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【摘要】 目的 测定胆木浸膏胶囊中异长春花苷内酰胺的含量。 方法 采用高效液相色谱法,以Diamonsil ODS（150×4.6mm、粒径5μm）为色谱柱,流动相为乙腈-水-磷酸（30:70：0.1）,检测波长为226nm,柱温: 室温,流速为1.0mL /min,采用面积外标法。 结果 建立了胆木浸膏胶囊中异长春花苷内酰胺的HPLC含量测定方法,线性范围为2.028～10.140μg/ml,平均回收率为98.77% , RSD为1.41% (n= 6)。 结论 该方法稳定、可靠、专属性强,可用于胆木浸膏胶囊中异长春花苷内酰胺的含量测定,为胆木浸膏胶囊的质量控制提供了新方法。
【关键词】 胆木浸膏胶囊;异长春花苷内酰胺;含量; 测定;高效液相色谱法
Determination of strictosamide content in Danmu Injection by HPLC.
HUANG You-xing，LIU Chun.
(Hainan Aomeihua Pharmaceutical Co Ltd, Haikou 570216, Hainan, P. R.China )
Abstract: Objective To determine the content of strictosamide in Danmu Extract Capsules. Methods The HPLC system consisted of the column of Diamonsil ODSC18 (150mm×4.6mm , 5μm) and acetonitrile - water - phosphoric acid (30∶70∶0.1) as the mobilephase. The temperature was room temperaure. The detective wavelength was 226nm. The flow rate was 1. 0ml/min. Extennal standard method. Results The method of determinating the content of strictosamide in Danmu extract capsules was established. It showed a linear relationship within the range of 2.028～10.140μg/ml, the average recovery was 99.79% , and the RSD was 1. 00% (n = 6). Conclusion This method is simple, reliable, precise and p rovides a scientific basis for the quality controlling of Danmu extract capsules.
Key words: Danmu Extract Capsules; Strictosamide; Content ; Determination; HPLC
胆木浸膏胶囊系由胆木Ramulus Naucleae单味药材开发研制而成的中药制剂，具有清热解毒，消肿止痛之功效，临床常用于治疗急性扁桃腺炎，急性咽炎，急性结膜炎及上呼吸道感染等症。异长春花苷内酰胺( Isovincoside lactone，又名strictosamide)是胆木浸膏胶囊中主要有效成分,且含量较高[1，2],为有效控制该药的质量,保证临床用药的安全、有效、可控,本实验应用高效液相色谱法对胆木浸膏胶囊中异长春花苷内酰胺的含量测定方法进行了研究,并对6批胆木浸膏胶囊进行了含量测定。
1 实验材料
1.1 仪器 日本岛津LC-10AT型高效液相色谱仪，SPD-10AV检测器，浙江大学N2000化学工作站，计算机系统，日本岛津UV-1601紫外分光光度仪。
1.2 材料与试剂 异长春花苷内酰胺对照品（自制，纯度：99.44%）；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，采用Diamonsil ODS（150×4.6mm、粒径5μm）柱。乙腈-水-磷酸（30:70：0.1）为流动相；检测波长为226nm；柱温为室温；流速1.0ml/min；进样量20μl，采用面积外标法。异长春花苷内酰胺分离良好，分离度大于1.5，峰形对称。理论板数按异长春花苷内酰胺峰计算应不低于3000。
2.2 对照品溶液的制备 取经五氧化二磷30℃减压干燥3h的异长春花苷内酰胺适量，精密称定，加甲醇制成每1ml约含异长春花苷内酰胺6μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备 取本品装量差异检查项下的内容物适量，研为粉末，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率35kHz）30min，放冷再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml置50ml量瓶中，并用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。
2.4 空白试验 依据处方中比例，按样品制法制备不含胆木的阴性对照品，得空白样品,按以上“供试品溶液的制备”及“色谱条件”处理分析样品,结果表明空白样品的HPLC色谱图在与异长春花苷内酰胺相应保留时间上没有干扰峰。
2.5 线性关系考察 取经五氧化二磷30℃减压干燥3h的异长春花苷内酰胺适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含异长春花苷内酰胺0.1mg的溶液，摇匀，即得标准储备液。精密量取标准储备液1ml，2ml，3ml，4ml，5ml，分别置于50ml容量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密吸取上述不同浓度的异长春花苷内酰胺对照品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪中。以异长春花苷内酰胺对照品的浓度（C）为横坐标，以峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：A=50067.92C-1241.15，r=0.9999。结果表明：异长春花苷内酰胺在2.028～10.140μg/ml浓度范围内，呈良好的线性关系。
2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0h、2h、4h、8h测定异长春花苷内酰胺的峰面积值，结果其RSD=0.51%，表明供试品溶液在8h内稳定性良好。
2.7 重复性试验 分别精密称取供试品（08010批）粉末六份，按上述供试品溶液制备方法制得供试品溶液，并进行含量测定，结果RSD为1.37% (n= 6)。结果表明该方法的重复性良好。
2.8 加样回收试验 取已知异长春花苷内酰胺含量的同一批胆木浸膏胶囊（80101批）6份，各约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入一定量的异长春花苷内酰胺对照品，照上述供试品溶液制备方法分别制得供试品溶液，测定，结果平均回收率为：98.77%，RSD为1.41% (n=6)，结果表明此方法具有良好的回收率。结果见表1。
表1 异长春花苷内酰胺加样回收率试验结果（略）
2.9 供试品含量测定 按上述测定方法，对6批胆木浸膏胶囊进行含量测定，结果测得异长春花苷内酰胺的平均含量为7.1433mg/粒。
3 讨论
异长春花苷内酰胺( Isovincoside lactone，又名Strictosamide)具有抗癌、杀疟原虫等生理活性，也是胆木浸膏胶囊中主要有效成分,且含量较高,可以作为评价胆木浸膏胶囊质量的指标成分。
异长春花苷内酰胺对照品系委托香港赛马会中医研究院提取精制，经红外、紫外、质谱、氢谱等四大光谱的结构确认而得，并采用面积归一法确定其含量。
本次采用高效液相色谱法对胆木浸膏胶囊中异长春花苷内酰胺的含量测定进行了研究，经过对不同体系流动相的色谱行为的比较,最终以乙腈- 水- 磷酸(30∶70∶0. 1)的分离效果较佳。根据对照品的紫外扫描光谱图,最终确定选择226nm作为检测波长。该方法可使异长春花苷内酰胺的色谱峰与其它杂质峰达到基本分离,而且无干扰。试验结果表明,该方法简便,专属性强,重复性好,为胆木浸膏胶囊的质量控制提供了新方法。
【参考文献】
［1］ 叶能良.胆木制剂生产工艺及质量标准简介［J］.中草药通讯,1975,6(6):341～344.
［2］ 丁琳(Ding L),吴德康(Wu DK),蒋俊毅(Jiang JY). HPLC法测定胆木注射液中异长春花苷内酰胺的含量［J］. 中医药学刊,2006,9(24):1753～1754.
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