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【摘要】 目的：研究脱氢紫堇碱（DHC）对兔血小板中cAMP 和cGMP含量的影响以探讨其抑制血小板聚集的作用机制。方法：应用放射免疫分析方法。结果：DHC显著增加兔血小板中cAMP的含量，而降低兔血小板中cGMP的含量。结论：DHC可能通过增加血小板中cAMP的含量和降低血小板中cGMP的含量而产生血小板抑制作用。
【关键词】 脱氢紫堇碱 血小板聚集 cAMP cGMP
Effects of dehydrocorydaline on cyclic
nucleotide concentration in rabbit platelets in vitroDING Shun，LI He，FAN Xin-tian
【Abstract】 Objective：To study Effects of dehydrocorydaline(DHC) on cAMP and cGMP concentration in rabbit platelets in vitro. Methods: Radioimmunoassay method was used. Results: DHC increased cAMP concentration in rabbit platelets in vitro and decrease concentration in rabbit platelets. Conclusion: DHC may inhibit platelet aggregation through increasing cAMP and decreasing cGMP concentration in rabbit platelets.
【Key words】 Dehydrocorydaline；Platelet aggregation；cAMP；cGMP
脱氢紫堇碱（dehydrocorydaline，DHC）系从罂粟科植物延胡索块茎中提得的一种季胺碱。有文献报道，DHC有抗心肌缺血和抗心律失常的作用，亦有实验证明DHC体内和体外给药对ADP和胶原诱导的血小板聚集都有抑制作用。本文通过观察DHC体外给药对兔血小板中cAMP 和cGMP含量的影响以探讨DHC抑制血小板聚集的作用机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试剂 DHC由天津药物研究所提供，使用时用生理盐水配制。cAMP 和cGMP放射免疫分析药盒由北京原子能研究所提供。茶碱用生理盐水配制成0.27%溶液。枸橼酸钠用蒸馏水配制成38%溶液。三氯醋酸用蒸馏水配制成15%溶液。水饱和乙醚：用分液漏斗使适量乙醚与水混合，然后充分振荡3分钟，静置10分钟，弃去分液漏斗内的水层。如此进行3次，留已饱和水的乙醚备用。EDTA—生理盐水溶液：将EDTA（乙二胺四乙酸钠盐）用生理盐水配制成0.1%溶液备用。磷酸缓冲液（PBS）：用生理盐水溶解磷酸氢二钾和磷酸二氢钾配制成0.02M PBS。
1.1.2 仪器及器材 放射免疫分析仪器使用国产FJ-2101G双道液体闪烁计数仪。凡接触血小板的实验用玻璃器皿及注射器针头均用甲苯-硅油溶液硅化。
1.2 方法
1.2.1 标本的采集 选择体重为2.2～3.8kg的健康家兔，雌雄各半，随机分组。实验用家兔禁食水12小时后，在乌拉坦（1g/kg）腹腔麻醉下，剥离左颈总动脉，切开该动脉后沿向心端插入硅胶管，管的另一端连接注射器，注射器事先装入枸橼酸钠溶液0.5ml，采血4.5ml，即按9:1体积比例抗凝。
1.2.2 富血小板血浆（plasma of rich platelet，PRP）的制备 取上述样本以1 000rpm离心8分钟，取起上清液，计数血小板。
1.2.3 贫血小板血浆（plasma of poor platelet，PPP）的制备 将PRP再以4 000rpm离心15分钟，取起上清液，计数血小板。
1.2.4 血小板浓缩液（platelet concentrate，PC）的制备 制备过程中的沉淀用EDTA—生理盐水液悬浮，洗涤3次，最后一次弃上清液，悬浮血小板于1.0ml 0.02M PBS中，其血小板数（统计30只兔每ml中所含血小板数）为（0.651×109±0.086×109）个。
1.2.5 待测样本的制备 去1.0 ml PC，加入200μl不同剂量的药物或生理盐水，37℃培育15分钟，再加入15%三氯醋酸0.5ml。2小时后，用水饱和乙醚振荡提取3次，去水饱和乙醚后，样品在65～72℃下烘干，然后冰冻保存备用。
1.2.6 样品的测定 ①cAMP测定：应用蛋白结合分析法。整个反应都在冰水浴中进行，将（0.8×6）cm的试管编号浴入冰水中，反应液总体积为150μl。加入结合蛋白后轻轻摇匀，培育2～4小时后，按要求加入吸附剂50μl，摇匀，立即以3 500rpm离心6～7分钟，吸取上清液120μl，置测量杯中，加入1.5ml无水乙醇，再加闪烁液3.5ml，盖严摇匀，在液体闪烁计数仪上测定放射性，求出样品中实际cAMP含量。数据(下转第180页)
作者单位：吉林化纤集团公司职工医院内科，吉林 吉林 132012