以达到消除干扰的目的。
1．3 参数设定 肌酐测定程序，速率时间：10min,测定点：19、23，主波长：505nm，副波长：700nm,样品量：15μl，R1试剂(碱试剂)：75μl，R3试剂（苦味酸试剂）：75μl，单点标准校准。第二程序(碱试剂反应程序)：速率时间：10min,测定点：19、23,主波长：505nm，副波长：700nm,样品量：15μl，R1试剂1(碱试剂)：75μl，R3试剂（蒸馏水）：75μl，K值校准。
2 结果
2．1 胆红素同碱性试剂反应 用高浓度胆红素（386.2μmol/L）标本 ，在日立7080全自动生化分析上,使用第二程序检测，通过实时反应曲线连续观察10mim吸光度变化。从实时反应曲线看出：胆红素在碱试剂中吸光度呈下降趋势，基本呈线性关系变化，3-15测定点是干扰物的变化率，在15点加入3试剂，18-22测定点是肌酐的变化率。在3-16测定点吸光度下降的速率明显高于在16点加入3试剂后16-31的吸光度下降的速率。故不能用13-15测定点的变化率来补偿18-22测定点的变化率。应设定第二程序进行补偿。
2．2 胆红素浓度对肌酐测定的干扰程度测定 收集92份胆红素不同浓度的血清标本，其浓度范围为2.0~436μmol/L。每份标本分别用速率法，酶法测定肌酐浓度。并用第二程序测定胆红素的干扰程度。结果见表1。
表1 3种方法测定肌酐的结果比较（略）
从表中结果看出：当胆红素浓度低于63μmol/L时，（有报道[3]大于165.5μmol/L时）对肌酐测定影响不大。随后随着胆红素浓度的升高，对肌酐测定的负干扰越大，所需校正的值也在升高。从校正后的结果看，不同浓度的胆红素血清标本测得的肌酐结果趋于一致。此方法可以消除胆红素对肌酐测定的干扰。
2．3 新方法评价
2．3．1 回收试验 选取含胆红素(404μmol/L)的标本，加入不同浓度的标准品，用3种方法测定肌酐。结果看出：黄疸血清用原法测定肌酐，其回收率为57%和73%：校正速率法为92%和105%；而酶法为95%和103%。
表2 3种方法测定肌酐回收率比较（略）
2．3．2 重复性试验 分别取两份含有胆红素的高低值的混合血清，校正速率法测定的批内、批间重复性。结果：批内变异系数为2.6%~11.5%,批间变异系数为13.6%,结果见表3。
表3 校正速率法重复性试验（略）
2．3．3 方法比较试验 分别取20份不同胆红素含量的血清，用速率法和酶法测定肌酐，两法结果相关系数（r）为0.9942,结果用配对t检验进行分析，P=0.0022。
3 讨论
胆红素对速率法测定肌酐的负干扰，是目前临床中最常见的干扰。消除其干扰的方法有很多，如：SDS、TRITON、光照射、Fe3+氧化以及胆红素氧化酶法。其原理均是将胆红素氧化成胆绿素以消除胆红素在505nm的光吸收。这些方法均需先将标本进行氧化处理，比较麻烦。酶法测定肌酐不受胆红素的干扰[3]，但试剂成本较高，且使用酶法需要重新制定肌酐参考范围。李氏利用日立生化分析仪上所具备的速率B法双项目检测程序，设计了消除胆红素对肌酐测定干扰的新方法，提供了新的思路。笔者对其进行了试用，发现其校正后，结果偏高。进一步胆红素同碱性试剂反应试验证明：胆红素在高浓度的碱性液中505nm处的吸光度下降速率高于低浓度碱性液。而试剂1（碱性试剂）与试剂2（苦味酸试剂）混合比为1：1，混合后试剂pH值明显降低，以致该方法校正过高。故笔者设定第二程序，直接测出胆红素对肌酐干扰值后，作校正。结果与酶法肌酐检测作比较，有较好的相关性。该方法可有效地消除胆红素的干扰，结果准确，操作简单，重复性好。
【参考文献】
［1］ 叶应妩，王毓三 . 全国临床检验操作规程［M］ . 第二版，南京：东南大学出版社，263.
［2］ 李贵星 . 用速度B法消除胆红素对碱性苦味酸法测定肌酐的干扰［J］ . 检验医学与临床，2004，11：9~10.
［3］ 石凌波，林龙顺 . 常见肌酐测定方法中存在的干扰［J］ . 中华检验医学杂志，2001，24：102~104.
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